呂 可，趙前程，劉婧懿，馬子禎，徐永平，馬永生

( 1.大連海洋大學 食品科學與工程學院，遼寧 大連 116023；2.大連理工大學 生物工程學院，遼寧 大連 116024 )

水產(chǎn)品為人類提供了17%的動物蛋白攝入，其中約50%來自水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。2014年世界水產(chǎn)品養(yǎng)殖產(chǎn)量為7.380×107t，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)對人類水產(chǎn)品消費的貢獻首次超過野生水產(chǎn)品捕撈[1]。我國是世界第一水產(chǎn)養(yǎng)殖大國，2018年全國水產(chǎn)養(yǎng)殖量為4.991×107t，水產(chǎn)養(yǎng)殖量占世界總量的60%以上[2]。然而，集約化養(yǎng)殖模式不可避免帶來養(yǎng)殖環(huán)境污染和水產(chǎn)動物病害頻發(fā)的問題。全國每年因病害造成的水產(chǎn)養(yǎng)殖經(jīng)濟損失約為150億元，并以細菌性疾病為主，約占全部病害經(jīng)濟損失的50%以上[3]。

長期以來，水產(chǎn)養(yǎng)殖動物細菌性病害的防治主要依賴于抗生素(包括人工合成抗菌藥物)。據(jù)統(tǒng)計，1996—2013年我國水產(chǎn)養(yǎng)殖中曾報道使用的抗生素有8大類，共計20個品種，目前有11個品種被批準允許應用于水產(chǎn)養(yǎng)殖[4-5]。但抗生素的大量使用，帶來了水產(chǎn)品藥物殘留、細菌耐藥性和環(huán)境污染等突出問題。研發(fā)新型抗生素替代品乃迫切之需，一些具有潛在應用前景的抗生素替代品相繼被開發(fā)應用，如寡聚糖、益生菌、天然植物提取物及噬菌體等。

噬菌體是一類細菌性病毒，其中烈性噬菌體在感染宿主菌后能在較短時間內(nèi)完成復制周期，并裂解宿主菌釋放子代病毒顆粒，從而達到抗菌效果。噬菌體是一種極具潛力的抗生素替代品，且已在陸生動物和水生動物病害防治中顯示出良好的應用前景。與傳統(tǒng)的抗生素相比，噬菌體具有專一性強、可自我復制增殖、來源豐富、篩選方便等突出優(yōu)勢。筆者綜述了目前國內(nèi)外噬菌體在魚、蝦、貝類等水產(chǎn)動物病害防治中的最新研究概況、存在的問題及解決策略，旨在為我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展綠色生態(tài)防控技術提供新思路。

1 噬菌體在水產(chǎn)養(yǎng)殖動物病害防治中的應用研究

早在20世紀80年代，Wu等[6]首先提出用噬菌體防治嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)，并證實了噬菌體的體外殺菌效果，但并未通過動物體內(nèi)試驗驗證。Nakai等[7]首次研究了噬菌體對黃條(Seriolaaureovittata)幼魚格氏乳球菌(Lactococcusgarvieae)感染的治療效果。試驗先對黃條腹腔注射格氏乳球菌攻毒，隨后立即腹腔注射1.6×107pfu的噬菌體PLgY-16，10 d后病魚的存活率由10%升至100%，可見噬菌體具有顯著治療效果。隨后，噬菌體被陸續(xù)嘗試用于防治香魚(Plecoglossusaltivelis)冷水病[8]、大西洋鮭(Salmosalar)殺鮭氣單胞菌(A.salmonicida)感染[9]、斑節(jié)對蝦(Penaeusmonodon)發(fā)光病[10]，以及皺紋盤鮑(Haliotisdiscushannai)[11]和仿刺參(Apostichopusjaponicus)弧菌病[12]等，相關代表性研究見表1。

