方凌毓 童小梅 傅春燕 許景林 陳冬梅

壞死性小腸結(jié)腸炎是多發(fā)于新生兒時(shí)期的嚴(yán)重消化道疾病，也是導(dǎo)致早產(chǎn)兒、低體質(zhì)量?jī)核劳龅闹匾?。疾病初期無(wú)其他特異性癥狀，常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查在診斷壞死性小腸結(jié)腸炎中缺乏特異性，導(dǎo)致行腹部X線確診時(shí)病情已處于危重狀態(tài)[1-2]。鈣衛(wèi)蛋白是反映急性炎癥反應(yīng)的標(biāo)志物，而糞便中的鈣衛(wèi)蛋白（fecal calprotectin，F(xiàn)C）是中性粒細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白，與腸道炎癥間存在密切聯(lián)系，其水平的高低可反映腸道炎癥的嚴(yán)重程度，因其具有較高的敏感性及特異性，可將其用于評(píng)估腸道疾病嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)[3-4]?；诖耍狙芯糠治鯢C在早產(chǎn)兒壞死性小腸結(jié)腸炎中的應(yīng)用效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年3月-2019年9月筆者所在醫(yī)院新生兒科收治的早產(chǎn)兒壞死性小腸結(jié)腸炎（NEC）患兒25例作為觀察組。NEC診斷標(biāo)準(zhǔn)：按照文獻(xiàn)[5]《實(shí)用新生兒學(xué)》（第4版）修正Bell分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷和分期，選擇Ⅱ期及以上的病例作為確診病例。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)，伴有體溫不穩(wěn)定、呼吸暫停、血小板降低、代謝性酸中毒；胃內(nèi)殘奶量增加，糞便中帶血，腸鳴音消失，大便潛血陽(yáng)性，腹部壓痛明顯；腹部X線平片顯示腸充氣或功能性梗阻，或腸壁囊樣積氣，或門靜脈積氣。排除標(biāo)準(zhǔn)：存在其他消化系統(tǒng)疾??；合并其他系統(tǒng)感染性疾病者。其中男14例，女11例；出生胎齡29～35周，平均（31.86±1.06）周；出生體重（1 473.29±68.44）g；疾病嚴(yán)重程度：Ⅱ級(jí)16例，Ⅲ級(jí)9例。另選取同期住院的無(wú)胃腸道疾病早產(chǎn)兒按出生胎齡、出生體重和入院時(shí)間進(jìn)行1∶1配對(duì)，共25例作為對(duì)照組，男12例，女13例；出生胎齡29～35周，平均（31.72±1.13）周；出生體重（1 556.42±59.38）g。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本研究對(duì)象家屬均簽署知情同意書(shū)

1.2 方法

觀察組患兒于禁食24h、72 h及重新開(kāi)奶時(shí)留取糞便樣本，對(duì)照組僅留取觀察組患兒禁食24 h和開(kāi)奶同日的糞便樣本，糞便量0.5～1.0 g，所有收集的糞便樣本均放入無(wú)菌塑料管中，隨后將糞便樣本放置于-70 ℃冰箱（美國(guó)Thermo Scientific公司）內(nèi)無(wú)菌密封冷凍，從-70 ℃低溫冰箱內(nèi)將糞便樣本取出，于室溫下解凍，將裝有3 ml稀釋液的15 ml離心管連同采樣勺一起稱重，刮取50 mg糞便樣本，放入裝有稀釋液的離心管中，隨后將樣本放置于型號(hào)為QL-901渦旋混合儀上，待樣本無(wú)明顯塊狀時(shí)放置于德國(guó)Heraeus公司生產(chǎn)的離心機(jī)內(nèi)行離心處理，設(shè)置離心機(jī)轉(zhuǎn)速為5 000 r/min，離心處理5 min后留取上層清液。取50 μl上層清液放置于700 μl稀釋液中，于1.5 ml EP試管中，充分混勻。另取90 μl至FC檢測(cè)卡，計(jì)時(shí)15 min后進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)所得結(jié)果×4.5即為實(shí)際FC濃度，若檢測(cè)值<15 μg/g（低濃度樣本），建議稀釋5倍，結(jié)果×5×15/50（1.5）即為FC濃度；若檢測(cè)值>2 100 μg/g（高濃度樣本），建議稀釋60倍，結(jié)果×60×15/50（18）即為FC濃度。

1.3 觀察指標(biāo)

檢測(cè)觀察組在禁食24、72 h及重新開(kāi)奶時(shí)的FC水平，分別表示為FC1、FC2、FC3，于觀察組患兒禁食24 h和開(kāi)奶同日檢測(cè)對(duì)照組FC濃度，分別表示為FC1、FC3；對(duì)比禁食時(shí)觀察組及對(duì)照組FC水平，比較觀察組不同疾病分期患兒在禁奶24、72 h及重新開(kāi)奶時(shí)FC水平；采用ROC曲線分析FC在早產(chǎn)兒壞死性結(jié)腸炎中的診斷價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組FC水平比較

觀察組FC1水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），兩組FC3水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組FC水平比較 [μg/g，（±s）]

表1 兩組FC水平比較 [μg/g，（±s）]

組別 FC1 FC3觀察組（n=25） 2 547.34±784.39 130.76±43.28對(duì)照組（n=25） 180.50±25.37 134.36±56.73 t值 15.079 -0.252 P值 <0.001 0.802

