申茂玉，曹利，趙杰，謝昕，朱雷，周凡，馮士彬，李玉，吳金節(jié)，阮崇美，辜麗川，王希春*

(1.安徽農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，安徽 合肥 230036；2.上海比瑞吉寵物用品股份有限公司，上海 201100；3.安徽科技學院動物科學學院，安徽 鳳陽 233100；4.安徽農(nóng)業(yè)大學信息與計算機學院，安徽 合肥 230036)

隨著生活水平的提高，飼養(yǎng)寵物犬的家庭越來越多，但由于大部分寵物主人的飼養(yǎng)管理經(jīng)驗不足，對寵物疾病防治缺乏了解，導致在臨床上寵物犬泌尿道疾病的發(fā)病率呈上升趨勢。泌尿系統(tǒng)疾病是寵物犬的高發(fā)病之一，其中膀胱炎尤為常見[1]。膀胱炎是指膀胱黏膜及黏膜下層的炎癥，是常見的犬下尿路感染性疾病[2]，臨床癥狀有尿頻、尿痛、尿液混濁帶血伴有氨臭味，尿沉渣檢測多見紅細胞、白細胞、膀胱上皮細胞，B超影像可顯示膀胱壁腫脹增厚或表面粗糙皺樣變化[2]。引發(fā)膀胱炎的病因有很多，如尿路的細菌感染；膀胱結(jié)石或尿潴留過度壓迫膀胱壁造成膀胱機械性刺激及損傷；腎炎、輸尿管炎等鄰近器官的炎癥蔓延；有毒物質(zhì)或強烈藥物刺激等[3]。犬膀胱炎的治療一般通過抗菌消炎藥、利尿、止血止痛或清熱利濕的中藥等對癥治療，當寵物犬出現(xiàn)泌尿系統(tǒng)疾病時，積極遵醫(yī)囑配合治療的，同時要改善飼養(yǎng)管理，保證安靜無刺激驚嚇的環(huán)境，給予充足的水分，飲食上選用高營養(yǎng)無刺激易消化的犬糧，適當限制高蛋白質(zhì)的食品。調(diào)整飲食結(jié)構(gòu)減少對泌尿道的刺激和負擔，以防復發(fā)[4]。寵物犬出現(xiàn)泌尿系統(tǒng)疾病時，處方糧作為具有一定食療效果的犬糧，其輔助治療、方便快捷的特點被越來越多的寵物主人認可，泌尿道處方糧針對性的添加改善泌尿系統(tǒng)問題的食療成份，作為寵物的“病號餐”能全面改善患犬飲食結(jié)構(gòu)，輔助泌尿系統(tǒng)疾病的治療。

為探究犬泌尿道處方糧對膀胱炎的防治調(diào)理效果，本試驗通過對膀胱灌注75%的醫(yī)用酒精來建立犬膀胱炎癥的模型[5-8]，在建模的過程中飼喂泌尿道處方糧監(jiān)測其對發(fā)病期的干擾情況，并對膀胱炎模型犬飼喂處方糧探究其對膀胱炎的治療調(diào)理效果，為今后犬處方糧的臨床應(yīng)用提供試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

選取24只無泌尿系統(tǒng)病史的健康比格犬作為試驗犬，公母各半，體重(13±1.5)kg，年齡(2±0.2)歲，購于南京亞東實驗動物研究開發(fā)中心公司。

1.2 犬糧選擇

普通犬糧、犬泌尿道處方糧，由上海比瑞吉寵物用品股份有限公司提供，處方糧的主要成分配比為粗蛋白質(zhì)≥19.0%、粗脂肪≥14.0%、粗纖維≤5.0%、粗灰分≤10.0%、鈣≥0.6%、總磷0.5%、賴氨酸≥0.63%、水溶性氯化物≥0.09%、水分≤10.0%，此外還添加了陳皮、茯苓、車前子、澤瀉及麥冬等中藥成分。

