林曉斌 郭華 林麗云 白露

血型不規(guī)則抗體是指ABO血型系統(tǒng)以外其他血型系統(tǒng)（如Rh、MNS及Lewis血型系統(tǒng)）的抗體，多為IgG型抗體，易導致急性或遲發(fā)性輸血反應，是導致溶血性輸血反應、新生兒溶血癥、紅細胞輸注無效及輸血科疑難交叉配型的主要原因之一[1-3]。隨著輸血技術的不斷發(fā)展和完善，輸血前血型較準確地鑒定能有效地減少甚至杜絕了ABO血型不合所導致的輸血不良反應，但由不規(guī)則抗體所引起的溶血性輸血反應等多種輸血不良反應時有發(fā)生，嚴重危害患者生命安全，已成為目前引起輸血不良反應的關鍵因素，但不同地區(qū)和人群不規(guī)則抗體類型分布存在很大差異[4-7]。因此，不同地區(qū)加強輸血前不規(guī)則抗體及特異性分布檢查是臨床輸血安全和優(yōu)化用血管理的保證，對提高臨床輸血安全性具有重要意義。為此，本研究對深圳市人民醫(yī)院19 270例擬輸血住院患者的不規(guī)則抗體及特異性進行了調查分析，旨在了解本地區(qū)住院患者不規(guī)則抗體篩查陽性率及特異性分布特點，并探討其臨床意義，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年2月-2019年12月在深圳市人民醫(yī)院住院擬輸血患者19 270例，納入標準：（1）符合臨床輸血適應證；（2）有輸血指征；（3）住院患者；（4）有完整的臨床資料信息（如有無輸血和/或妊娠史）。排除標準：（1）嚴重肝、腎功能不全；（2）近1個月內應用免疫抑制劑及糖皮質激素類藥物；（3）不能確定是否有輸血者；（4）目前正在輸血者。本研究已經醫(yī)院倫理委員會同意批準，所有患者或家屬均對本研究知情并簽訂知情同意書。其中男7 950 例，女11 320例；年齡2～78歲，平均（41.02±18.65）歲；有輸血或妊娠史10 681例，無輸血及妊娠史6 506例，有輸血及妊娠史2 083例。

1.2 方法

儀器與試劑：不規(guī)則抗體檢測試劑盒、抗體鑒定譜細胞及微柱凝膠檢測卡均由長春博德生物技術有限公司提供；Diana全自動血型鑒定儀、孵育器及離心機均由西班牙Grifol公司提供。

采用一次性真空采血管采集擬輸血住院患者靜脈血2～3 ml于EDTA-K2抗凝管內，顛倒充分混勻后及時送檢。

收到標本后于室溫下離心5 min（離心半徑18 cm，3 000 r/min），分離血漿。采用微柱凝膠技術檢測血漿中不規(guī)則抗體，分別取50 μl抗體篩選細胞和25 μl患者血漿于凝膠各孔中，37 ℃孵育15 min，然后離心9 min，判定結果。對不規(guī)則抗體篩查陽性結果標本，采用抗體鑒定譜細胞進行特異性分析，取抗人球蛋白微柱凝膠11孔，于每孔中加入50 μl對應譜細胞和25 μl患者血漿，37 ℃孵育15 min，然后離心9 min，判定結果，根據(jù)譜細胞反應判定抗體特異性。所有操作均嚴格按照微柱凝膠卡片法操作說明書進行。

結果判定：（1）不規(guī)則抗體篩查結果判定。紅細胞與相應的抗體結合并于凝膠柱的中上層出現(xiàn)凝聚者為陽性；紅細胞未與相應的抗體結合并于凝膠柱的底層發(fā)生聚集現(xiàn)象者為陰性。（2）不規(guī)則抗體特異性結果判定。患者血漿與自身細胞無凝聚，而與部分抗體鑒定譜細胞出現(xiàn)凝聚者為特異性抗體；患者血漿與抗體鑒定譜細胞和自身細胞均出現(xiàn)凝聚者為非特異性抗體，并以反應格局與相應抗原反應的陰、陽性來判斷其具體類型。

