梁正敏 王元智 劉一朵 周向梅

結(jié)核分枝桿菌(MTB)是一種在細(xì)胞內(nèi)生存的細(xì)菌，其通過(guò)呼吸道進(jìn)入宿主后，被肺泡巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、上皮細(xì)胞所包圍。MTB的許多毒力因子，如熱休克蛋白65(Hsp65)、Hsp70、阿拉伯糖甘露糖脂(LAM)等，與巨噬細(xì)胞或樹(shù)突狀細(xì)胞表面受體結(jié)合，有利于MTB進(jìn)入細(xì)胞[1]。MTB在使用不同策略進(jìn)入細(xì)胞的過(guò)程中，其分泌蛋白如MPT64、早期分泌靶抗原6(ESAT-6)、培養(yǎng)濾液蛋白10(CFP-10)和抗原85(Ag85)復(fù)合物等起著重要作用。Ag85復(fù)合物是MTB的主要分泌抗原，在MTB的致病性中起重要作用。Ag85復(fù)合物可與纖維連接蛋白和彈性蛋白結(jié)合并介導(dǎo)MTB的黏附和侵襲，具有分枝菌酸轉(zhuǎn)移酶活性介導(dǎo)MTB的細(xì)胞壁合成。此外，Ag85分子能刺激輔助性T淋巴細(xì)胞(Th)1細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子α(TFN-α)、γ干擾素(IFN-γ)等。由于具有這些特性，Ag85復(fù)合物在結(jié)核病診斷和疫苗研發(fā)[2]、抗結(jié)核藥品[3]研發(fā)及免疫治療[4]等方面都具有重要的應(yīng)用潛力。

一、Ag85作為毒力因子的作用

Ag85蛋白家族包括Ag85A(相對(duì)分子質(zhì)量31 000)、Ag85B(相對(duì)分子質(zhì)量30 000)、Ag85C(相對(duì)分子質(zhì)量31 500)成員。在分泌蛋白中，Ag85是MTB培養(yǎng)液中最常見(jiàn)的分泌蛋白。Ag85A和Ag85B占總培養(yǎng)液蛋白的60%。此外，Ag85A、Ag85B和Ag85C在氨基酸和基因水平上具有廣泛的交叉反應(yīng)性和同源性[2]。Ag85蛋白家族成員都能結(jié)合纖維連接蛋白，與MTB的侵襲有關(guān)。無(wú)論在抗體介導(dǎo)的體液免疫反應(yīng)還是T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)中，Ag85分子在MTB自然感染和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物感染模型中都具有很強(qiáng)的免疫原性。在上述3種Ag85家族成員中，Ag85B是含量最多的一種，也是MTB的主要胞外蛋白，培養(yǎng)3 d就能被檢測(cè)到。Ag85B、Ag85A、Ag85C分別以約3∶2∶1的比例分泌。Ag85復(fù)合物除了在培養(yǎng)液中表達(dá)，也可在人單核細(xì)胞中表達(dá)，這些蛋白定位于吞噬體和分枝桿菌細(xì)胞壁[5]。

1.結(jié)合纖維連接蛋白、彈性蛋白及纖溶酶原：纖維連接蛋白是存在于血漿和組織中的一類(lèi)高分子量糖蛋白，與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、黏附、細(xì)胞形態(tài)調(diào)控、吞噬功能等相關(guān)。Ag85A和Ag85B能以高親和力結(jié)合血漿纖維連接蛋白[6]。研究發(fā)現(xiàn)，Ag85蛋白是一種應(yīng)激敏感黏附素，當(dāng)肺臟細(xì)胞暴露在高剪切應(yīng)力條件下或在血源性傳播期間有利于MTB吸附在肺部[7]。除了纖維連接蛋白，彈性蛋白也是MTB入侵的重要配體。彈性蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)中的一種重要蛋白，對(duì)許多組織如皮膚、肺、血管的彈性狀態(tài)起著至關(guān)重要的作用。Ag85能夠通過(guò)作用于彈性蛋白基序AAAKAA(K/Q)(Y/F)結(jié)合彈性蛋白及其前體[8]。此外，Ag85還能與人纖維蛋白溶酶原結(jié)合，使纖維蛋白溶酶原被激活成纖溶酶，使MTB具有分解胞外基質(zhì)和基底膜蛋白的能力，從而導(dǎo)致組織損傷[9]。因此，Ag85復(fù)合物與纖維連接蛋白和彈性蛋白的結(jié)合介導(dǎo)了MTB對(duì)巨噬細(xì)胞的附著和侵襲，與纖維蛋白溶酶原的結(jié)合導(dǎo)致組織發(fā)生病理?yè)p傷。