1.3 動物分組與管理

在造模及預防調(diào)理試驗中，將24只比格犬隨機分為對照組6只、預防組6只、造模組12只，試驗前對所有試驗犬只做臨床常規(guī)檢查后確定健康、精神狀態(tài)良好，并進行體內(nèi)外驅(qū)蟲，疫苗免疫。每兩只試驗犬在8 m2的半開敞犬舍內(nèi)圈養(yǎng)，以保證其正常的活動量，整個試驗過程全部飼喂犬糧，無其他食物投喂，飲用清潔水。

1.4 試驗設(shè)計

對照組、造模組每只犬飼喂基礎(chǔ)犬糧35 g/(kg·d)，預防組每只犬飼喂泌尿道處方犬糧35 g/(kg·d)。采用75%的醫(yī)用酒精對造模組和預防組膀胱灌注建立犬的膀胱炎癥，每周1次，連續(xù)灌注兩次，每次每只0.6 mL/kg。第14天造模犬出現(xiàn)血尿、食少納呆，尿液中白細胞呈陽性，超聲檢查膀胱壁明顯增厚，即判定膀胱炎造模成功。保留對照組和造模組，將造模組平均分成自然組和治療組各6只，自然組犬飼喂普通犬糧35 g/(kg·d)，治療組犬飼喂泌尿道處方犬糧35 g/(kg·d)。試驗期間沒有介入任何藥物，沒有飼喂其他食物，早晚飼喂犬糧各1次，自由飲水。

1.5 樣品的采集與處理

分別在試驗開始的第0、7、14、21和28天，通過前肢靜脈采血，取新鮮EDTA抗凝血檢測血常規(guī)，將抗凝血以3 000 r/min離心3 min，取上層血漿檢測C反應(yīng)蛋白；取非抗凝血在室溫中傾斜放置30 min，以3 000 r/min離心10 min，取上清液用于檢測腎功能指標與炎癥因子水平；收集第0、7、14、21和28天的尿液，以1 000 r/min離心5 min，取尿沉渣鏡檢。

1.6 指標檢測

1.6.1 臨床癥狀

試驗期間觀察犬的食欲、飲食量、飲水量、精神狀況、排尿量，觀察排尿姿勢、排尿次數(shù)、排尿量及尿液的感官狀態(tài)，并做記錄。

1.6.2 血液指標

采用獸用全自動血細胞分析儀測定犬血常規(guī)各項指標，用熒光C反應(yīng)蛋白分析儀檢測犬血漿中的C反應(yīng)蛋白(CRP)的濃度，將分離好的血清用BS-220全自動生化分析儀檢測犬腎功能生化指標檢查，用MK3型酶標儀檢測犬血清中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素6(IL-6)的濃度。

1.6.3 尿液檢查

將當天收集的尿液做尿液4項指標(白細胞、pH、尿潛血和尿蛋白)檢測；對尿沉渣做Diff-Quik染色觀察尿沉渣中細胞情況。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件的獨立樣本將試驗組不同試驗時間點的測定數(shù)據(jù)與對照組進行比較，試驗結(jié)果用“平均值±標準差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 各組犬的臨床表現(xiàn)

造模組和預防組犬只在75%的醫(yī)用酒精灌注后出現(xiàn)了精神不振，厭食，尿頻，尿液略微泛紅，舔舐生殖器，預防組在第5天癥狀減輕，正常飲水進食。在第二次灌注后，造模組和預防組組犬體溫升高、尿頻，其中造模組公犬只出現(xiàn)生殖器滴血情況，尿淋漓，生殖器紅腫可見膿性分泌物，尿液渾濁呈暗紅色。

