任俞新 張德罡

摘要：以當(dāng)年生幼嫩莖段為外植體，進(jìn)行百里香優(yōu)化快繁再生體系試驗(yàn)。結(jié)果表明，百里香莖切段較理想的滅菌方法為75 %酒精浸泡30 s，轉(zhuǎn)入飽和漂白粉上清液浸泡300 s。適合不定芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 6-BA + 0.3 mg/L NAA+ 0.3 mg/L GA3，誘導(dǎo)率達(dá)95.25%，平均芽數(shù)10.8個(gè)。較佳的不定芽增殖培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA+0.4 mg/L GA3，增殖倍數(shù)為15.11，平均苗高為4.61 cm。理想的生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.2 mg/L IBA +0.1 mg/L IAA，生根率為100%，平均生根數(shù)10.03條，生根試管苗移栽20 d后成活率達(dá)95%。

關(guān)鍵詞：百里香;優(yōu)化快繁;誘導(dǎo);培養(yǎng); 成活率

中圖分類號(hào)：S682? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ? ? ?文章編號(hào)：1001-1463（2020）08-0039-05

doi：10.3969/j.issn.1001-1463.2020.08.010

Abstract：The effects of different ratio of attapulgite （PAL） and LC-S01 on soil heavy metal passivation and reduce crop absorption were studied. The results showed that PAL could effectively increase the yield of Tartary buckwheat at 4 500.0 kg/hm2， which was 20.4% more than the control. When lC-SO1 was applied with 1 500.0 kg/hm2 + attapulgite 3 000.0 kg/hm2， the uptake of heavy metals in Tartary buckwheat roots， stems and grains decreased to different degrees， and the uptake of Cu， Zn， Cd and Pb in grains decreased by 23.5%， 23.3%， 43.9% and 61.0%， respectively， which had a positive effect on remediation of heavy metal pollution.

Key words：Attapulgite;Soil remediation conditioner;Heavy metals;Cultivated land;Buckwheat; Passivation

百里香（Thymus mongolicus Ronn）別名地椒、千里香、地姜，屬唇形科半灌木。植株矮小，高5～20 cm。匍匐莖平臥，末端多為開花枝。密生多數(shù)平行直立莖，當(dāng)年生枝紫色，老枝灰色。葉小近無柄，長橢圓形或長方條形，全緣，有側(cè)脈2～3對，具透明腺點(diǎn)，腺點(diǎn)都可分泌濃郁的香氣。花有紅、粉紅、淡紫、粉白等多種色彩，小花密集枝端成圓頭狀花序，花具短梗，花冠二唇型，二強(qiáng)雄蕊外露[1 ]。種子極小，無胚乳或少胚乳。4 — 5月為盛花期，6 — 9月常有星星小花點(diǎn)綴綠葉間，許多年份 9 — 10月還有1次盛花期。百里香在歐美各國均有分布，我國天然分布于內(nèi)蒙古、甘肅、陜西、青海、寧夏、新疆、山西、北京、遼寧、吉林、黑龍江等地，為北方鄉(xiāng)土植物，適應(yīng)性強(qiáng)，抗寒抗旱耐高溫。其根系發(fā)達(dá)，母株根長超過匍匐莖， 細(xì)根如網(wǎng)，又有匍匐莖隨處生根，在十分干旱的流沙陽坡風(fēng)化砂巖上均可正常生長，但在條件稍好土壤中生長更好。喜光也稍耐蔭，但不耐潮濕。

百里香花色艷麗，香氣怡人，莖匐葉密，如蔓地綠毯，是西北地區(qū)園林綠化的良好材料，可用于營造大面積觀賞性草坪、芳香療養(yǎng)功能性草坪、護(hù)坡草坪、花壇、花鏡等，還可用于盆栽裝飾陽臺(tái)和屋頂。百里香也是典型的藥用植物，具有解表祛風(fēng)，行氣止痛，止咳，降壓之功效[2 - 3 ]。百里香整株具有芳香氣味，可作為香料蔬菜、蜜源植物。

百里香在觀賞、藥用和食用方面的應(yīng)用已引起了人們的廣泛關(guān)注，但其野生資源種群數(shù)量少，作為藥源，近年來人為采挖較為嚴(yán)重。為有效保護(hù)野生資源，開展百里香的繁育工作勢在必行，而采用扦插、壓條等常規(guī)方式育苗遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足生產(chǎn)的需要，因此開展百里香組織培養(yǎng)和快速繁殖具有十分重要的意義。我們以百里香幼嫩莖段為外植體，對各種誘導(dǎo)因子在不同培養(yǎng)水平上的培養(yǎng)誘導(dǎo)進(jìn)行了試驗(yàn)，以獲得其優(yōu)化快繁的最佳效果。