迄今，大多數(shù)研究是以人工攻毒感染的動物為模型，再將噬菌體以口服、浸浴、腹腔或肌肉注射等方式給藥，后根據(jù)動物的發(fā)病率或存活率來判斷噬菌體的防治效果。如在魚類養(yǎng)殖中，Park等[13]對香魚口服變形假單胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)攻毒后，立即飼喂PPpW-3、PPpW-4兩種噬菌體的混合物，兩周后香魚死亡率從65.0%降至22.5%；Higuera等[14]用5×105cfu/mL鰻弧菌(Vibrioanguillarum)Va PF4對大西洋鮭進行浸浴攻毒，同時按感染復數(shù)為1和20的劑量加入噬菌體CHOED，魚的存活率由7%升至100%。在對蝦養(yǎng)殖中，Karunasagar等[10]針對哈維氏弧菌(V.harvey)引起的對蝦發(fā)光弧菌病，在攻毒后每隔1 d用2×106pfu/mL噬菌體Viha10和Viha8浸浴，斑節(jié)對蝦幼體存活率與抗生素治療組相比由65%升至88%。在貝類養(yǎng)殖中，李太武等[11]對皺紋盤鮑足部肌肉注射河流弧菌(V.flauvialis)進行攻毒，同時以感染復數(shù)為10的劑量注射噬菌體，7 d后與對照組相比，皺紋盤鮑的死亡率由70%降至20%。總體可見，噬菌體能顯著提高攻毒感染動物的存活率，具有較顯著的防治效果。

但也有個別研究顯示噬菌體對魚類病害無防治效果。Verner Jeffreys等[9]以被殺鮭氣單胞菌攻毒感染的大西洋鮭為模型，將3株噬菌體O、R、B混合制成“雞尾酒”制劑，再對魚進行飼喂、浸浴和腹腔注射噬菌體，均未能降低大西洋鮭的死亡率?？梢?，影響噬菌體體內(nèi)作用效果的因素較為復雜，對噬菌體治療失敗的原因尚有待深入研究。

表1 噬菌體防治水產(chǎn)養(yǎng)殖動物細菌性疾病的研究Tab.1 Application of bacteriophages in treatment of bacterial diseases in animals in aquaculture

2 噬菌體療法尚存在的問題及解決策略

2.1 噬菌體的裂解宿主譜窄

噬菌體裂解細菌的作用，具有嚴格的宿主特異性，一般僅限于細菌分類學上“種”的界限之內(nèi)，大多噬菌體僅對某種細菌里的某些特定株有裂解作用，這種專一性要求噬菌體在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應用時需預先建有能涵蓋各種病原菌的噬菌體庫，且能夠快速診斷出病原及其噬菌體易感性。

目前解決噬菌體裂解譜窄的常見方法是“雞尾酒”法，即將針對同種宿主菌的幾株不同噬菌體混合后聯(lián)合應用，如用于控制肉制品中李斯特菌(Listera)的LixtexTMP100為6株單增李斯特菌(L.monocytogenes)噬菌體的混合物[24]。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，仿刺參“化皮病”的病原也具有多樣性的特點，如燦爛弧菌(V.splendidus)、溶藻弧菌及殺鮭氣單胞菌等均曾被證實能引起仿刺參化皮，但目前噬菌體用于仿刺參化皮的研究僅針對弧菌，尚未見將不同宿主的噬菌體混合后使用。

值得注意的是，自然界分離到的少數(shù)噬菌體株具有寬譜特性，這在腸桿菌和葡萄球菌噬菌體中較為常見。一些弧菌噬菌體也顯示出寬譜特性，如噬菌體KVP40能同時裂解8種弧菌，其中包括副溶血弧菌、溶藻弧菌和燦爛弧菌等，甚至能跨出“屬”的界限裂解鰒發(fā)光桿菌(Photobacteriumleiognathid)[25]；與此類似，鰻弧菌噬菌體CHOED也能裂解病海魚弧菌(V.ordalii)[14]?？梢姡Y選寬譜噬菌體也是解決噬菌體宿主譜的一種可行方案。