在治療調(diào)理階段，治療組犬只在飼喂處方糧后食量增加，飲水次數(shù)增多，精神狀態(tài)明顯轉(zhuǎn)好，尿頻、尿淋漓狀況開始緩解，排尿變得順暢，尿液變得清澈，自然恢復組犬精神倦怠、食欲差。尿液仍渾濁呈琥珀色，排尿時間長。第28天，治療組犬只的臨床癥狀基本消失，對照組癥狀略有緩解，但精神食欲較差，尿液仍渾濁并伴有刺鼻氨臭味。

2.2 血常規(guī)檢查

在預防調(diào)理試驗中，第0天各組間指標并無明顯差異；在第7天，造模組犬血液中紅細胞數(shù)和血紅蛋白含量顯著降低(P<0.05)，造模組和預防組犬只血液中的白細胞數(shù)量顯著增高(P<0.05)，中性粒細胞數(shù)量極顯著增高(P<0.01)；第14天造模組的紅細胞數(shù)和血紅蛋白含量均顯著低于對照組和預防組(P<0.05)，白細胞數(shù)顯著高于對照組和預防組(P<0.05)，中性粒細胞數(shù)極顯著高于對照組(P<0.01)，預防組中性粒細胞顯著高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 預防調(diào)理階段不同處理組犬血常規(guī)指標的比較

治療調(diào)理試驗階段，第14天自然組和治療組紅細胞和血紅蛋白含量均顯著低于對照組(P<0.05)，白細胞數(shù)顯著高于對照組(P>0.05)，中線粒細胞數(shù)極顯著高于對照組(P<0.01)；第21天 治療組紅細胞數(shù)和血紅蛋白含量與對照組無顯著差異(P>0.05)，自然組紅細胞數(shù)仍顯著低于對照組和治療組(P<0.05)，血紅蛋白含量顯著低于對照組(P<0.05)，但與治療組無明顯差異(P>0.05)，自然組和治療組的白細胞數(shù)和中性粒細胞數(shù)仍顯著高于對照組(P>0.05)；第28天治療組和對照組各指標均無顯著性差異(P>0.05)，自然組血紅蛋白含量顯著低于對照組和治療組(P<0.05)，紅細胞數(shù)顯著低于對照組(P<0.05)，中性粒細胞數(shù)極顯著高于對照組(P<0.01)，白細胞數(shù)顯著高于對照組和治療組(P<0.05)。見表2。

表2 治療調(diào)理階段不同處理組犬血常規(guī)指標的比較

2.3 各組犬血清腎功能指標的變化

預防調(diào)理階段，第0天各組指標均無顯著差異，酒精灌注后7 d造模組尿素氮含量顯著高于對照組(P<0.05)，肌酐含量顯著高于對照組與治療組(P<0.05)；第14天造模組尿素氮、肌酐含量極顯著高于對照組(P<0.01)，預防組肌酐和尿素氮含量也略有升高但與對照組無顯著差異(P>0.05)。見表3。

表3 預防調(diào)理階段不同處理組犬腎功能指標的比較

治療調(diào)理階段，第14天自然組和治療組尿素氮含量顯著高于對照組(P<0.05)，肌酐含量極顯著高于對照組(P<0.01)；第21～28天，自然組和治療組尿素氮、肌酐含量都有所降低，但自然組尿素氮含量顯著高于對照組和治療組(P<0.05)，自然組和治療組肌酐含量顯著高于對照組(P<0.05)。見表4。

表4 治療調(diào)理階段不同處理組犬腎功能指標的比較

2.4 各組犬尿常規(guī)指標的變化

在預防調(diào)理試驗中，第0天各組的白細胞、尿潛血、尿蛋白檢測均為陰性；第7天預防組和造模組犬只尿液中白細胞、尿潛血、尿蛋白檢測呈陽性；第14天造模組尿液中白細胞出現(xiàn)大量白細胞(+++)，各組間尿液pH值無明顯變化。在治療調(diào)理試驗第21天，自然恢復組犬尿液常規(guī)檢測中白細胞、尿潛血、尿蛋白含量逐漸減少，治療組尿潛血、尿蛋白檢測轉(zhuǎn)為弱陽性。治療組犬只尿液的pH值與對照組略有下降但差異不顯著(P>0.05)。見表5、6。

