梁新宇 李彩東 楊勇衛(wèi)

蘭州市第二人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730046

乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球關(guān)注的公共衛(wèi)生和健康問題，約有3.5 億感染者［1］。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，HBV 感染者所致的肝硬化以致肝衰竭、肝細(xì)胞癌的比例可達(dá)30%～45%［2］。我國2006 年流行病學(xué)調(diào)查顯示1～59 歲人群HBsAg 攜帶率為7.18%，其中慢性HBV 感染者約 9300 萬人［3］，HBV 感染者進(jìn)展為肝硬化的年發(fā)生率為2%～10%［4］。乙肝病毒感染引起的肝細(xì)胞炎癥是促使肝細(xì)胞進(jìn)行自行修復(fù)、細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）沉積、形成肝纖維化的基礎(chǔ)。在乙型肝炎感染進(jìn)展為肝硬化的過程中，伴隨新生血管和纖維疤痕形成，炎性細(xì)胞因子參與的肝細(xì)胞反復(fù)受損所致的ECM 過度沉積，致肝內(nèi)纖維疤痕形成，導(dǎo)致不可逆轉(zhuǎn)的肝纖維化，最終導(dǎo)致肝硬化。HBV 感染肝細(xì)胞后引起宿主的免疫反應(yīng)，感染所致的病理損傷機(jī)制尚未完全清楚，而細(xì)胞因子在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中起著重要的作用，因此，本研究檢測(cè)乙型肝炎肝硬化患者血清細(xì)胞因子 IL-15、IL-16 、IL-18、IFN-γ 的水平，以探討其在肝硬化中的表達(dá)水平及臨床意義。

1 資料和方法

1.1 臨床資料 收集2014 年7～12 月我院住院及門診乙型肝炎感染者90 例，其中乙型肝炎病毒攜帶者（asymptomatic surface antigen carrier，ASC）45 例，年齡（38.5±18.0）歲，男性 23 例，女性 22 例；乙型肝炎肝硬化患者（liver cirrohisis，LC）45 例，年齡（47.5±21.0）歲，男性25 例，女性20 例；另選取健康體檢正常對(duì)照40例，年齡（36.5±20.0）歲，男性 21 例，女性 19 例。三組一般資料差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。乙肝病毒攜帶者診斷符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病分會(huì)、中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)學(xué)分會(huì)聯(lián)合制定的2010 年版《慢性乙型肝炎防治指南》［5］，乙肝肝硬化的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)符合2000 年指定的《病毒性肝炎防治方案》［6］。排除甲、丙、丁、戊、庚型肝炎的感染、自身免疫性肝病、酒精性肝病、脂肪肝、藥物性肝病。

1.2 主要試劑 IL-15、IL-16、IL-18、IFN-γ 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒均購自美國RD 公司。

1.3 檢測(cè)方法 采集受試者清晨空腹靜脈血4mL，分離其血清，保存于-80℃。集中采用ELISA 雙抗體夾心法（ST-360 酶標(biāo)儀）檢測(cè)血清 IL-15、IL-16、IL-18、IFN-γ 的水平，實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)SOP 文件及試劑盒說明執(zhí)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件，單因素ANOVA 分析，計(jì)量資料符合正態(tài)分布的以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組之間均數(shù)比較采用 t 檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

LC 組 IL-15、IL-16、IL-18、IFN-γ 血清水平高于ASC 組和健康對(duì)照組（P＜0.05），ASC 組高于健康對(duì)照組（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表 1，圖 1。

表 1 三組 IL-15、IL-16、IL-18 和 IFN-γ 的表達(dá)水平

圖 1 各組人群血清 IL-15、IL-16、IL-18、IFN-γ 的水平統(tǒng)計(jì)分析圖

3 討論

乙型肝炎病毒感染后，由多種細(xì)胞因子參與引發(fā)肝細(xì)胞炎癥和活化肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell，HSC），炎性細(xì)胞因子對(duì)肝細(xì)胞造成持續(xù)性的損傷過程，同時(shí)肝細(xì)胞的自我修復(fù)功能也導(dǎo)致纖維膠原不斷在肝竇Disse 間隙沉積［7］，改變肝內(nèi)血管的形態(tài)結(jié)構(gòu)，致使結(jié)締組織形成。HBV 感染引發(fā)免疫反應(yīng)損傷肝細(xì)胞，形成的炎癥是促使肝細(xì)胞進(jìn)行自行修復(fù)、ECM 沉積、形成肝纖維化的基礎(chǔ)，伴隨新的血管和纖維疤痕生成，HSC 的活化，再生的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞釋放多種炎性細(xì)胞因子作用于HSC，使其不斷增殖，最終導(dǎo)致肝硬化。肝臟含有豐富的巨噬細(xì)胞（如Kuffer 細(xì)胞），隨著對(duì)免疫分子作用于肝纖維化機(jī)制的深入研究表明，HSC 是調(diào)節(jié)肝纖維化的共同通路［8］。HBV 感染肝細(xì)胞引起機(jī)體Th1/Th2 的比例失衡，多種促炎細(xì)胞因子，如IL-6、IL-8、IL-10、IL-17 相互作用于肝細(xì)胞，不僅引起肝細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，同時(shí)也啟動(dòng)了纖維化的發(fā)生，而表達(dá)于單核巨噬細(xì)胞的鈣網(wǎng)質(zhì)蛋白（calreticulin protein，CRT）的應(yīng)激反應(yīng)是HSC 發(fā)生凋亡機(jī)制之一［9］。HBV 攜帶者常表現(xiàn)為免疫耐受，肝細(xì)胞僅有輕微炎癥或無炎癥活動(dòng)。

本研究表明，乙型肝炎病毒攜帶者和乙型肝炎肝硬化患者血清 IL-15、IL-16 、IL-18、IFN-γ 的濃度水平均升高，以肝硬化組升高的最為顯著。在機(jī)體的天然免免疫中，IL-15 下調(diào)調(diào)節(jié)性Treg 細(xì)胞，解除Treg 細(xì)胞對(duì)T 細(xì)胞的抑制效應(yīng)，提高NK 細(xì)胞的細(xì)胞毒性而且協(xié)同 IL-12 促使 NK 細(xì)胞分泌 IFN-γ［10］。IL-16 促進(jìn)單核-巨噬細(xì)胞（包括肝臟Kuffer 細(xì)胞）表達(dá)細(xì)胞因子受體及分泌TNF 等炎性細(xì)胞因子，促進(jìn)機(jī)體的炎癥反應(yīng)［11］。IL-18 是強(qiáng)烈的 IFN-γ 誘導(dǎo)因子，促進(jìn) NK 細(xì)胞分泌IFN-γ 和T 淋巴細(xì)胞的增殖，與HBV 感染后的病情轉(zhuǎn)歸有著密切的聯(lián)系［12］。同時(shí)IFN-γ 能通過非細(xì)胞溶解方式干擾HBV 感染肝細(xì)胞中HBV 的復(fù)制中間體，并降解HBV 在復(fù)制過程中產(chǎn)生的前基因組RNA，降低細(xì)胞中的病毒水平。陳學(xué)富等［13］研究表明，隨著年齡的增長，低HBsAg 水平、HBeAg 陰性和低水平的ALT，使得慢性感染肝組織病變進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加。本研究證明乙型肝炎肝硬化患者以上四種細(xì)胞因子均升高，顯著高于無癥狀乙型肝炎病毒攜帶者，提示以上四種細(xì)胞因子均參與乙型肝炎肝硬化的發(fā)生發(fā)展過程。