2.分枝菌酸轉(zhuǎn)移酶活性：Ag85復(fù)合物能催化海藻糖單酸鹽中的分枝菌酸轉(zhuǎn)移生成阿拉伯半乳聚糖或海藻糖霉菌酸酯。這些脂質(zhì)對(duì)分枝桿菌細(xì)胞的表面組分具有重要作用。Ag85A、Ag85B和Ag85C均可作為分枝菌酸轉(zhuǎn)移酶參與分枝桿菌細(xì)胞壁組裝的最后階段，如催化脂肪酸的轉(zhuǎn)移，參與分枝桿菌細(xì)胞表面組分的生物合成[10]。因此，Ag85復(fù)合物也屬于細(xì)胞壁抗原。

3.毒力：Ag85復(fù)合物在MTB發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。MTB進(jìn)入細(xì)胞后，Ag85通過(guò)與黏膜表面的纖維連接蛋白和彈性蛋白等結(jié)合，這種相互作用有助于細(xì)菌進(jìn)入宿主細(xì)胞的吞噬體。Ag85A、Ag85B和Ag85C作為免疫顯性蛋白，可明顯誘導(dǎo)Th1細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ和TNF-α等細(xì)胞因子[11-13]。與親本株相比，Ag85A缺失菌株在人(THP-1)和小鼠(J774.1A)巨噬細(xì)胞系中的生長(zhǎng)速度明顯下降，而Ag85B缺失菌株的生長(zhǎng)速率無(wú)明顯影響[14]，Ag85C缺失菌株的轉(zhuǎn)移酶活性降低了40%，但在細(xì)胞內(nèi)的生長(zhǎng)速率未改變[15]。因此，比較Ag85A、Ag85B和Ag85C缺失菌株在細(xì)胞內(nèi)的生長(zhǎng)情況，Ag85A的毒力可能強(qiáng)于Ag85B和Ag85C。

二、Ag85作為一種免疫顯性抗原在候選疫苗中的作用

BCG是目前被廣泛用于預(yù)防結(jié)核病的疫苗，它能有效保護(hù)兒童免受MTB感染。然而，BCG對(duì)成年人的保護(hù)效力范圍為0～80%[16]。因此，研制有效的結(jié)核病疫苗是未來(lái)的重要研究方向。許多MTB抗原已被用于結(jié)核病疫苗的設(shè)計(jì)，其中，Ag85復(fù)合物是免疫原性最好的抗原之一。多種用Ag85構(gòu)建的重組BCG疫苗、蛋白佐劑疫苗、病毒載體疫苗在研發(fā)中或已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段(表1)。盡管3個(gè)Ag85蛋白家族成員之間存在明顯的序列同源性，但它們的T細(xì)胞表位存在差異[17]，氨基酸241～260和261～280是Ag85B和Ag85A交叉反應(yīng)的T細(xì)胞表位，而接種了Ag85C DNA疫苗的小鼠的脾細(xì)胞不識(shí)別這些區(qū)域。此外，MTB感染的C57BL/6小鼠(對(duì)Ag85A和Ag85B多肽反應(yīng)較強(qiáng))或BALB/c小鼠(僅對(duì)Ag85A多肽反應(yīng))的脾細(xì)胞對(duì)上述3種抗原的識(shí)別反應(yīng)不一樣[18]。因此，Ag85A或Ag85B可能比Ag85C更具有免疫原性。在眾多進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段或正在研發(fā)的結(jié)核病候選疫苗中，主要選用Ag85A或Ag85B。Ag85A是最早進(jìn)入新型疫苗臨床試驗(yàn)階段的單一抗原[19]。在3個(gè)Ag85蛋白家族成員中，Ag85B是研發(fā)結(jié)核病疫苗使用頻率最高的抗原，這可能與Ag85B是培養(yǎng)液中含量最多、分泌最早的抗原相關(guān)，也可能與早期使用Ag85A的新型結(jié)核病疫苗首次進(jìn)入臨床試驗(yàn)的免疫效果不佳有關(guān)。但Ag85B與Ag85A的免疫原性相比，目前尚無(wú)明確證據(jù)顯示其更優(yōu)。