表5 預防調(diào)理階段不同處理組犬尿常規(guī)的比較

表6 治療調(diào)理階段不同處理組犬尿常規(guī)的比較

2.5 炎性因子的變化

在預防調(diào)理試驗中，第0天各組犬指標無顯著差異，造模組犬血清中的TNF-α的濃度在第7 ～14天顯著高于對照組(P<0.05)，而預防組在TNF-α濃度在第7 ～14天略有升高與對照組差異不顯著(P>0.05)；犬血清中IL-6含量第7天造模組顯著高于對照組(P<0.05)，治療組與對照組無顯著差異(P>0.05)，第14天造模組和預防組均極顯著高于對照組(P<0.01)；犬血液中CRP含量造模組7～14天持續(xù)上升與對照組差異極顯著(P<0.01)，預防組犬血液中CRP含量在第7天極顯著高于對照組(P<0.01)，第14天顯著高于對照組(P<0.05)并極顯著低于對照組(P<0.01)。見表7。

表7 預防調(diào)理階段不同處理組犬炎性因子的變化

治療調(diào)理試驗中，經(jīng)過1周處方糧飼喂在第21天治療組犬血清TNF-α、IL-6的濃度與自然組相比顯著下降(P<0.05)，CRP濃度與自然組相比極顯著下降(P<0.01)，自然組犬TNF-α的濃度仍顯著高于對照組(P<0.05)，IL-6和CRP濃度極顯著高于對照組(P<0.01)；第28天自然恢復組IL-6濃度仍顯著高于對照組和造模組，TNF-α和CRP濃度各組無顯著差異(P>0.05)。見表8。

表8 治療調(diào)理階段不同處理組犬炎性因子的變化

2.6 各組犬尿沉渣檢測

在試驗第0天，各組犬只尿沉渣并無太多細胞內(nèi)容物(圖1A)；試驗第7天，造模組和預防組犬的的尿沉渣中均出現(xiàn)少量細胞形態(tài)不明顯的內(nèi)容物(見圖1B、1C)；試驗第14天，造模組犬尿沉渣染色后在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)大量的細胞，根據(jù)細胞的結(jié)構(gòu)形態(tài)特征判斷，其中有細胞核小而圓、細胞大而多角的的扁平膀胱上皮細胞和大量白細胞(見圖1D)，預防組少量的白細胞和紡錘型的尿路上皮細胞(見圖1E)；試驗第21天自然恢復組有外形不規(guī)則，結(jié)構(gòu)模糊，漿內(nèi)充滿粗大顆粒，細胞腫脹成團、界限模糊的膿細胞(見圖1F)，治療組犬經(jīng)過1周治療調(diào)理后，尿沉渣中的白細胞和膀胱上皮細胞減少(見圖1G)；第28天自然恢復組仍存在少量的膀胱上皮細胞(見圖1H)，治療組尿沉渣內(nèi)容物基本消失(見圖1I)。

A.對照組0天；B.造模組第7天；C.預防組第7天犬；D.造模組第14天；E.預防組第14天；F.自然恢復組第21天；G.治療組第21天；H.自然恢復組第28天；I.治療組第28天圖1 各試驗組犬尿沉渣檢查結(jié)果 (400×)