2.2 觀察組不同分期FC水平比較

觀察組Ⅲ期FC1、FC2水平均高于Ⅱ期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），不同分期FC3水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表 2。

表2 觀察組不同分期FC水平比較 [μg/g，（±s）]

表2 觀察組不同分期FC水平比較 [μg/g，（±s）]

分期 FC1 FC2 FC3Ⅱ期NEC（n=16） 2 504.48±639.22 735.21±106.37 129.86±38.54Ⅲ期NEC（n=9） 4 382.29±803.16 1 972.38±92.48 138.30±45.39 t值 -6.433 -29.180 -0.439 P值 <0.001 <0.001 0.626

2.3 診斷價(jià)值

繪制FC濃度診斷早產(chǎn)兒壞死性小腸結(jié)腸炎的ROC曲線，截?cái)嘀禐? 174.95 μg/g，靈敏度為92%，特異度為92%，約登指數(shù)為84%，曲線下面積為0.941，見(jiàn)圖1。

圖1 FC的ROC曲線

3 討論

目前，對(duì)于早產(chǎn)兒壞死性小腸結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制暫無(wú)明確定義，認(rèn)為壞死性小腸結(jié)腸炎的發(fā)生與未發(fā)育成熟的腸道上皮細(xì)胞及對(duì)各種損傷因素間產(chǎn)生的不可控性級(jí)聯(lián)炎癥反應(yīng)存在密切聯(lián)系[6]。由于早產(chǎn)兒壞死性小腸結(jié)腸炎早期病情無(wú)典型癥狀，傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢查在診斷壞死性小腸結(jié)腸炎中缺乏特異性及敏感性，而行常規(guī)腹部X線檢查在確診時(shí)病情已發(fā)展為危重期[7-8]。故早期診斷及治療干預(yù)對(duì)改善患兒預(yù)后具有重要作用。

醫(yī)學(xué)研究顯示，炎癥反應(yīng)與壞死性小腸結(jié)腸炎的發(fā)生存在密切聯(lián)系[9]。正常生理?xiàng)l件下，維持人體腸道內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定需保持抗炎及促炎間處于平衡狀態(tài)。一旦發(fā)病，抗炎及促炎間的平衡將被打破，在促炎因子等作用下，炎癥細(xì)胞將在腸道黏膜中逐漸聚集、趨化，最終引發(fā)腸道損傷。鈣衛(wèi)蛋白是從中性粒細(xì)胞中分離出來(lái)的一種具有抗微生物作用的蛋白，與鈣離子結(jié)合后具有較好的抗蛋白酶活性。故鈣衛(wèi)蛋白結(jié)構(gòu)不會(huì)被細(xì)菌或各種酶所破壞，可在外界環(huán)境及腸腔內(nèi)得到長(zhǎng)時(shí)間保存，同時(shí)保持其狀態(tài)穩(wěn)定[10]。此外，鈣衛(wèi)蛋白在人體內(nèi)分布較為廣泛，于血清、糞便、腦脊液等組織中均檢測(cè)到，在臨床上多用于診斷炎癥性腸病。壞死性結(jié)腸炎是與腸道炎癥反應(yīng)密切相關(guān)的疾病，當(dāng)腸道炎癥反應(yīng)發(fā)生時(shí)，中性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞極易滲出腸腔，使得炎癥細(xì)胞因子水平明顯上升，加之新生兒自身腸道屏障發(fā)育不成熟，腸道通透性較高，大大增加腸腔中中性粒細(xì)胞數(shù)量[11-12]。本研究結(jié)果顯示，觀察組FC水平高于對(duì)照組，表明患兒在發(fā)生腸道炎癥時(shí)，中性粒細(xì)胞向腸腔排出量明顯增多，釋放出大量的鈣衛(wèi)蛋白，使得FC水平較高。FC水平在疾病早期出現(xiàn)明顯上升現(xiàn)象，在懷疑患兒為壞死性小腸結(jié)腸炎時(shí)，可通過(guò)對(duì)FC水平的測(cè)定明確病情。觀察組Ⅲ期FC1、FC2水平均高于Ⅱ期，且不同分期FC3水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示FC水平隨著病情嚴(yán)重程度的增加而增加，禁食后隨著胃腸道的恢復(fù)，F(xiàn)C水平明顯下降，故可將FC水平的測(cè)定作為腸道損傷嚴(yán)重程度及恢復(fù)的指標(biāo)，可有效避免因長(zhǎng)時(shí)間禁食導(dǎo)致的生長(zhǎng)發(fā)育遲緩等，同時(shí)還可避免過(guò)早腸內(nèi)喂養(yǎng)所引發(fā)的腸道損傷加重病情。FC值為1 174.95 μg/g時(shí)，在早產(chǎn)兒壞死性結(jié)腸炎診斷中敏感度和特異度均92%，曲線下面積為0.941。由此可見(jiàn)，對(duì)FC水平實(shí)施動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)疾病，同時(shí)還可用于評(píng)判疾病的治療效果。

綜上所述，對(duì)早產(chǎn)兒實(shí)施動(dòng)態(tài)FC監(jiān)測(cè)，有助于盡早發(fā)現(xiàn)壞死性小腸結(jié)腸炎，同時(shí)可給予輔助評(píng)判疾病的治療效果，從而預(yù)測(cè)重新腸內(nèi)喂養(yǎng)時(shí)機(jī)，具有較高的推廣價(jià)值。