陳如兵 樓柯浪 吳曉俊 張春椿

1 浙江省中醫(yī)藥研究院 浙江 杭州 310007

2 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 浙江 杭州 310053

前胡是傘形科前胡屬多年生草本植物白花前胡Peucedanum praeruptorum Dunn的干燥根，其味苦、辛，微寒，具有降氣化痰，散風(fēng)清熱。隨著臨床藥用逐漸加大，野生資源瀕臨枯竭。本研究旨在探究種源與肥料對(duì)前胡的影響，為探究更適合前胡的種植方式提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器：Alliance e2695高效液相色譜儀（waters公司）；PDA FLR檢測(cè)器（waters公司）；KQ2200DA型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；AR224CN型電子分析天平［奧豪斯儀器（上海）有限公司］。

1.2 試劑：白花前胡甲素、白花前胡乙素（純度均≥98.50%，購(gòu)于曼思特生物科技公司）；甲醇（色譜純）；三氯甲烷、二乙胺等均為分析純，水為去離子。

2 方法

2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)：大田試驗(yàn)于2018～2019年間進(jìn)行，試驗(yàn)田位于浙江省杭州市淳安縣臨岐鎮(zhèn)。試驗(yàn)田按兩部分內(nèi)容同時(shí)展開。第一部分：一年生抽薹前胡種子、兩年生抽薹前胡種子、野生前胡種子以及使用前胡殘留根；第二部分：CK（不施肥）、施復(fù)合肥、施有機(jī)肥。播種時(shí)間為2018年三月春播，播種方式為條播，播種時(shí)間為一年，采收時(shí)測(cè)定小區(qū)產(chǎn)量，轉(zhuǎn)換成每公頃產(chǎn)量。

2.2 白花前胡甲素和白花前胡乙素的測(cè)定：分述如下。

2.2.1 色譜條件：C18色譜柱，柱溫為25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為321nm，流動(dòng)相為A（甲醇）及B（水）兩相等度（75：25）洗脫，流速為1.0ml/min，采用PDA FLR檢測(cè)器。理論板數(shù)按白花前胡甲素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000[1]。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取白花前胡甲素6mg，置于10ml棕色容量瓶中，加甲醇制成0.6mg/ml白花前胡甲素對(duì)照品的溶液；同上方法制備得到0.6mg/ml的白花前胡乙素對(duì)照品溶液，并都存于4℃冰箱備用。

2.2.3 線性關(guān)系考察：取標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml，5ml，10ml，15ml，20ml分別置于20ml容量瓶中，加甲醇定容搖勻，按“2.2.1”色譜條件項(xiàng)下進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別得到白花前胡甲素和白花前胡乙素的回歸方程：白花前胡甲素Y=22381X-233494，R2=0.9999，線性范圍 36～720μg/ml和白花前胡乙素Y=17048X-171386，R2=0.9999，線性范圍36～720μg/ml。

2.2.4 精密度考察：精密取對(duì)照品溶液，按“2.2.1”色譜條件項(xiàng)測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素的RSD分別為為0.16%和1.28%，表明儀器的精密度良好。

2.2.5 穩(wěn)定性考察：取同一供試品溶液，分別在0，2，4，8，12，24h時(shí)按“2.2.1”色譜條件項(xiàng)測(cè)定，結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素的RSD分別為為0.52%和0.91%，表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.6 重復(fù)性考察：精密稱取前胡樣品6份，按“2.2.1”色譜條件項(xiàng)測(cè)定，結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素的RSD分別為為0.27%和1.41%，表明該方法重復(fù)性好。

2.2.7 加樣回收考察：精密稱取前胡樣品6份，分別加入不同含量的白花前胡甲素和白花前胡乙素對(duì)照品，制得3份不同濃度的樣品，并且每個(gè)平行3份，按“2.2.1”色譜條件項(xiàng)測(cè)定，結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素RSD分別為0.73%和1.46%，表明方法準(zhǔn)確度好。