此外，噬菌體的特異性基于其尾絲蛋白與宿主菌表面受體的專一性結合，對噬菌體進行基因工程改造，特別是其尾絲蛋白部分，也能有效拓寬其宿主譜。如T2噬菌體僅能裂解7%的大腸桿菌分離株，利用同源重組的方法將T2尾絲蛋白基因gp37和gp38與另一株寬譜噬菌體IP008替換，這種改造后的T2噬菌體宿主譜明顯變寬，能裂解33%的大腸桿菌分離株[26]。

2.2 病原菌易對噬菌體產(chǎn)生抗性

細菌易對噬菌體產(chǎn)生抗性，這可能是限制噬菌體作用效果的關鍵因素。噬菌體完成一個復制周期需經(jīng)吸附、核酸注入、核酸復制、基因轉(zhuǎn)錄與蛋白質(zhì)生物合成、裝配及釋放幾個步驟，宿主菌阻礙其中任一步驟即可產(chǎn)生抗性，如阻礙噬菌體吸附、抑制噬菌體核酸注入、切割噬菌體核酸及流產(chǎn)感染系統(tǒng)等[27]。

在體外培養(yǎng)物中，噬菌體抗性菌株在數(shù)小時或數(shù)日內(nèi)即可出現(xiàn)。將多株噬菌體混合后的“雞尾酒”法雖能有效延緩噬菌體抗性菌株的產(chǎn)生，但仍難以完全消除培養(yǎng)物中的宿主菌。與持留菌對抗生素耐藥類似[28]，筆者推斷細菌群體中存在一小部分生長緩慢、代謝活動弱的亞群，雖未發(fā)生基因抗性突變，但對噬菌體不敏感。這些持留菌接種到新的培養(yǎng)基中可再次生長起來，又呈現(xiàn)出大部分細菌能夠被噬菌體殺死，僅有一小部分存活下來的情況。

不過在水產(chǎn)動物體內(nèi)環(huán)境下，病原菌會遇到復雜多樣的選擇性壓力，如營養(yǎng)缺乏、其他微生物競爭及宿主免疫防御等，噬菌體抗性菌株并不易出現(xiàn)。Nakai等[7]從經(jīng)噬菌體處理的黃條體內(nèi)分離的所有格氏乳球菌對噬菌體PLgY-16依然敏感；與此類似，Park等[13]從經(jīng)噬菌體處理后但仍然病死的香魚體內(nèi)也未分離出噬菌體抗性突變菌株。這也提示體內(nèi)細菌在沒有發(fā)生抗性突變的情況下也能逃避噬菌體的裂解，單一應用噬菌體難以完全清除體內(nèi)病原菌。

值得注意的是，某些細菌的毒力因子也是噬菌體的吸附受體，如脂多糖、外膜蛋白或莢膜等。致病菌株可以通過受體突變?nèi)笔Щ蚪Y構變化對噬菌體產(chǎn)生抗性，這時會伴隨著毒力下降，或?qū)股馗用舾?，表現(xiàn)出進化生物學中的權衡現(xiàn)象。如變形假單胞菌野生分離株對香魚的半致死劑量為101.2cfu/尾，而噬菌體抗性突變株對香魚的半致死劑量>104cfu/尾，毒力顯著降低，但具體原因并未闡明[13]。Chan等[29]研究發(fā)現(xiàn)，噬菌體OMKO1以銅綠假單胞菌外排泵Mex AB-OprM上的外膜通道蛋白OprM為吸附受體，在噬菌體的選擇壓力下，銅綠假單胞菌OprM基因突變，外排泵功能喪失，導致對幾種抗生素類藥物的敏感性增加，這為噬菌體與抗生素組合使用提供了理論依據(jù)。

2.3 噬菌體的給藥途徑

水產(chǎn)養(yǎng)殖中噬菌體的給藥途徑有腹腔或肌肉注射、通過飼料口服以及浸浴，針對一些體表外傷，也有涂抹法[15]。但注射、涂抹給藥方式可操作性差，可行的給藥途徑是通過飼料口服或浸浴。

