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        烏拉特前旗地區(qū)沙芥總黃酮提取方法對比研究

        2020-11-19 11:50:26烏仁格格高子舒余靖冉河套學院內(nèi)蒙古巴彥淖爾015000
        化工管理 2020年31期
        關鍵詞:全草定容容量瓶

        烏仁格格 高子舒 余靖冉(河套學院,內(nèi)蒙古 巴彥淖爾 015000)

        0 引言

        沙芥又名沙蘿卜、沙蓋,蒙名額樂森·老邦,是沙區(qū)人民喜愛的野菜之一,其根、莖、葉均可食用,風味獨特,營養(yǎng)保健價值高,有“沙漠人參”之稱[1]。此外沙芥也是天然的中藥、蒙藥,主要含有礦物質(zhì)、糖類、維生素、氨基酸、黃酮、生物堿等化學成分[2]。沙芥的莖和幼葉富含水,幼苗時的沙芥、沙芥籽含有大量油脂,可飼養(yǎng)生活在沙區(qū)的野生動物,牛羊等畜類也喜食,可作為牛羊等動物春冬兩季的好飼料,同時對維護沙區(qū)生態(tài)平衡也起到了不可磨滅的作用[3]。本實驗是對巴彥淖爾市烏拉特前旗地區(qū)沙芥總黃酮的提取方法進行對比研究,確定適于提取烏前旗沙芥總黃酮的可行性方法,為烏前旗沙芥開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

        1 材料與儀器

        將已清洗并自然風干的野生沙芥全草放入粉碎機至2/3 處粉碎;再過60 目篩得試樣。樣品于2017 年8 月從內(nèi)蒙古巴彥淖爾市烏拉特前旗沙地采集得。電子分析天平(FA10048 型上海市安亭電子儀器廠)、旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮儀器有限公司)、數(shù)顯恒溫水域鍋(HH-2 國華電器有限公司)、紫外分光光度計(SP-1920UV 型上海光譜儀器有限公司)、循環(huán)水式多用真空泵(SHB-III 型鄭州長城科工貿(mào)有限公司)、各類玻璃儀器。蘆丁(合肥博美藥劑有限公司)為生化試劑,其他試劑為分析純。

        2 實驗方法

        2.1 標準曲線的繪制

        稱取蘆丁標樣10.00mg 加入80%乙醇溶液溶解,并定容至50mL。分別精確移取0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL標準溶液于25mL 容量瓶,加入1.0mL5% NaNO2溶液,搖勻靜置8min;再加入1.0mL10% Al(NO3)3溶液,搖勻靜置8min;最后加4.0mL 2mol/L NaOH 溶液,用80%乙醇溶液定容至25mL 容量瓶中,搖勻靜置15min,備用。通過紫外分光光度計測得蘆丁標準溶液在510nm 處有最大吸收峰,將上述六份溶液于510nm下測OD 值,繪制標準曲線,得回歸方程[4]。

        2.2 精密度測定試驗

        精確移取蘆丁標準溶液2mL,平行六份,測其吸光度,按標準曲線方法測定蘆丁含量[4]。

        2.3 加樣回收率測定試驗

        準確稱取沙芥全草粉末0.5g,平行三份,分別加入適量蘆丁對照品,按2.1 中方法處理,測其OD 值,計算回收率[4]。

        2.4 提取方法

        2.4.1 堿提酸沉法

        準確稱取1.000 g 沙芥全草粗粉加100mL 蒸餾水煮沸。邊攪拌邊緩慢加入石灰石水溶液將體系pH 調(diào)節(jié)至8~9,微沸20~30min,趁熱過濾。收集濾渣于250mL 錐形瓶中,重復上述操作,趁熱過濾。合并兩次濾液于250mL 錐形瓶中在60~70℃下用HCl 溶液調(diào)節(jié)pH 至5.0,靜置24h,抽濾。沉淀物連同濾紙放在燒杯中,加入30mL 80%乙醇溶液放置3h[5]。抽濾后將濾液濃縮,用80%乙醇定容至25mL 容量瓶中,得提取液。

        2.4.2 乙醇熱回流法

        準確稱取1.000g 沙芥全草粗粉加80%的乙醇30mL,在80℃溫度條件下回流提取1h,抽濾。重復本操作3 次,合并濾液蒸餾濃縮,用80%乙醇溶液定容至25mL 容量瓶中,得提取液。

