陸明洋，劉檢，徐斌，鄭曉，蔣敬庭，李敏

(蘇州大學(xué)附屬第三醫(yī)院腫瘤生物診療中心，江蘇 常州213003)

卵巢惡性腫瘤是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一，而其死亡率占婦科惡性腫瘤的首位，對婦女生命造成嚴重威脅[1]。 由于卵巢的胚胎發(fā)育、組織解剖以及內(nèi)分泌功能十分復(fù)雜，因此卵巢癌在早期癥狀隱匿，許多患者確診時已有一定的播散和轉(zhuǎn)移，所以卵巢癌的早期診斷尤為重要[2]。 目前血清腫瘤標志物中糖類抗原125 (carbohydrate antigen，CA125)已被廣泛應(yīng)用于臨床對卵巢癌的輔助診斷[3]。 人附睪蛋白 4(Human epididymis protein 4，HE4)是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤標志物[4]。 其對卵巢癌的輔助診斷具有較高的價值[5，6]。國內(nèi)未見采用不同全自動化方法同時檢測CA125 和HE4 的報道，本研究探討了采用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法(electrochemiluminescence immunoassay， ECLIA) 和化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法 (chemiluminescent microparticle immunoassay， CMIA) 同時檢測血清 CA125 和 HE4水平， 對兩種檢測方法診斷卵巢癌的性能進行比較。

1 資料與方法

1.1 研究對象 臨床標本采集自我院婦科2010 年07 月至2013 年06 月期間住院接受手術(shù)的患者。其中卵巢癌 39 例，中位年齡 45 歲（18～74 歲），絕經(jīng)前24 例，絕經(jīng)后15 例；卵巢良性疾病63 例，中位年齡 36 歲（15～64 歲），絕經(jīng)前 54 例，絕經(jīng)后 9例，包括36 例卵巢囊腫，12 例卵巢成熟性畸胎瘤，10 例卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫，3 例卵巢囊腺瘤和2例卵巢膿腫。 另收集50 例我院體檢中心健康人血清為健康對照，年齡 23～77 歲，中位年齡 38 歲。 所有患者和體檢健康者均知情同意。 本研究經(jīng)蘇州大學(xué)附屬第三醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 標本采集 采集卵巢癌患者樣本前未經(jīng)抗腫瘤治療。 收集3 ml 靜脈血于促凝真空采血管后將800g 離心10min， 分離得到的血清于－20 ℃保存，測定時室溫復(fù)融。

1.3 方法 使用Roche Cobas e601 全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法(ECLIA)測定CA125 和HE4，CA125 質(zhì)控使用羅氏腫瘤標志物聯(lián)合質(zhì)控，HE4 質(zhì)控使用羅氏HE4 質(zhì)控。使用美國雅培公司Architect i2000SR 全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法(CMIA)測定CA125 和HE4，CA125 質(zhì)控使用美國伯樂質(zhì)控，HE4 質(zhì)控使用雅培HE4 質(zhì)控。所有檢測按本實驗室SOP 操作。

1.4 判定標準 CA125＜35U/ml。 HE4： 絕經(jīng)前＜70 pmol/L，絕經(jīng)后＜140 pmol/L。 卵巢癌發(fā)病風(fēng)險(ROMA)值計算公式： 絕經(jīng)前婦女：PI (預(yù)測指數(shù))= -12.0+2.38×LN(HE4)+0.626×LN(CA125)；絕經(jīng)后婦女：PI = -8.09+1.04×LN (HE4)+0.732×LN(CA125)；卵巢癌發(fā)病風(fēng)險計算(ROMA)值(%) =Exp(PI)/[1+Exp(PI)]×100。 式中：LN=自然對數(shù)，Exp(PI)=ePI。 ECLIA：絕經(jīng)前婦女ROMA 值＜11.4%，絕經(jīng)后婦女＜29.9%，判定為卵巢癌低風(fēng)險。 CMIA：絕經(jīng)前婦女ROMA 值＜7.4%，絕經(jīng)后婦女＜25.3%，判定為卵巢癌低風(fēng)險[7]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 用SPSS22.0 統(tǒng)計軟件。數(shù)據(jù)使用中位數(shù)、 最小值和最大值表示。 相關(guān)性分析采用Spearman 相關(guān)分析。 多組資料間的組間比較使用方差分析。 應(yīng)用ROC 曲線確定兩種指標對卵巢癌的診斷價值。 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 實驗與結(jié)果

2.1 兩種方法CA125 和HE4 測定值 通過ECLIA和CMIA 分別測定CA125 和HE4 水平，卵巢癌組分別與卵巢良性疾病組和健康人組比較，相同檢測方法CA125 和HE4 水平差異都具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；卵巢良性疾病組和健康人組比較，同種檢測方法CA125 值差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。