口服噬菌體首先需要解決胃酸屏障問題。除少數(shù)噬菌體(如λ噬菌體)對酸有較強耐酸性外，大部分噬菌體對酸敏感，一般在pH<3.0時迅速失活。與陸生動物相比，魚的胃液pH相對較高，特別是一些幼魚，如黃條幼魚胃液pH在5.2～6.0間變化[7]，口服噬菌體能夠穩(wěn)定穿過胃酸屏障。但對一些胃液酸性較強的魚類而言[如虹鱒(Oncorhynchusmykiss)，靜息狀態(tài)下胃液pH為2.7[30]，口服噬菌體易遭胃液破壞而喪失抗菌活性。在陸生動物中，目前解決胃酸屏障的方法有2種:(1)使用抗酸劑中和胃酸，如CaCO3、Mg(OH)2等，或用雷尼替丁和奧美拉唑等藥物來抑制胃酸分泌[31]；(2)對噬菌體進行微囊化包埋，Ma等[32-33]曾用靜電振動噴嘴—離子絡合凝膠法分別制備出海藻酸鈣/殼聚糖微球、海藻酸鈣/乳清蛋白微球以及摻雜CaCO3無機微粒的海藻酸鈣微球，成功用于噬菌體Felix O1和噬菌體K的包埋，有效解決了口服噬菌體在動物胃腸環(huán)境中的穩(wěn)定性問題。這幾種微球在水產(chǎn)養(yǎng)殖動物中的應用是筆者所在團隊目前正在進行的工作。

口服噬菌體一般主要針對動物胃腸道感染，但噬菌體不能黏附或定殖于動物腸道中，故很快會被排出體外。不過，也有部分噬菌體可穿過動物腸黏膜進入循環(huán)系統(tǒng)，如口服變形假單胞菌噬菌體PPpW-3和PPpW-4能進入香魚循環(huán)系統(tǒng)，并轉(zhuǎn)運到達腸、腎、脾等組織器官，消減感染組織中的病原菌；與此類似，口服噬菌體A5/80可以進入大鼠血液循環(huán)，不過口服T4卻不能[31]?？诜删w從動物腸道進入循環(huán)系統(tǒng)的機制目前尚未完全闡明，可能是通過類似細菌腸道移位的過程實現(xiàn)，且決定噬菌體能否移位的因素包括多個方面，如噬菌體衣殼蛋白的序列，與腸道免疫細胞的相互作用等[34]。

然而口服給藥對處育苗階段或感染后不攝食的水產(chǎn)養(yǎng)殖動物難以適用，浸浴法是另一種較為理想的給藥方式。水體中噬菌體易與目標宿主菌株碰撞吸附，這對控制通過皮膚和鰓組織侵染的水產(chǎn)致病菌更具優(yōu)勢。不過，目前這種方法僅限于實驗室環(huán)境下封閉水體中的應用，是否適應于大規(guī)模開放水域還有待進一步研究。

2.4 噬菌體的給藥劑量

噬菌體能夠自我復制增殖，若噬菌體在一個裂解周期內(nèi)產(chǎn)生200個子代病毒顆粒，那么理論上它將以200n方式進行指數(shù)增殖[35]，這意味著單次給藥即可實現(xiàn)理想治療效果；而抗生素類小分子藥物由于體內(nèi)的代謝消除作用[36-37]，一般需重復多次給藥方可達到藥效。Smith等[38]曾以經(jīng)大腸桿菌(O18ac:H7:K1)攻毒感染的小鼠為模型，證實了單劑量噬菌體治療效果顯著優(yōu)于多劑量的抗生素，其中包括氨芐青霉素、四環(huán)素、氯霉素和磺胺異惡唑。