2.2.8 樣品含量測(cè)定：取干燥的前胡樣品細(xì)粉約0.50g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷25ml，塞密，稱定重量，超聲處理10min，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液5ml，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。進(jìn)樣前用0.45μm的微孔濾膜過濾，得供試品溶液。取供試品溶液10μl進(jìn)樣，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各樣品中白花前胡甲素和白花前胡乙素的量。

2.3 數(shù)據(jù)處理：采用Excel2019、SPSS 25.0和Graph‐pad prism 8軟件分析作圖。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同種源與不同肥料對(duì)前胡產(chǎn)量的影響：由圖1可以看出，野生組的產(chǎn)量明顯低于其他組別，其次是兩年生組，而一年生和殘留根無顯著性差異，可見還是正常一年生的前胡種子產(chǎn)量相對(duì)較大；不施肥的CK組產(chǎn)量明顯低于施肥組，復(fù)合肥產(chǎn)量稍低于有機(jī)肥組，可見施肥有助于提高前胡的產(chǎn)量，有機(jī)肥的產(chǎn)量提高相對(duì)較高。

圖1 不同種源與不同肥料對(duì)前胡產(chǎn)量的影響

3.2 不同種源與不同肥料對(duì)前胡有效成分含量的影響：結(jié)果見圖2。種子年限對(duì)白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量存在著一定的影響，年限增大兩者含量有相應(yīng)的降低，其中對(duì)白花前胡乙素的影響較大。野生組白花前胡甲素的含量大于一年生組，同為一年生種子來源的殘留根組白花前胡甲素含量與一年生組無顯著性差異，CK組的白花前胡甲素含量遠(yuǎn)高于施肥的兩組。殘留根組與兩年生組的白花前胡乙含量明顯低于低于其他組別?？梢姺乱吧耘嗄芟鄬?duì)有效的增加前胡有效成分的含量，兩年生的種子與殘留根栽培的方式無利于前胡有效成分的積累，施肥也會(huì)一定程度降低前胡有效成分的積累。

4 討論

有效成分是評(píng)價(jià)中藥材質(zhì)量?jī)?yōu)劣的中藥指標(biāo)之一[2]，產(chǎn)量是影響中藥材經(jīng)濟(jì)效益的重要因素，因此本文通過測(cè)量前胡的有效成分與產(chǎn)量探究不同種源以及不同肥料對(duì)前胡的影響，從而尋求一種相對(duì)合適的前胡種植方式。不同的種源以及不同肥料，都會(huì)對(duì)中藥材有效成分的合成產(chǎn)生一定的影響，導(dǎo)致中藥材質(zhì)量產(chǎn)生差異。[3-6]本研究結(jié)果顯示，不同的種源對(duì)白花前胡乙素的影響較大，對(duì)有效成分總含量表現(xiàn)為野生＞一年生＞殘留根＞兩年生，其中一年生組與殘留根組無顯著性差異，野生組有效成分含量雖高但產(chǎn)量偏低，整體表現(xiàn)常規(guī)一年生種子仍然存在一定優(yōu)勢(shì)，筆者推測(cè)前胡種子年限增加不利于有效成分積累以及產(chǎn)量的提高。本文還考察了不同肥料對(duì)前胡藥材的影響，結(jié)果還表明了，施不施肥對(duì)白花前胡乙素的含量無顯著性差異，不施肥情況下白花前胡甲素的含量卻又顯著性增高，但不施肥情況下產(chǎn)量卻不盡人意。筆者推測(cè)肥料的施加可能會(huì)影響白花前胡甲素的積累。綜上所述，針對(duì)野生種子組以及不施肥組的有效成分總含量都相對(duì)較高的情況，筆者推測(cè)仿野生栽培模式可能更有利于前胡藥材的質(zhì)量的提升，對(duì)于仿野生栽培的研究需要更深一步的探討。

圖2 不同種源與不同肥料對(duì)前胡有效成分含量的影響