申茂玉，曹利，趙杰，謝昕，朱雷，周凡，馮士彬，李玉，吳金節(jié)，阮崇美，辜麗川，王希春*

(1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，安徽 合肥 230036；2.上海比瑞吉寵物用品股份有限公司，上海 201100；3.安徽科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，安徽 鳳陽 233100；4.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)信息與計(jì)算機(jī)學(xué)院，安徽 合肥 230036)

隨著生活水平的提高，飼養(yǎng)寵物犬的家庭越來越多，但由于大部分寵物主人的飼養(yǎng)管理經(jīng)驗(yàn)不足，對寵物疾病防治缺乏了解，導(dǎo)致在臨床上寵物犬泌尿道疾病的發(fā)病率呈上升趨勢。泌尿系統(tǒng)疾病是寵物犬的高發(fā)病之一，其中膀胱炎尤為常見[1]。膀胱炎是指膀胱黏膜及黏膜下層的炎癥，是常見的犬下尿路感染性疾病[2]，臨床癥狀有尿頻、尿痛、尿液混濁帶血伴有氨臭味，尿沉渣檢測多見紅細(xì)胞、白細(xì)胞、膀胱上皮細(xì)胞，B超影像可顯示膀胱壁腫脹增厚或表面粗糙皺樣變化[2]。引發(fā)膀胱炎的病因有很多，如尿路的細(xì)菌感染；膀胱結(jié)石或尿潴留過度壓迫膀胱壁造成膀胱機(jī)械性刺激及損傷；腎炎、輸尿管炎等鄰近器官的炎癥蔓延；有毒物質(zhì)或強(qiáng)烈藥物刺激等[3]。犬膀胱炎的治療一般通過抗菌消炎藥、利尿、止血止痛或清熱利濕的中藥等對癥治療，當(dāng)寵物犬出現(xiàn)泌尿系統(tǒng)疾病時(shí)，積極遵醫(yī)囑配合治療的，同時(shí)要改善飼養(yǎng)管理，保證安靜無刺激驚嚇的環(huán)境，給予充足的水分，飲食上選用高營養(yǎng)無刺激易消化的犬糧，適當(dāng)限制高蛋白質(zhì)的食品。調(diào)整飲食結(jié)構(gòu)減少對泌尿道的刺激和負(fù)擔(dān)，以防復(fù)發(fā)[4]。寵物犬出現(xiàn)泌尿系統(tǒng)疾病時(shí)，處方糧作為具有一定食療效果的犬糧，其輔助治療、方便快捷的特點(diǎn)被越來越多的寵物主人認(rèn)可，泌尿道處方糧針對性的添加改善泌尿系統(tǒng)問題的食療成份，作為寵物的“病號餐”能全面改善患犬飲食結(jié)構(gòu)，輔助泌尿系統(tǒng)疾病的治療。

為探究犬泌尿道處方糧對膀胱炎的防治調(diào)理效果，本試驗(yàn)通過對膀胱灌注75%的醫(yī)用酒精來建立犬膀胱炎癥的模型[5-8]，在建模的過程中飼喂泌尿道處方糧監(jiān)測其對發(fā)病期的干擾情況，并對膀胱炎模型犬飼喂處方糧探究其對膀胱炎的治療調(diào)理效果，為今后犬處方糧的臨床應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選取24只無泌尿系統(tǒng)病史的健康比格犬作為試驗(yàn)犬，公母各半，體重(13±1.5)kg，年齡(2±0.2)歲，購于南京亞東實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究開發(fā)中心公司。

1.2 犬糧選擇

普通犬糧、犬泌尿道處方糧，由上海比瑞吉寵物用品股份有限公司提供，處方糧的主要成分配比為粗蛋白質(zhì)≥19.0%、粗脂肪≥14.0%、粗纖維≤5.0%、粗灰分≤10.0%、鈣≥0.6%、總磷0.5%、賴氨酸≥0.63%、水溶性氯化物≥0.09%、水分≤10.0%，此外還添加了陳皮、茯苓、車前子、澤瀉及麥冬等中藥成分。