但很多研究發(fā)現(xiàn)，噬菌體感染復數(shù)越大，對動物保護效果愈佳，在低劑量時常無防治效果。Zhang等[12]將PVA1和PVA2兩株噬菌體混合后，對仿刺參進行腹腔注射，在感染復數(shù)分別為10、1、0.1時，可將攻毒感染仿刺參的存活率由3%分別提升至73%、50%和47%。Madsen等[39]向虹鱒幼苗腹腔注射104cfu/尾嗜冷黃桿菌(Flavobacteriumpsychrophilum)，再腹腔注射104pfu/尾噬菌體FpV-9，未能提高魚的存活率。這些研究均表明，噬菌體在低劑量給藥時無治療效果，可能的解釋是體內(nèi)環(huán)境下的大多數(shù)宿主細菌處于生長緩慢或停滯的生理狀態(tài)，噬菌體對其吸附感染能力下降，僅能通過初級感染方式完成殺菌作用?？梢?，噬菌體合理給藥劑量目前仍難以確定，而這有待于未來噬菌體在不同水產(chǎn)動物體內(nèi)藥代動力學特征的闡明。

2.5 噬菌體的給藥時間

噬菌體的治療效果與其給藥時間密切相關，一般動物感染后噬菌體制劑應用越早，存活率越高。在動物感染后期，噬菌體的治療效果很有限。Nakai等[7]對黃條腹腔注射格氏乳球菌攻毒，并于攻毒后0、1、24 h分別腹腔注射1.6×107pfu/尾劑量的噬菌體PLgY-16進行治療，10 d內(nèi)感染魚的存活率分別為100%、80%和50%。與此類似，鹵蟲(Artemiafranciscana)無節(jié)幼體被副溶血性弧菌感染后立即加入噬菌體Vpms1，其存活率為88%；但攻毒后延遲5 h加入噬菌體，鹵蟲存活率則僅為5.8%[40]。近年Roach等[41]提出了“免疫噬菌體協(xié)同作用”的概念，并證實噬菌體治療小鼠銅綠假單胞菌感染需要其非特異免疫系統(tǒng)的協(xié)助。據(jù)此，筆者推測動物自身的免疫系統(tǒng)可能對噬菌體防治效果發(fā)揮關鍵作用，在感染后期，動物免疫功能低下或受損，噬菌體治療難以奏效。

此外，噬菌體病毒顆粒難以進入動物細胞內(nèi)，而在感染后期，某些病原菌能侵入胞內(nèi)逃避噬菌體的裂解，如遲鈍愛德華氏菌(Edwardsiellatarda)、沙門氏菌(Salmonella)、結核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)等。目前一種可行的解決策略是以減毒宿主菌作為載體將噬菌體導入胞內(nèi)，如以減毒恥垢分支桿菌(M.smegmatis)為載體，攜帶噬菌體TM4進入巨噬細胞，可顯著降低小鼠脾臟巨噬細胞內(nèi)的分支桿菌數(shù)量[42]，但這種方法還有待于在其他噬菌體及宿主系統(tǒng)中驗證。

2.6 噬菌體在水產(chǎn)動物中的藥代動力學特征尚未闡明

噬菌體是一種依賴宿主菌、能自我復制的病毒顆粒，它在魚體內(nèi)的吸收分布規(guī)律及代謝動力學特征目前尚未完全闡明。與抗生素小分子藥物相比，噬菌體在動物體內(nèi)抗菌作用過程中具有兩個顯著特點：一是噬菌體能夠在體內(nèi)自我復制增殖；二是噬菌體作為異源物質(zhì)具有免疫原性，可能會刺激魚機體產(chǎn)生免疫反應，產(chǎn)生的抗體可能會對噬菌體產(chǎn)生消除作用。這兩個特征致使噬菌體的體內(nèi)吸收分布規(guī)律及代謝動力學特征難以被準確描述。Payne等[43]建立了預測噬菌體體內(nèi)群體動力學的數(shù)學模型，指出噬菌體初始給藥劑量、治療時間及宿主菌密度是決定治療成敗的關鍵，但此模型是基于噬菌體的體外生長數(shù)據(jù)，是否適用于動物體內(nèi)尚有待進一步驗證。