1.Ag85在重組BCG疫苗中的作用：rBCG30是早期構(gòu)建的重組BCG疫苗。盡管rBCG30在動(dòng)物模型上顯示出很好的免疫原性和保護(hù)性，但Ⅰ期臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示其免疫原性與野生型BCG相比無(wú)明顯差異[20]。重組BCG疫苗Aeras-422(過(guò)表達(dá)Ag85B、Ag85A、Rv3407，表達(dá)產(chǎn)氣莢膜溶血素O)能為小鼠提供抗MTB感染保護(hù)作用，但Ⅰ期臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)2名接種疫苗的志愿者出現(xiàn)了水痘帶狀皰疹病毒感染，推測(cè)Aeras-422免疫后可能會(huì)重新激活潛伏的皰疹病毒，導(dǎo)致Ⅰ期臨床試驗(yàn)提前終止[21]。此外，與野生型BCG相比，過(guò)表達(dá)Ag85A的重組BCG疫苗rBCG::Ag85A能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生更高水平的抗原特異性抗體和細(xì)胞因子IFN-γ，能提供小鼠更強(qiáng)的抗MTB感染能力[22]，且比其他表達(dá)多抗原的rBCG具有更好的保護(hù)效果[40]。但也有研究顯示，過(guò)表達(dá)多階段抗原的重組BCG疫苗比野生型BCG疫苗或單基因rBCG能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生更強(qiáng)、更持久的抗MTB感染保護(hù)作用[23-24]。但它們的臨床免疫保護(hù)效果有待進(jìn)一步研究。

重組BCG疫苗主要用于替換BCG，構(gòu)建的重組BCG過(guò)表達(dá)優(yōu)勢(shì)抗原。研究表明，表達(dá)多種抗原的重組BCG比表達(dá)單一抗原的重組BCG的免疫效果更好；但也有可能存在安全性問(wèn)題，如Aeras-422[20]。重組BCG既具有親代的免疫優(yōu)勢(shì)，又彌補(bǔ)了親代的不足并改善保護(hù)性，而且易于納入免疫體系中推廣使用。相對(duì)于其他類(lèi)型的候選疫苗，具有無(wú)可比擬的優(yōu)勢(shì)，受到廣泛重視。到目前為止，rBCG30和AERAS-422兩種重組BCG己進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段，但由于缺乏有效性或存在不良反應(yīng)，兩種重組BCG疫苗的臨床試驗(yàn)已經(jīng)停止。而重組BCG疫苗VPM1002(用李斯特菌溶血素代替尿素酶基因)已進(jìn)入Ⅲ期臨床試驗(yàn)[41-42]。因此，不同的疫苗設(shè)計(jì)策略決定了所研制疫苗的免疫保護(hù)機(jī)制和保護(hù)效果的不同。

2.Ag85在蛋白佐劑疫苗中的作用：蛋白佐劑疫苗主要用于BCG初次免疫后的加強(qiáng)免疫。目前進(jìn)入臨床試驗(yàn)的蛋白佐劑疫苗有H1∶IC31、H1∶CAF01、H4∶IC31、H56∶IC31和GamTBvac。GamTBvac(Ag85A，ESAT-6-CFP-10)在小鼠和豚鼠的MTB感染模型中具有明顯的抗MTB感染保護(hù)作用[43]。最近，GamTBvac的Ⅰ期臨床試驗(yàn)顯示其具有良好的安全性和免疫原性[11]。H1(Ag85B-ESAT-6)融合蛋白是最早研發(fā)的蛋白佐劑疫苗，現(xiàn)已進(jìn)入Ⅱ期臨床試驗(yàn)，結(jié)果顯示在未感染和MTB感染的青少年中，H1具有安全性和免疫原性[30]。該疫苗能誘導(dǎo)不同類(lèi)型的人群，如接種過(guò)BCG的健康志愿者、既往結(jié)核感染或結(jié)核潛伏感染人群，產(chǎn)生長(zhǎng)期持久的抗原特異性T細(xì)胞反應(yīng)[44]。

表1 用Ag85復(fù)合物構(gòu)建的正在研發(fā)的或已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段的疫苗

由于H1疫苗中的ESAT-6會(huì)干擾γ干擾素釋放試驗(yàn)，學(xué)者們更愿意將ESAT-6用作診斷抗原。HyVac4(Ag85B-TB10.4，H4)是用TB10.4抗原取代ESAT-6的一種新型融合蛋白，Ⅰ期臨床試驗(yàn)證實(shí)H4∶IC31具有良好的安全性和免疫原性，低于50 μg的H4劑量誘導(dǎo)產(chǎn)生的多功能CD4+T細(xì)胞更多，免疫記憶能持續(xù)182 d[45]。但Ⅱ期臨床試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，H4∶IC31接種未改變QFT(QuantiFERON TB-GOLD，一種結(jié)核感染的檢測(cè)方法)的初始轉(zhuǎn)化，對(duì)QFT轉(zhuǎn)化率無(wú)明顯影響[30]。