1.3 動(dòng)物分組與管理

在造模及預(yù)防調(diào)理試驗(yàn)中，將24只比格犬隨機(jī)分為對照組6只、預(yù)防組6只、造模組12只，試驗(yàn)前對所有試驗(yàn)犬只做臨床常規(guī)檢查后確定健康、精神狀態(tài)良好，并進(jìn)行體內(nèi)外驅(qū)蟲，疫苗免疫。每兩只試驗(yàn)犬在8 m2的半開敞犬舍內(nèi)圈養(yǎng)，以保證其正常的活動(dòng)量，整個(gè)試驗(yàn)過程全部飼喂犬糧，無其他食物投喂，飲用清潔水。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

對照組、造模組每只犬飼喂基礎(chǔ)犬糧35 g/(kg·d)，預(yù)防組每只犬飼喂泌尿道處方犬糧35 g/(kg·d)。采用75%的醫(yī)用酒精對造模組和預(yù)防組膀胱灌注建立犬的膀胱炎癥，每周1次，連續(xù)灌注兩次，每次每只0.6 mL/kg。第14天造模犬出現(xiàn)血尿、食少納呆，尿液中白細(xì)胞呈陽性，超聲檢查膀胱壁明顯增厚，即判定膀胱炎造模成功。保留對照組和造模組，將造模組平均分成自然組和治療組各6只，自然組犬飼喂普通犬糧35 g/(kg·d)，治療組犬飼喂泌尿道處方犬糧35 g/(kg·d)。試驗(yàn)期間沒有介入任何藥物，沒有飼喂其他食物，早晚飼喂犬糧各1次，自由飲水。

1.5 樣品的采集與處理

分別在試驗(yàn)開始的第0、7、14、21和28天，通過前肢靜脈采血，取新鮮EDTA抗凝血檢測血常規(guī)，將抗凝血以3 000 r/min離心3 min，取上層血漿檢測C反應(yīng)蛋白；取非抗凝血在室溫中傾斜放置30 min，以3 000 r/min離心10 min，取上清液用于檢測腎功能指標(biāo)與炎癥因子水平；收集第0、7、14、21和28天的尿液，以1 000 r/min離心5 min，取尿沉渣鏡檢。

1.6 指標(biāo)檢測

1.6.1 臨床癥狀

試驗(yàn)期間觀察犬的食欲、飲食量、飲水量、精神狀況、排尿量，觀察排尿姿勢、排尿次數(shù)、排尿量及尿液的感官狀態(tài)，并做記錄。

1.6.2 血液指標(biāo)

采用獸用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測定犬血常規(guī)各項(xiàng)指標(biāo)，用熒光C反應(yīng)蛋白分析儀檢測犬血漿中的C反應(yīng)蛋白(CRP)的濃度，將分離好的血清用BS-220全自動(dòng)生化分析儀檢測犬腎功能生化指標(biāo)檢查，用MK3型酶標(biāo)儀檢測犬血清中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素6(IL-6)的濃度。

1.6.3 尿液檢查

將當(dāng)天收集的尿液做尿液4項(xiàng)指標(biāo)(白細(xì)胞、pH、尿潛血和尿蛋白)檢測；對尿沉渣做Diff-Quik染色觀察尿沉渣中細(xì)胞情況。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件的獨(dú)立樣本將試驗(yàn)組不同試驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)的測定數(shù)據(jù)與對照組進(jìn)行比較，試驗(yàn)結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 各組犬的臨床表現(xiàn)

造模組和預(yù)防組犬只在75%的醫(yī)用酒精灌注后出現(xiàn)了精神不振，厭食，尿頻，尿液略微泛紅，舔舐生殖器，預(yù)防組在第5天癥狀減輕，正常飲水進(jìn)食。在第二次灌注后，造模組和預(yù)防組組犬體溫升高、尿頻，其中造模組公犬只出現(xiàn)生殖器滴血情況，尿淋漓，生殖器紅腫可見膿性分泌物，尿液渾濁呈暗紅色。

在治療調(diào)理階段，治療組犬只在飼喂處方糧后食量增加，飲水次數(shù)增多，精神狀態(tài)明顯轉(zhuǎn)好，尿頻、尿淋漓狀況開始緩解，排尿變得順暢，尿液變得清澈，自然恢復(fù)組犬精神倦怠、食欲差。尿液仍渾濁呈琥珀色，排尿時(shí)間長。第28天，治療組犬只的臨床癥狀基本消失，對照組癥狀略有緩解，但精神食欲較差，尿液仍渾濁并伴有刺鼻氨臭味。