與高等脊椎動物相似，魚類免疫組織包括分布于胸腺、脾臟等器官中的系統(tǒng)淋巴組織和存在于腸、鰓等器官中的黏膜淋巴組織[44]。對哺乳動物的研究發(fā)現(xiàn)，腹腔注射噬菌體會刺激機體產(chǎn)生抗體，且影響噬菌體的體內(nèi)裂菌效果[45]。最近研究發(fā)現(xiàn)，口服噬菌體能刺激小鼠腸黏膜免疫應答產(chǎn)生分泌型抗體IgA，顯著降低了噬菌體活性[46]。此外，機體網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)也能將噬菌體從循環(huán)系統(tǒng)中清除[47]。但魚機體的免疫反應對體內(nèi)噬菌體的吸收分布及消除過程的影響還是個未知問題。有研究發(fā)現(xiàn)，香魚口服或肌內(nèi)注射變形假單胞菌噬菌體PPpW-3、PPpW-4后，血清中均未檢出能中和噬菌體的抗體，其原因可能是這些噬菌體分離株對香魚的免疫原性低，或是給藥劑量過低[13]。

同種宿主不同噬菌體間的免疫原性相差很大，如大腸桿菌T4噬菌體免疫原性大于T1和T5[48]，這提示，可以針對某特定宿主菌篩選出免疫原性較低的噬菌體。Merril等[47]就曾采用體內(nèi)連續(xù)傳代的方法，篩選出能在循環(huán)系統(tǒng)長期存活的噬菌體突變株，這為解決噬菌體免疫原性問題提供了思路。此外，目前蛋白類藥物可通過聚乙二醇修飾的方法降低免疫原性，從而延長藥物在體內(nèi)的半衰期；與此類似，Kim等[49]用單甲氧基聚乙二醇修飾噬菌體后，也能有效延長噬菌體在血液中的循環(huán)時間并阻止其被免疫系統(tǒng)快速清除。

值得提出的是，對一些缺乏特異性免疫系統(tǒng)的低等水產(chǎn)養(yǎng)殖動物，如仿刺參，噬菌體應用時受宿主免疫系統(tǒng)影響較小。Li等[50]研究發(fā)現(xiàn)，噬菌體能通過浸浴途徑進入仿刺參體腔液并較長時間滯留，且活性不受超氧化物歧化酶和溶菌酶等非特異性免疫因子的影響。

2.7 噬菌體應用的安全性問題

噬菌體在自然界中無處不在，凡有原核生物活動的地方幾乎都發(fā)現(xiàn)有相應的噬菌體存在，據(jù)估計地球生物圈中噬菌體數(shù)目高達1030～1032個[51]，尤其以海洋中的噬菌體數(shù)目和種類最多，如在表層海水中噬菌體的豐度達到近107個/mL，是細菌豐度的5～25倍[52]。此外，人和動物體內(nèi)就寄居著各種噬菌體，如人的胃腸道、尿道、皮膚以及口腔中均有噬菌體存在[53-54]。因此，噬菌體是人或動物體內(nèi)的正常共棲生物體，安全性毋庸置疑。目前已有多個噬菌體產(chǎn)品被美國食品藥品監(jiān)督管理局認定為公認安全級產(chǎn)品，如荷蘭Micreos Food Safety公司的ListexTMP100[24]，美國Intralytix公司的SalmoFreshTM等[55]。