表1 ECLIA 和 CMIA 測定 CA125 和 HE4 水平

2.2 兩種方法 CA125 和 HE4 測定值的相關(guān)性ECLIA 和 CMIA 測定的 CA125 和 HE4 值均高 度正相關(guān)（r=0.995，P＜0.01；r=0.997，P＜0.01），見圖1、圖2。

2.3 鑒別卵巢良惡性疾病的ROC 曲線比較 用卵巢良性疾病作對照鑒別診斷卵巢癌，CA125 的ROC 曲線下面積分別為 0.760 （ECLIA） 和 0.746（CMIA）；HE4 的 ROC 曲線 下 面積分 別 為 0.813（ECLIA）和 0.782（CMIA）。 均顯示了良好的診斷效能，見圖3。

2.4 卵巢良性疾病和卵巢癌ROMA 值 ECLIA 和CMIA 兩種方法測定 CA125 和 HE4 后分別計算ROMA 值， 卵巢良性疾病和卵巢癌兩種方法的RO MA 值差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表2。

圖1 兩種方法檢測血清CA125 的相關(guān)性

圖2 兩種方法檢測血清HE4 的相關(guān)性

圖3 鑒別卵巢良惡性疾病的ROC 曲線

表2 卵巢良性疾病和卵巢癌兩種方法的ROMA 值

2.5 兩種方法 CA125、HE4 和 ROMA 對鑒別卵巢良惡性疾病的診斷效能 鑒別卵巢良惡性疾病時，CA125 敏感性最高，HE4 特異性最高，準確性ROMA 和 HE4 比 CA125 高，見表3。

表3 兩種方法CA125、HE4 和ROMA對鑒別卵巢良惡性疾病的診斷效能

3 討論

早期卵巢癌缺乏典型癥狀，所以很難對卵巢癌進行篩查和早期診斷，CA125 和HE4 是目前公認的卵巢癌診斷的血清標志物[8，9]。羅氏電化學(xué)發(fā)光法和雅培化學(xué)發(fā)光法是目前國內(nèi)應(yīng)用最為普遍的腫瘤標志物的檢測方法[10，11]。 CA125 的檢測已被臨床廣泛應(yīng)用[12]。而羅氏公司和雅培公司于近年分別推出了HE4 的電化學(xué)發(fā)光法和化學(xué)發(fā)光法檢測試劑盒應(yīng)用于臨床診斷[13]。我們用兩種檢測方法分別測定CA125 和HE4， 對其相關(guān)性和一致性進行了分析，本研究結(jié)果顯示，兩種檢測方法結(jié)果呈高度正相關(guān)，鑒別卵巢良惡性疾病時均具有良好的診斷效能。

本研究發(fā)現(xiàn)兩種檢測方法仍然具有一些不同之處。 羅氏Cobas e601 檢測CA125 樣品量是20 μl，HE4 樣品量是 10μl， 且采用一次性加樣吸頭，所需樣品量少不存在交叉污染， 完成一個測試需時18 分鐘。 而雅培Architect i2000SR 兩個項目的檢測時間是30 分鐘，樣品體積是25μl，使用樣品針吸樣后清洗的方式加樣，樣品針存在清洗不干凈有殘留的可能。 因此羅氏Cobas e601 較雅培Architect i2000SR 在樣品處理上更有優(yōu)勢。 測定的線性 范 圍 ，CA125 (ECLIA)：0.6-5000.0U/ml；CA125(CMIA)：1.0-1000.0U/ml；HE4 (ECLIA) 為 15.0 ～1500.0 pmol/L，HE4(CMIA)為 20.0～1500.0 pmol/L，因此羅氏CA125 具有更寬的線性范圍。 當(dāng)超過線性范圍時兩種測定方法均可以實現(xiàn)儀器自動稀釋，避免了手工稀釋產(chǎn)生的誤差。 ROMA 值對盆腔良惡性腫塊的鑒別有重要意義[14，15]。 對于 ROMA 值的計算，羅氏需要第三方軟件計算ROMA 值，而雅培能自動計算ROMA 值， 因此雅培在報告ROMA值時更有優(yōu)勢。 但在臨床應(yīng)用中我們發(fā)現(xiàn)不少標本CA125 或者HE4 水平超過儀器線性范圍，此時如果單獨稀釋一項重新測定， 雅培也無法自動計算ROMA 值， 此時也需要第三方軟件計算ROMA值。

綜上所述， ECLIA 和CMIA 測定血清 CA125和HE4 水平測定具有簡便、經(jīng)濟和無創(chuàng)等優(yōu)點，而ROMA 值能較好的鑒別卵巢良惡性疾病。 兩種方法各有優(yōu)勢，檢測過程受人為因素干擾少，均是臨床卵巢癌診斷的良好檢測方法。