2.2 血常規(guī)檢查

在預(yù)防調(diào)理試驗(yàn)中，第0天各組間指標(biāo)并無明顯差異；在第7天，造模組犬血液中紅細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白含量顯著降低(P<0.05)，造模組和預(yù)防組犬只血液中的白細(xì)胞數(shù)量顯著增高(P<0.05)，中性粒細(xì)胞數(shù)量極顯著增高(P<0.01)；第14天造模組的紅細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白含量均顯著低于對照組和預(yù)防組(P<0.05)，白細(xì)胞數(shù)顯著高于對照組和預(yù)防組(P<0.05)，中性粒細(xì)胞數(shù)極顯著高于對照組(P<0.01)，預(yù)防組中性粒細(xì)胞顯著高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 預(yù)防調(diào)理階段不同處理組犬血常規(guī)指標(biāo)的比較

治療調(diào)理試驗(yàn)階段，第14天自然組和治療組紅細(xì)胞和血紅蛋白含量均顯著低于對照組(P<0.05)，白細(xì)胞數(shù)顯著高于對照組(P>0.05)，中線粒細(xì)胞數(shù)極顯著高于對照組(P<0.01)；第21天 治療組紅細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白含量與對照組無顯著差異(P>0.05)，自然組紅細(xì)胞數(shù)仍顯著低于對照組和治療組(P<0.05)，血紅蛋白含量顯著低于對照組(P<0.05)，但與治療組無明顯差異(P>0.05)，自然組和治療組的白細(xì)胞數(shù)和中性粒細(xì)胞數(shù)仍顯著高于對照組(P>0.05)；第28天治療組和對照組各指標(biāo)均無顯著性差異(P>0.05)，自然組血紅蛋白含量顯著低于對照組和治療組(P<0.05)，紅細(xì)胞數(shù)顯著低于對照組(P<0.05)，中性粒細(xì)胞數(shù)極顯著高于對照組(P<0.01)，白細(xì)胞數(shù)顯著高于對照組和治療組(P<0.05)。見表2。

表2 治療調(diào)理階段不同處理組犬血常規(guī)指標(biāo)的比較

2.3 各組犬血清腎功能指標(biāo)的變化

預(yù)防調(diào)理階段，第0天各組指標(biāo)均無顯著差異，酒精灌注后7 d造模組尿素氮含量顯著高于對照組(P<0.05)，肌酐含量顯著高于對照組與治療組(P<0.05)；第14天造模組尿素氮、肌酐含量極顯著高于對照組(P<0.01)，預(yù)防組肌酐和尿素氮含量也略有升高但與對照組無顯著差異(P>0.05)。見表3。

表3 預(yù)防調(diào)理階段不同處理組犬腎功能指標(biāo)的比較

治療調(diào)理階段，第14天自然組和治療組尿素氮含量顯著高于對照組(P<0.05)，肌酐含量極顯著高于對照組(P<0.01)；第21～28天，自然組和治療組尿素氮、肌酐含量都有所降低，但自然組尿素氮含量顯著高于對照組和治療組(P<0.05)，自然組和治療組肌酐含量顯著高于對照組(P<0.05)。見表4。

表4 治療調(diào)理階段不同處理組犬腎功能指標(biāo)的比較

2.4 各組犬尿常規(guī)指標(biāo)的變化

在預(yù)防調(diào)理試驗(yàn)中，第0天各組的白細(xì)胞、尿潛血、尿蛋白檢測均為陰性；第7天預(yù)防組和造模組犬只尿液中白細(xì)胞、尿潛血、尿蛋白檢測呈陽性；第14天造模組尿液中白細(xì)胞出現(xiàn)大量白細(xì)胞(+++)，各組間尿液pH值無明顯變化。在治療調(diào)理試驗(yàn)第21天，自然恢復(fù)組犬尿液常規(guī)檢測中白細(xì)胞、尿潛血、尿蛋白含量逐漸減少，治療組尿潛血、尿蛋白檢測轉(zhuǎn)為弱陽性。治療組犬只尿液的pH值與對照組略有下降但差異不顯著(P>0.05)。見表5、6。

