紀錢萍，李 偉，佟長青

（大連海洋大學 食品科學與工程學院，遼寧大連 116023）

研究表明，全世界的高血壓患者已占世界總人口的1/3，并且患病比例逐年增加[1]。其中，腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)在高血壓的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用，血管緊張素-II 能夠導致血壓的暫時升高[2]。血管緊張素轉化酶（ACE） （EC 3.4.15.1）催化血管緊張素I 轉變成具有活性的血管緊張素II。抑制ACE 活性的物質往往具有潛在的抑制高血壓發(fā)生的活性，因此常常利用抑制ACE 活性試驗來篩選這類物質。

肽類和多糖類物質的抗高血壓作用有很多研究報道[3-5]。前期研究證明了牡蠣多糖對高血壓模型Wistar 大鼠的降血壓活性[6]。結合企業(yè)的生產(chǎn)實際，將大鯢肽與牡蠣多糖進行組合，制備成具有協(xié)同抗高血壓活性的復合粉，為其在保健食品中的應用提供基礎數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

大鯢活性肽，張家界（中國） 金馳大鯢生物科技有限公司提供；馬尿酰- 組氨酰- 亮氨酸（N-hippuryl-His-Leu hydrate，HHL）、血管緊張素轉化酶（Angiotensin converting enzyme，ACE），美國Sigma 公司提供；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

牡蠣多糖按照石璇等人[6]的方法制備。

1.2 儀器與設備

高效液相色譜儀，大連依利特分析儀器有限公司產(chǎn)品；Hypersil BDS C18色譜柱。

1.3 ACE 活性測定

將牡蠣多糖配制成質量濃度為8 mg/mL 的溶液，大鯢活性肽配制成質量濃度為2 mg/mL 的溶液，然后分別按照5∶1，3∶1，1∶1，1∶3，1∶5 體積比進行混合，制備成大鯢活性肽牡蠣多糖復合粉溶液。5∶1 復合粉溶液的牡蠣多糖質量濃度為6.67 mg/mL，大鯢肽質量濃度為0.33 mg/mL；3∶1 復合粉溶液的牡 蠣多糖質量濃度為6 mg/mL，大鯢肽質量濃度為0.5 mg/mL；1∶1 復合粉溶液的牡蠣多糖質量濃度為4 mg/mL，大鯢肽質量濃度為1 mg/mL；1∶3 復合粉溶液的牡蠣多糖質量濃度為2 mg/mL，大鯢肽質量濃度為1.5 mg/mL；1∶5 復合粉溶液的牡蠣多糖質量濃度為1.33 mg/mL，大鯢肽質量濃度為1.67 mg/mL。

使用大連依利特Hypersil BDS C18色譜柱，檢測波長設定為228 nm，進樣量20 μL，流速1 mL /min；流動相為30 %甲醇（0.1%三氟乙酸TFA 和0.05%冰醋酸，pH 值3.0～3.3）；柱溫為25 ℃。

在離心管中加入5 μL 樣品溶液和15 μL ACE（60 mU/mL） 混勻后于37 ℃條件下水浴5 min，之后加入25 μL HHL（7.6 mmol/L） 于37 ℃條件下水浴反應25 min，隨后加入10%三氟乙酸溶液10 μL用來終止反應，最后加入150 μL 超純水混勻。用1 mL 的注射器將反應液過0.22 μm 的過濾膜，于波長228 nm 處使用高效液相色譜紫外檢測器對濾液進行檢測，記錄出峰時間和面積，空白試驗用等體積的超純水代替樣品溶液。樣品溶液對ACE 活性的抑制率計算公式是：

式中：M——空白組馬尿酸的峰面積；

N——樣品中馬尿酸的峰面積。

2 結果與分析

2.1 大鯢活性肽ACE 抑制活性

通過大鯢活性肽ACE 抑制活性測定試驗，發(fā)現(xiàn)大鯢活性肽具有很好的抑制ACE 活性。

大鯢活性肽ACE 抑制活性見圖1。

由圖1 可知，在大鯢活性肽質量濃度5 mg/mL時，對ACE 抑制率達到75.78%，ACE 抑制率隨著大鯢活性肽質量濃度的增加而增加，具有質量濃度依賴性。大鯢活性肽是通過大鯢肉酶解制備的分子量小于2 000 Da 的肽，具有較好的抗氧化活性[7]。張江濤等人[8]研究林蛙低聚肽的抗氧化活性與ACE 抑制作用，發(fā)現(xiàn)林蛙低聚肽具有較好的抗氧化活性和ACE 抑制作用。

2.2 牡蠣多糖ACE 抑制活性

通過牡蠣多糖的ACE 抑制活性測定試驗，發(fā)現(xiàn)牡蠣多糖具有一定的抑制ACE 活性。

牡蠣多糖ACE 抑制活性見圖2。

由圖2 可知，在牡蠣多糖質量濃度9 mg/mL 時，對ACE 抑制率為33.40%，ACE 抑制率隨著牡蠣多糖質量濃度的增加而增加，具有質量濃度依賴性。石璇等人[6]的研究表明，牡蠣多糖對高血壓模型Wistar大鼠具有較好的降血壓活性。但是，在試驗質量濃度范圍內，牡蠣多糖抑制ACE 的活性并不強，這表明降血壓模型的不同會導致結果產(chǎn)生差異。另一方面，也說明牡蠣多糖與ACE 的活性部位的結合不是很緊密或者沒有結合于ACE 的活性部位。

3 大鯢活性肽牡蠣多糖復合粉的ACE 抑制活性

通過大鯢活性肽牡蠣多糖復合粉的ACE 抑制活性測定試驗，發(fā)現(xiàn)大鯢活性肽牡蠣多糖復合粉具有一定的抑制ACE 活性。

大鯢活性肽牡蠣多糖復合粉ACE 抑制活性見圖3。

由圖3 可知，在牡蠣多糖與大鯢活性肽溶液按體積比1∶1 混合時，即其中的牡蠣多糖質量濃度為4 mg/mL，大鯢活性肽的質量濃度為1mg/mL 時，對ACE 的抑制率達到61.27%，對照圖1 與圖2 的結果，可以看出牡蠣多糖與大鯢活性肽復合粉在抑制ACE 活性時產(chǎn)生了協(xié)同作用，一定質量濃度的牡蠣多糖與大鯢活性肽復合粉ACE 抑制率高于相應質量濃度的牡蠣多糖與大鯢活性肽的ACE 抑制率之和。

傳統(tǒng)降血壓藥卡托普利（Captopril） 是一種具有類多肽結構的ACE 抑制劑[9]。由此可見，多肽結構是ACE 抑制劑的潛在侯選對象。大鯢活性肽溶液與牡蠣多糖溶液混合，導致大鯢活性肽的空間結構發(fā)生變化，產(chǎn)生了更好的ACE 抑制活性。

4 結論

通過體外ACE 抑制作用試驗發(fā)現(xiàn)，大鯢活性肽具有較好的抑制ACE 作用，牡蠣多糖具有一定的抑制ACE 作用。大鯢活性肽牡蠣多糖復合粉在抑制ACE 活性時產(chǎn)生了協(xié)同作用，一定質量濃度的大鯢活性肽牡蠣多糖復合粉對ACE 抑制率高于相應質量濃度的大鯢活性肽與牡蠣多糖對ACE 抑制率之和。研究結果為下一階段對大鯢肽牡蠣多糖復合粉在協(xié)同抑制ACE 作用的機理研究提供了良好的基礎，也為具有降血壓作用的大鯢肽牡蠣多糖復合粉保健食品的開發(fā)提供了基礎數(shù)據(jù)。