但是，部分溫和噬菌體攜帶一些編碼毒力因子的結構基因，可整合到宿主菌的基因組上，賦予其產(chǎn)毒能力，如霍亂弧菌(V.cholerae)和擬態(tài)弧菌(V.mimicus)的主要毒力因子霍亂毒素就是由絲狀噬菌體CTXΦ攜帶的ctxAB基因所編碼[56]；且溶源性霍亂弧菌中的前噬菌體CTXΦ在受到外界理化因素誘導后，可脫離宿主產(chǎn)生成熟的噬菌體顆粒CTXΦ，它又會侵染新的無毒菌株，這樣就造成了ctxAB基因在菌株間的水平擴散。同樣，目前還在哈維弧菌和副溶血弧菌中發(fā)現(xiàn)有溶源性噬菌體，且哈維弧菌對斑節(jié)對蝦的致病性也與噬菌體相關[57]。另外，溫和噬菌體還通過轉(zhuǎn)導作用傳遞抗生素耐藥基因[58]。因此，在應用噬菌體之前需對噬菌體的基因組進行測序，以排除噬菌體攜帶毒素基因或抗生素耐藥基因的可能性；同時，也可通過噬菌體是否攜帶阻遏蛋白和整合酶基因來初步判斷其溶源性。

目前可采用基因工程手段將溫和噬菌體改造為烈性噬菌體。Dedrick等[59]為侵染膿腫分枝桿菌(M.abscessus)的溫和噬菌體，通過基因工程手段將其阻遏蛋白基因gene45敲除后，使其喪失溶源能力而變?yōu)榱倚允删w；此株噬菌體最近被首次用來治療人分枝桿菌感染，可讓患者癥狀明顯緩解[60]。

噬菌體將體內(nèi)感染病灶處革蘭氏陰性細菌裂解后，短時間內(nèi)引起細胞外膜層內(nèi)毒素的大量釋放，這對哺乳動物而言，存在產(chǎn)生內(nèi)毒素血癥的風險。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，脂多糖常被用來提高魚類的非特異免疫力，但超過安全劑量時同樣對水產(chǎn)養(yǎng)殖動物具有較強毒性作用[61]。Verner Jeffreys等[9]給大西洋鮭腹腔注射噬菌體懸液，其中內(nèi)毒素含量達106～107EU/mL，并未發(fā)現(xiàn)對魚產(chǎn)生不良影響，這可能是由于不同菌種來源的內(nèi)毒素性質(zhì)不同，且不同水產(chǎn)動物對內(nèi)毒素的敏感性也存在差異。

一些噬菌體突變株能感染殺死細菌，但未引起細胞裂解。如T4噬菌體表達穿孔素的基因t發(fā)生琥珀突變后(此突變株命名為LysD)，穿孔素不能正常表達，無法在細胞膜上形成跨膜孔，這樣裂解酶不能穿過細胞膜到達肽聚糖層發(fā)揮溶菌作用，也就避免了內(nèi)毒素的釋放[62]。噬菌體LysD能有效治療小鼠大腸桿菌性腹膜炎，并降低炎癥因子腫瘤壞死因子-α和白細胞介素-6的水平，這為一些水產(chǎn)用噬菌體的基因工程改造提供了新思路。

3 結論與展望

為適應我國漁業(yè)轉(zhuǎn)方式、調(diào)結構的發(fā)展要求，并從根本上解決水產(chǎn)品的質(zhì)量安全問題，2017年我國農(nóng)業(yè)部開始在部分地區(qū)實施“漁藥減量行動”，著力推進水生動物病害防控方式向綠色、生態(tài)和環(huán)保的方向轉(zhuǎn)變。在此背景下，噬菌體作為抗生素替代品應用于水產(chǎn)養(yǎng)殖以顯示出其獨特優(yōu)勢和巨大潛力。但若將噬菌體像抗生素一樣規(guī)?；茝V使用，仍有諸多問題需要解決。如噬菌體在不同水產(chǎn)動物體內(nèi)的藥代動力學特征亟需闡明，以科學確定噬菌體的給藥方式、給藥劑量和給藥時間；噬菌體是否會介導毒力或抗生素耐藥基因轉(zhuǎn)移到非靶細菌上。噬菌體若作為生物制品投入市場，需要通過國家藥監(jiān)部門嚴格的監(jiān)管批準，同時也要考慮消費者對噬菌體處理產(chǎn)品的接受程度。