表5 預(yù)防調(diào)理階段不同處理組犬尿常規(guī)的比較

表6 治療調(diào)理階段不同處理組犬尿常規(guī)的比較

2.5 炎性因子的變化

在預(yù)防調(diào)理試驗(yàn)中，第0天各組犬指標(biāo)無顯著差異，造模組犬血清中的TNF-α的濃度在第7 ～14天顯著高于對照組(P<0.05)，而預(yù)防組在TNF-α濃度在第7 ～14天略有升高與對照組差異不顯著(P>0.05)；犬血清中IL-6含量第7天造模組顯著高于對照組(P<0.05)，治療組與對照組無顯著差異(P>0.05)，第14天造模組和預(yù)防組均極顯著高于對照組(P<0.01)；犬血液中CRP含量造模組7～14天持續(xù)上升與對照組差異極顯著(P<0.01)，預(yù)防組犬血液中CRP含量在第7天極顯著高于對照組(P<0.01)，第14天顯著高于對照組(P<0.05)并極顯著低于對照組(P<0.01)。見表7。

表7 預(yù)防調(diào)理階段不同處理組犬炎性因子的變化

治療調(diào)理試驗(yàn)中，經(jīng)過1周處方糧飼喂在第21天治療組犬血清TNF-α、IL-6的濃度與自然組相比顯著下降(P<0.05)，CRP濃度與自然組相比極顯著下降(P<0.01)，自然組犬TNF-α的濃度仍顯著高于對照組(P<0.05)，IL-6和CRP濃度極顯著高于對照組(P<0.01)；第28天自然恢復(fù)組IL-6濃度仍顯著高于對照組和造模組，TNF-α和CRP濃度各組無顯著差異(P>0.05)。見表8。

表8 治療調(diào)理階段不同處理組犬炎性因子的變化

2.6 各組犬尿沉渣檢測

在試驗(yàn)第0天，各組犬只尿沉渣并無太多細(xì)胞內(nèi)容物(圖1A)；試驗(yàn)第7天，造模組和預(yù)防組犬的的尿沉渣中均出現(xiàn)少量細(xì)胞形態(tài)不明顯的內(nèi)容物(見圖1B、1C)；試驗(yàn)第14天，造模組犬尿沉渣染色后在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)大量的細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)形態(tài)特征判斷，其中有細(xì)胞核小而圓、細(xì)胞大而多角的的扁平膀胱上皮細(xì)胞和大量白細(xì)胞(見圖1D)，預(yù)防組少量的白細(xì)胞和紡錘型的尿路上皮細(xì)胞(見圖1E)；試驗(yàn)第21天自然恢復(fù)組有外形不規(guī)則，結(jié)構(gòu)模糊，漿內(nèi)充滿粗大顆粒，細(xì)胞腫脹成團(tuán)、界限模糊的膿細(xì)胞(見圖1F)，治療組犬經(jīng)過1周治療調(diào)理后，尿沉渣中的白細(xì)胞和膀胱上皮細(xì)胞減少(見圖1G)；第28天自然恢復(fù)組仍存在少量的膀胱上皮細(xì)胞(見圖1H)，治療組尿沉渣內(nèi)容物基本消失(見圖1I)。

A.對照組0天；B.造模組第7天；C.預(yù)防組第7天犬；D.造模組第14天；E.預(yù)防組第14天；F.自然恢復(fù)組第21天；G.治療組第21天；H.自然恢復(fù)組第28天；I.治療組第28天圖1 各試驗(yàn)組犬尿沉渣檢查結(jié)果 (400×)