3 討論

利用復制的犬膀胱炎癥模型，通過對犬的臨床癥狀、血常規(guī)、腎功能、致炎因子、尿常規(guī)、尿沉渣等的檢測，將犬泌尿道處方糧對犬膀胱炎的預防調(diào)理效果和治療調(diào)理效果進行了一系列的試驗研究。在預防調(diào)理試驗中，用75%醫(yī)用酒精進行膀胱灌注后，造模組和預防組犬只都出現(xiàn)了體溫升高、尿血、尿淋漓、厭食、精神不振等癥狀，而造模組比預防組臨床癥狀明顯且持續(xù)時間長，預防組犬只第5天癥狀減輕，而預防組血清中的炎性因子以及尿液中白細胞的結(jié)果顯示炎癥并沒有消除。由此推斷在致病因素下，處方糧并不能阻止炎癥的發(fā)生發(fā)展，也不能像消炎藥物一樣短時間內(nèi)消除炎癥，但具有清熱舒緩、減輕犬的不適癥狀的作用。

中醫(yī)認為膀胱濕熱癥屬里熱癥，因濕熱下行引起，需清下焦?jié)駸?，處方糧中添加的茯苓、澤瀉是中醫(yī)臨床上常用的滲濕利水藥[9]。處方糧中添加了陳皮、茯苓、車前子、澤瀉及麥冬等中藥成分，其中，茯苓、澤瀉有利尿作用；車前子、麥冬、茯苓、澤瀉均有抗炎抗腫瘤功效；陳皮、澤瀉有瀉熱化濁等功效；茯苓、車前子、麥冬還可增強機體免疫力的作用[10-14]，從利尿、抗炎抗菌、清熱去火、增強機體免疫力的角度解決膀胱的濕熱之癥。

為進一步探究炎癥的情況，再次對犬血清中TNF-α、IL-6、CRP濃度進行檢測。CRP對全身性炎癥的反應(yīng)更迅速，相比于白細胞計數(shù)對炎癥的提示更為靈敏，尤其是在炎癥的加劇階段[15-16]；TNF-α作為炎癥反應(yīng)的主要誘導劑，在炎癥反應(yīng)過程中出現(xiàn)最早；IL-6作為反映機體炎癥和組織損傷嚴重程度的重要指標，也是炎癥反應(yīng)的誘發(fā)劑[17]。在前14 d預防組、造模組犬只經(jīng)過兩次醫(yī)用酒精膀胱灌注后，白細胞數(shù)只是正常范圍內(nèi)上升，而CRP濃度在第7天就已經(jīng)達到重度炎癥范圍，第14天CRP的濃度仍持續(xù)顯著上升，犬只血清中TNF-α、IL-6的濃度也迅速升高，犬血液中TNF-α、IL-6的濃度和CRP的濃度與炎癥反應(yīng)正相關(guān)，同時結(jié)合犬只有體溫升高、頻尿、有紅色尿液等臨床癥狀表明造模組犬的膀胱炎已經(jīng)形成，預防組犬只血液中CRP、TNF-α濃度在第14天顯著低于造模組。

在治療調(diào)理試驗中，治療組犬只沒有使用抗炎藥物的情況下經(jīng)過1周的處方糧飼喂，血液中CRP濃度率先下降至輕度炎癥范圍；血清中TNF-α的濃度與自然恢復組相比顯著降低；尿液沉渣染色后觀察到的大量白細胞和膀胱上皮細胞等有機沉渣大幅度減少，第2周治療組癥狀基本消失，而自然組在第2周癥狀才有所減輕，表明泌尿道處方糧中的車前子、麥冬、茯苓、澤瀉等中藥成分對治療組膀胱炎癥有一定的利尿消炎調(diào)節(jié)作用。

由此可見，處方糧可以幫助治療組犬只減少致炎因子對機體過長時間的損害和消耗，因此，在臨床上如果在使用抗菌消炎藥物治療犬膀胱炎癥的同時飼喂犬泌尿道處方糧，會加速炎癥的消除，縮短致炎因子對泌尿系統(tǒng)黏膜的損害時間，更有利于日后的恢復，在犬只出現(xiàn)輕度膀胱炎癥問題或發(fā)病幼犬不建議使用消炎藥時，可飼喂犬泌尿道處方糧進行保守治療調(diào)理。