1.3 統(tǒng)計學處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件進行分析和處理，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不規(guī)則抗體篩查結果

19 270例擬輸血住院患者中共檢出不規(guī)則抗體陽性103例，陽性率為0.53%（103/19 270）；其中男性為0.21%（17/7 950），女性為0.76%（86/11 320），女性不規(guī)則抗體陽性率明顯高于男性，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；有輸血及妊娠史患者不規(guī)則抗體陽性率高于有輸血或妊娠史患者、無輸血及妊娠史患者，且有輸血或妊娠史患者高于無輸血及妊娠史患者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1、表2。

表1 不規(guī)則抗體篩查結果

2.2 不同臨床科室不規(guī)則抗體陽性率比較

103例不規(guī)則抗體陽性患者中，風濕免疫科檢出率最高，占1.03%（29/2 815），其次為腫瘤科、消化內科及血液科，分別占0.72%（20/2 778）、0.57%（18/3 168）及0.51%（8/1 572），不同臨床科室患者不規(guī)則抗體陽性率比較差異有統(tǒng)計學意義（χ2=15.905 4，P<0.01），見表 2。

表2 不同臨床科室不規(guī)則抗體陽性率比較

2.3 103例不規(guī)則抗體陽性患者抗體特異性分布

103 例不規(guī)則抗體陽性患者中鑒定出89例特異性抗體，占86.41%（89/103），主要為Rh血型系統(tǒng)，占65.05%（67/103），以抗-E檢出率最高為37.86%；其次為MNS血型系統(tǒng)，占11.65%（12/103），以抗-M檢出率最高為6.80%；非特異性抗體14例，占13.59%（14/103），以自身抗體+同種抗體檢出率最高為5.83%，見表3。

3 討論

血型不規(guī)則抗體是指抗-A和抗-B以外的其他血型系統(tǒng)抗體，大多數(shù)是機體在妊娠或/和同種異體輸血等因素刺激作用下產生的，可引起血型鑒定和交叉配血困難，也可引起紅細胞輸注無效、新生兒溶血病、免疫溶血性輸血反應及自身免疫性溶血性疾病等多種輸血不良反應，對患者的臨床輸血安全造成很大影響[8]。因此，根據(jù)《臨床輸血技術規(guī)范》明確規(guī)定，對交叉配血不合、有輸血史、妊娠史及短期內接受多次輸血者，應做不規(guī)則抗體篩查及特異性鑒定，并給予輸注相合的血液或成分血，避免輸注含有相應抗原的紅細胞而導致無效輸血，甚至危及患者生命[9]。

有研究表明，每輸1 U紅細胞、血漿，被動免疫的風險增加1%～2%，多次反復輸血后機體產生同種抗體概率上升至15%～20%，且女性由于妊娠等原因產生不規(guī)則抗體的機會進一步升高[10]。同時不同地區(qū)因疾病種類、妊娠及輸血情況等諸多因素的不同，不規(guī)則抗體篩查陽性率之間存在一定差異。本研究結果顯示，深圳市人民醫(yī)院19 270例擬輸血住院患者共檢測出不規(guī)則抗體陽性103例，陽性率為0.53%，明顯低于牛懷瑛等[11]報道陜西延安地區(qū)的2.53%，與鄭興平[12]報道貴州地區(qū)的0.45%基本一致，而明顯高于Song等[13]報道陜西西安地區(qū)的0.30%、葉柳筠[2]報道廣西柳州地區(qū)的0.1%，這除了與以上不同因素有關外，還可能與各地機構在不時間內所收集的患者不同有關。本次結果還顯示，女性不規(guī)則抗體陽性率明顯高于男性，且同時有輸血及妊娠史患者不規(guī)則抗體陽性率明顯高于有輸血史或妊娠史患者，而有輸血史或妊娠史患者高于無輸血史或妊娠史患者，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），說明輸血和妊娠是導致患者產生不規(guī)則抗體的兩大因素，而女性同時存在著輸血和妊娠雙重被動免疫機會，使得女性不規(guī)則抗體陽性率明顯高于男性[14-15]。