3 討論

利用復(fù)制的犬膀胱炎癥模型，通過對犬的臨床癥狀、血常規(guī)、腎功能、致炎因子、尿常規(guī)、尿沉渣等的檢測，將犬泌尿道處方糧對犬膀胱炎的預(yù)防調(diào)理效果和治療調(diào)理效果進(jìn)行了一系列的試驗(yàn)研究。在預(yù)防調(diào)理試驗(yàn)中，用75%醫(yī)用酒精進(jìn)行膀胱灌注后，造模組和預(yù)防組犬只都出現(xiàn)了體溫升高、尿血、尿淋漓、厭食、精神不振等癥狀，而造模組比預(yù)防組臨床癥狀明顯且持續(xù)時(shí)間長，預(yù)防組犬只第5天癥狀減輕，而預(yù)防組血清中的炎性因子以及尿液中白細(xì)胞的結(jié)果顯示炎癥并沒有消除。由此推斷在致病因素下，處方糧并不能阻止炎癥的發(fā)生發(fā)展，也不能像消炎藥物一樣短時(shí)間內(nèi)消除炎癥，但具有清熱舒緩、減輕犬的不適癥狀的作用。

中醫(yī)認(rèn)為膀胱濕熱癥屬里熱癥，因濕熱下行引起，需清下焦?jié)駸幔幏郊Z中添加的茯苓、澤瀉是中醫(yī)臨床上常用的滲濕利水藥[9]。處方糧中添加了陳皮、茯苓、車前子、澤瀉及麥冬等中藥成分，其中，茯苓、澤瀉有利尿作用；車前子、麥冬、茯苓、澤瀉均有抗炎抗腫瘤功效；陳皮、澤瀉有瀉熱化濁等功效；茯苓、車前子、麥冬還可增強(qiáng)機(jī)體免疫力的作用[10-14]，從利尿、抗炎抗菌、清熱去火、增強(qiáng)機(jī)體免疫力的角度解決膀胱的濕熱之癥。

為進(jìn)一步探究炎癥的情況，再次對犬血清中TNF-α、IL-6、CRP濃度進(jìn)行檢測。CRP對全身性炎癥的反應(yīng)更迅速，相比于白細(xì)胞計(jì)數(shù)對炎癥的提示更為靈敏，尤其是在炎癥的加劇階段[15-16]；TNF-α作為炎癥反應(yīng)的主要誘導(dǎo)劑，在炎癥反應(yīng)過程中出現(xiàn)最早；IL-6作為反映機(jī)體炎癥和組織損傷嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)，也是炎癥反應(yīng)的誘發(fā)劑[17]。在前14 d預(yù)防組、造模組犬只經(jīng)過兩次醫(yī)用酒精膀胱灌注后，白細(xì)胞數(shù)只是正常范圍內(nèi)上升，而CRP濃度在第7天就已經(jīng)達(dá)到重度炎癥范圍，第14天CRP的濃度仍持續(xù)顯著上升，犬只血清中TNF-α、IL-6的濃度也迅速升高，犬血液中TNF-α、IL-6的濃度和CRP的濃度與炎癥反應(yīng)正相關(guān)，同時(shí)結(jié)合犬只有體溫升高、頻尿、有紅色尿液等臨床癥狀表明造模組犬的膀胱炎已經(jīng)形成，預(yù)防組犬只血液中CRP、TNF-α濃度在第14天顯著低于造模組。

在治療調(diào)理試驗(yàn)中，治療組犬只沒有使用抗炎藥物的情況下經(jīng)過1周的處方糧飼喂，血液中CRP濃度率先下降至輕度炎癥范圍；血清中TNF-α的濃度與自然恢復(fù)組相比顯著降低；尿液沉渣染色后觀察到的大量白細(xì)胞和膀胱上皮細(xì)胞等有機(jī)沉渣大幅度減少，第2周治療組癥狀基本消失，而自然組在第2周癥狀才有所減輕，表明泌尿道處方糧中的車前子、麥冬、茯苓、澤瀉等中藥成分對治療組膀胱炎癥有一定的利尿消炎調(diào)節(jié)作用。

由此可見，處方糧可以幫助治療組犬只減少致炎因子對機(jī)體過長時(shí)間的損害和消耗，因此，在臨床上如果在使用抗菌消炎藥物治療犬膀胱炎癥的同時(shí)飼喂犬泌尿道處方糧，會(huì)加速炎癥的消除，縮短致炎因子對泌尿系統(tǒng)黏膜的損害時(shí)間，更有利于日后的恢復(fù)，在犬只出現(xiàn)輕度膀胱炎癥問題或發(fā)病幼犬不建議使用消炎藥時(shí)，可飼喂犬泌尿道處方糧進(jìn)行保守治療調(diào)理。