1? ?材料和方法

1.1? ?材料

供試百里香采自甘肅省小隴山林區(qū)。

1.2? ?試驗(yàn)方法

1.2.1? ?外植體材料的處理與接種? ?5月初選晴朗的上午采集當(dāng)年生幼嫩莖立即運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，剪去葉片，用清水將表面塵埃沖去，用5 g/kg的洗衣粉溶液浸泡5 min，用清水將表面的洗衣粉液沖洗干凈。然后在超凈工作臺(tái)上切成長2～3 cm的莖段，放入廣口瓶中。無菌條件下在廣口瓶中先倒入75%酒精滅菌，搖動(dòng)30 s，用無菌水沖洗3～5次，加入1 g/kg的升汞溶液分別滅菌120、180、300 s，或用飽和漂白粉上浸液分別滅菌180、300、420 s[4 ]，然后用無菌水沖洗5～8次，將處理后的莖段取出放入鋪有無菌濾紙的接種盤中備用。將消毒滅菌后的百里香莖段切去兩端褐化部分，將剩余部分切割成長1.0～1.5 cm的莖段，接種到無激素的MS培養(yǎng)基上，共設(shè)6個(gè)處理，每處理10瓶，每瓶接種1塊外植體，重復(fù)3次。接種14 d后檢查污染率與褐變率。

1.2.2? ?培養(yǎng)條件? ?鑒于百里香組織培養(yǎng)過程中會(huì)出現(xiàn)較嚴(yán)重的玻璃化現(xiàn)象[5 ]，在初代誘導(dǎo)和繼代增殖培養(yǎng)基中均加蔗糖5%[5 ]，生根培養(yǎng)階段加入蔗糖3%[6 ]，各培養(yǎng)基中均加8 g/L瓊脂[5 ]，pH 5.6～5.8。培養(yǎng)室溫度為（22±2） ℃，誘導(dǎo)和繼代培養(yǎng)階段，光周期12 h/12 h （光/暗），生根階段16 h/8 h（光/暗）;光照強(qiáng)度約2 000 lx，有利于不定芽分化和生根[7 - 9 ]。

1.2.3? ?不定芽誘導(dǎo)? ? ?將初試培養(yǎng)所得無菌材料剪去粘有原培養(yǎng)基的底部，接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。以MS+0.3 mg/L GA3為基本培養(yǎng)基，采用6-BA與NAA兩因素3水平（6-BA、IBA 各設(shè)計(jì)0.1、0.3、0.5 mg/L 3個(gè)濃度水平）隨機(jī)設(shè)計(jì)，共9個(gè)處理，每處理10瓶，每瓶接種1個(gè)外植體，重復(fù)3次。培養(yǎng)30 d后觀察誘導(dǎo)率和不定芽數(shù)。

1.2.4? ? 繼代增殖培養(yǎng)? ? ?將初代誘導(dǎo)產(chǎn)生的不定芽分割成小芽或小段，轉(zhuǎn)接到不同激素濃度配比的繼代增殖培養(yǎng)基中，進(jìn)行繼續(xù)分化與增殖培養(yǎng)。試驗(yàn)選用內(nèi)源激素6-BA和IBA促進(jìn)不定芽的增殖和生長，6-BA、IBA 各設(shè)計(jì)0.1、0.3、0.5 mg/L 3個(gè)濃度水平，9個(gè)處理組合，每處理10瓶，每瓶接種5個(gè)初代不定芽，重復(fù)3次。每7 d觀察記載生長情況1次，40 d后統(tǒng)計(jì)不定芽增殖倍數(shù)和生長情況。

1.2.5? ?生根培養(yǎng)? ?選取繼代增殖培養(yǎng)所得無根芽苗，進(jìn)行生根誘導(dǎo)試驗(yàn)。以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，選用NAA、IBA和IAA等3種植物生長調(diào)節(jié)劑，NAA、IBA、IAA各設(shè)計(jì)0.1、0.2 mg/L 2個(gè)濃度水平，共6個(gè)處理組合，每處理10瓶，每瓶接種3個(gè)無根幼苗，重復(fù)3次。每7 d觀察生根情況1次，30 d后統(tǒng)計(jì)生根率和平均生根數(shù)。