表3 103例不規(guī)則抗體陽性患者抗體特異性分布

不同臨床科室因所收治的患者不同，所以不同科室患者的不規(guī)則抗體陽性率存在很大差異。本研究結果顯示，不規(guī)則抗體陽性率最高的科室是風濕免疫科，這可能與風濕免疫科的多數(shù)患者存在自身免疫功能紊亂、循環(huán)免疫復合物增多及反復輸注血制品等因素有關；其次為腫瘤科、消化內科和血液科，這可能與這些科室的患者一般需要長期反復輸血有關，反復輸注血液制品是產生不規(guī)則抗體的主要原因之一[16]。

有研究表明，Rh血型系統(tǒng)抗體多為IgG抗體，可與輸入體內有相應抗原的紅細胞結合產生抗原抗體反應，破壞輸入體內的紅細胞，引起溶血性輸血反應[6]。另外，IgG類抗體可通過胎盤進入胎兒血液，若母嬰Rh血型不合，就會導致母親產生Rh不規(guī)則抗體進入胎兒血液，從而引起嚴重的新生兒溶血病，是引起免疫性溶血反應最常見的不規(guī)則抗體[17-18]。本研究結果顯示，103例不規(guī)則抗體中檢出Rh血型系統(tǒng)抗體67例，占65.05%，其中以抗-E為主占37.86%（39例），這可能除了與我國漢族人群E抗原的分布頻率較高約為47%，而輸血時未檢測獻血者及受血者的E抗原，隨機輸血從而使抗-E產生的機會明顯增多有關外，還可能與近年來我國普遍進行RhD定型試驗，并實行RhD同型輸注，避免抗-D產生，從而導致抗-E成為常見不規(guī)則抗體等有關，已有不少文獻報道抗-E能引起的遲發(fā)型溶血和新生兒溶血反應[10]，因此，建議將RhE定型試驗作為輸血前常規(guī)檢查，并實行RhE同型輸注，這樣有利于降低抗-E的產生，也可避免輸血不良反應的發(fā)生。MNS血型系統(tǒng)抗體占11.65%（12例），以抗-M最為常見占6.80%（7例），其多為IgM抗體，在手術低溫麻醉狀態(tài)下易被激活抗體效應，可引起溶血反應[19]。Lewis血型系統(tǒng)抗體占6.80%（7例），以抗-Lea最為常見，僅有少數(shù)能引發(fā)免疫反應，但一般不引起嚴重溶血反應[20]。同時本研究還檢出3例Rh血型系統(tǒng)和其他稀有血型系統(tǒng)聯(lián)合抗體，另外非特異性抗體占13.59%（14例），主要見于自身抗體合并同種抗體，對此可通過除去自身抗體后再進行血型、同種抗體鑒定及交叉配血；其次冷抗體，其通過與紅細胞發(fā)生凝集并結合補體而引起溶血[21-23]，對高效價冷抗體輸血患者，應采用加溫儀將血液加溫至37 ℃后方可輸注。

綜上所述，血型不規(guī)則抗體是目前引起輸血不良反應的主要原因，因此，加強輸血前不規(guī)則抗體篩查是減少輸血不良反應發(fā)生的必要途徑，特別對有反復輸血史、妊娠史及自身免疫功能紊亂的患者更加引起重視。對檢出能引起輸血不良反應的不規(guī)則抗體，應及時選擇抗體對應抗原陰性的同型血進行輸注，而對于非特異性抗體應采取相應的措施進行處理后再進行輸注，以減少輸血不良反應，確保臨床輸血安全。