        2.4.3 甲醇熱回流法

        操作同乙醇熱回流法,溶劑為80%的甲醇。

        2.4.4 超聲波提取法

        準確稱取沙芥全草粗粉1.000g 加30mL 80%的甲醇;在超聲波震蕩器中震蕩1h,抽濾[6]。濾渣重復上述步驟2 次,合并濾液,蒸餾濃縮,用80%乙醇定容至25mL 容量瓶中,得提取液。

        2.4.5 熱水浸提法

        準確稱取沙芥全草粗粉1.000g 于250mL 錐形瓶中,加100mL蒸餾水,在95℃溫度條件下用恒溫水浴鍋保溫浸提6h,然后加熱蒸餾濃縮,用80%乙醇溶液定容至25mL 容量瓶中,得提取液[5]。

        2.5 總黃酮提取含量測定

        每個方法平行提取四組,分別精密移取1mL 提取液,按照2.1 方法顯色測定OD 值,根據(jù)標準曲線計算總黃酮提取含量。

        式中:C 為待測樣內(nèi)總黃酮濃度(mg/mL);V 為總體積(mL);m 為沙芥原料質(zhì)量(g)。

        3 結果與分析

        3.1 標準曲線繪制

        以吸光度為縱坐標,濃度為橫坐標,在波長510nm 下測定吸光度,繪制標準曲線,得線性回歸方程為:A=10.5685C-0.0024,R 值為0.9994。

        3.2 精密度和加樣回收率測定試驗

        精密度測定結果如表1 所示,計算得RSD 為0.79%,說明精密度良好、重復性良好。加樣回收率測定結果見表2,計算得平均回收率為98.4%,RSD 為1.11%,說明準確度良好,方法可靠。

        表1 精密度測定試驗結果

        表2 加樣回收率測定試驗結果

        3.3 不同提取方法對沙芥全草總黃酮提取含量的影響

        采用甲醇熱回流法、乙醇熱回流法、堿提酸沉法、超聲波提取法、熱水浸提法等5 種方法對沙芥全草中總黃酮進行了提取,提取效果如表3 所示。

        表3 不同提取方法得沙芥全草總黃酮提取含量

        由表3 中數(shù)據(jù)可知,不同提取方法提取沙芥全草總黃酮含量排序為:堿提酸沉法>乙醇熱回流法>超聲波提取法>甲醇熱回流法>熱水浸提法;且RSD 值表明重復性均良好。

        五種方法中堿提酸沉法提取含量最高,能有效的提取沙芥中總黃酮,但其實驗步驟較為復雜,試劑藥品消耗量大,實驗條件苛刻且用到的溶劑具有強烈腐蝕性,實驗重復偏差相對較高,因此不適宜作為最佳提取方法。熱水浸提法具有操作簡單,溶劑易得的優(yōu)點;但實驗溫度要求高,平均提取含量為3.29mg/g,與堿提酸沉法比提取含量低了16.9%,且實驗所需時間長,一般不常用于總黃酮的提取。超聲波提取法、甲醇熱回流法和乙醇熱回流法相對于堿提酸沉法來說操作簡單,實驗重復性良好;其中超聲波提取法提取時間最短,但對儀器有要求,實驗成本高;甲醇熱回流法操作與乙醇熱回流法相同,但其提取劑甲醇有一定毒性;而乙醇熱回流法提取含量較高,且還具有實驗原理易懂,使用后的乙醇可回收再利用等優(yōu)點。因此提取沙芥全草總黃酮可將乙醇熱回流法作為最佳提取方法。

        4 結語

        結果表明:在烏拉特前旗地區(qū)沙芥總黃酮的提取方法對比實驗中,乙醇熱回流法是最佳提取方法,平均提取含量為3.58mg/g。該方法具有操作簡單,原理易懂,提取含量高,儀器簡易,用時較短,溶劑乙醇無毒無害,方便回收等優(yōu)點。賈彥峰等[6]測定沙芥葉片總黃酮含量的研究得結果為;堿提酸沉法>超聲波提取法>乙醇(甲醇)回流提取法>熱水浸提法,其結果與本研究有較大差異,原因可能是試樣產(chǎn)地、采集時間不同,賈彥峰[6]等采用的是沙芥葉片,本研究采用沙芥全草為試樣。

        通過本研究可知,巴彥淖爾市烏拉特前旗地區(qū)沙芥全草中總黃酮含量較可觀,建議在今后研究中對本地區(qū)沙芥總黃酮乙醇回流提取法作進一步工藝優(yōu)化以提高總黃酮的提取含量;為進一步分離、鑒定黃酮單體成分和其生物活性成分提供最優(yōu)提取方案??傮w來看,沙芥是一種值得去開發(fā)利用的藥用和食用植物資源。

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