2? ?結(jié)果與分析

2.1? ?滅菌劑及處理時(shí)間對外植體滅菌效果的影響

結(jié)果表明：75 %酒精滅菌30 s + 飽和漂白粉上浸液滅菌300 s是百里香細(xì)嫩莖段外植體較理想的消毒滅菌組合，其褐變率（6.3%）和污染率（5.9 %）均相對較低（表1）。

2.2? ?生長調(diào)節(jié)劑配比對不定芽誘導(dǎo)的影響

經(jīng)過消毒處理的嫩莖切段接種于分化培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，不定芽誘導(dǎo)的激素配比見表2。百里香芽苗分化和生長過程中會(huì)產(chǎn)生玻璃化現(xiàn)象，在各處理培養(yǎng)基中均加入GA 30.3 mg/L，以抑制玻璃化的產(chǎn)生[5 ]。結(jié)果（表2）表明，6-BA和NAA對不定芽的分化率和平均芽數(shù)有明顯影響，且呈正相關(guān)。但當(dāng)6-BA大于2.0 mg/L、NAA大于0.3 mg/L時(shí)平均芽數(shù)減少，分化時(shí)間推遲，不定芽節(jié)間變短?？梢姡琈S+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+GA3 0.3 mg/L為百里香最適合的從生芽分化培養(yǎng)基，分化率達(dá)95.25%，平均芽數(shù)10.8個(gè)（圖1）。

2.3? ?生長調(diào)節(jié)劑配比對叢生芽增殖的影響

將初代培養(yǎng)所得的簇生嫩莖切成長1.0～1.5 cm的小段，轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)28 d后增殖的結(jié)果因激素配比不同而異（表3）。增殖倍數(shù)隨6-BA濃度的增高而增大，但濃度過高會(huì)影響芽苗的株高增長，且基部會(huì)出現(xiàn)玻璃化苗。綜合分析試驗(yàn)結(jié)果，MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA+0.4 mg/L GA3為百里香增殖培養(yǎng)較理想的培養(yǎng)基組合，增殖倍數(shù)相對較高，為15.11倍，平均株高為4.61 cm（圖2）。

2.4? ?不同生長調(diào)節(jié)劑配比對叢生芽苗生根的影響

將叢生芽苗增殖培養(yǎng)繼代后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)30 d后的統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表4）表明，NAA、IBA和IAA均影響芽苗的生根，但I(xiàn)BA和IAA組合更適合于百里香的生根培養(yǎng)，1/2MS+0.2 mg/L IBA+0.1 mg/L IAA 培養(yǎng)基上的生根率為100%，平均生根數(shù)10.03條（圖3），明顯高于其他處理。將生根試管苗移栽，20 d后成活率達(dá)95%。

3? ?結(jié)論與討論

在組培快繁試驗(yàn)中，外植體的選擇和滅菌是整個(gè)試驗(yàn)順利進(jìn)行的基礎(chǔ)。試驗(yàn)表明，以百里香當(dāng)年生幼嫩莖段為外植體時(shí)，75%酒精滅菌30 s+飽和漂白粉上浸液滅菌300 s為最佳消毒滅菌組合，其褐變率和污染率都相對較低，分別為6.3%和5.9%。6-BA與NAA對百里香不定芽誘導(dǎo)具有明顯影響。當(dāng)培養(yǎng)基中6-BA濃度為2.0 mg/L、NAA濃度為0.3 mg/L時(shí)，分化率高達(dá)95.25 %，平均芽數(shù)10.8個(gè)。初代誘導(dǎo)試驗(yàn)篩選的最佳培養(yǎng)基是MS+2.0 mg/L 6-BA + 0.3 mg/L NAA + 0.3 mg/L GA3（加入0.3 mg/L GA3可有效抑制芽苗玻璃化的產(chǎn)生）。增殖培養(yǎng)較理想的培養(yǎng)基組合是MS + 1.0 mg/L 6-BA + 0.2 mg/L IBA + 0.4 mg/L GA3，增殖倍數(shù)相對較高，為15.11倍，平均株高為4.61 cm。百里香叢生芽苗生根培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基為1/2 MS + 0.2 mg/L IBA + 0.1 mg/L IAA，其生根率為100 %，平均生根數(shù)10.03條，再生后的完整植株苗形美觀，色澤深綠，移栽后生長良好，移栽20 d后成活率達(dá)95%。

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（本文責(zé)編：鄭立龍）