相對(duì)于H1和H4疫苗，H56(Ag85B、ESAT-6、Rv2660c)疫苗增加了結(jié)核潛伏感染相關(guān)抗原Rv2660c，食蟹猴免疫H56∶IC31后可加強(qiáng)抵抗MTB的潛伏感染[46]。H56∶IC31疫苗免疫感染MTB和未感染MTB成年人證實(shí)其具有良好的安全性和耐受性，并能誘導(dǎo)持久的抗原特異性CD4+T細(xì)胞反應(yīng)[32]。最近的臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用5、15、50 μg的H56免疫QFT-和QFT+志愿者后均能誘導(dǎo)抗原特異性多功能CD4+T細(xì)胞，3組劑量間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但ESAT-6僅在QFT-參與者中具有免疫原性。疫苗劑量和免疫方案對(duì)QFT+和QFT-個(gè)體的適用性需要進(jìn)一步的臨床試驗(yàn)研究驗(yàn)證[32]。由于MTB是經(jīng)呼吸道傳播，呼吸道黏膜免疫是一種有潛力的免疫途徑。研究發(fā)現(xiàn)，用H56∶CAF01對(duì)小鼠進(jìn)行呼吸道黏膜免疫可明顯增加持久的肺臟駐留T細(xì)胞(Trm)的數(shù)量，但未改善肺部抵御MTB感染的能力，提示肺部Trm在疫苗控制MTB感染中的局限性[47]。相對(duì)于液體疫苗劑型，固體疫苗劑型，例如噴霧干燥，能提供更好的儲(chǔ)存穩(wěn)定性和減少對(duì)冷鏈設(shè)施的依賴(lài)。研究發(fā)現(xiàn)，H56∶CAF01經(jīng)噴霧干燥后仍能保留其免疫原性[48]。與H56的構(gòu)建方法相似，最近有研究將融合蛋白Ag85B-ESAT-6和結(jié)核潛伏感染相關(guān)抗原HspX與佐劑氫氧化鋁和poly I∶C免疫小鼠后可誘導(dǎo)高水平抗原特異性抗體和細(xì)胞因子IFN-γ、白細(xì)胞介素2(IL-2)和TNF-α[49]。但其抗感染保護(hù)效力有待進(jìn)一步研究。

3.Ag85在病毒載體疫苗中的作用：MVA85A(牛痘病毒表達(dá)Ag85A)是第一個(gè)進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段的新型疫苗。MVA85A 能顯著誘導(dǎo)T細(xì)胞分泌抗原特異性IFN-γ，接種24周后，IFN-γ水平比僅免疫BCG的人高5～30倍[50]。MVA85A免疫接種過(guò)BCG的嬰幼兒后顯示其具有良好的耐受性，并可誘導(dǎo)明顯的細(xì)胞免疫應(yīng)答，但對(duì)嬰幼兒結(jié)核病缺乏保護(hù)效果[19]。此外，對(duì)感染人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)的新生兒接種MVA85A可引起早期抗原特異性免疫反應(yīng)，不干擾或增強(qiáng)隨后接種BCG的免疫原性[51]。雖然臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示MVA85A免疫后對(duì)嬰幼兒的抗MTB作用無(wú)明顯影響，但科學(xué)家們并未就此放棄MVA85A。最近的一個(gè)臨床試驗(yàn)通過(guò)改變免疫途徑、免疫次數(shù)和免疫人群再次評(píng)估MVA85A的有效性。研究人員分別用呼吸道黏膜免疫-皮內(nèi)免疫、皮內(nèi)免疫-呼吸道黏膜免疫、皮內(nèi)免疫-皮內(nèi)免疫3種方案進(jìn)行接種免疫過(guò)BCG的成年人。結(jié)果顯示，只有皮內(nèi)免疫-呼吸道黏膜免疫方案誘導(dǎo)了明顯的Ag85A介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答。黏膜免疫-皮內(nèi)免疫方案耐受性好，而皮內(nèi)免疫-黏膜免疫方案會(huì)引起短暫的明顯的呼吸道不良反應(yīng)。霧化吸入黏膜免疫能誘導(dǎo)明顯的黏膜和全身的Ag85A特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)，但這種免疫反應(yīng)是否與抗感染保護(hù)能力相關(guān)還有待臨床證實(shí)[52]。有趣的是，最近臨床研究發(fā)現(xiàn)MVA85A可明顯增強(qiáng)ChAdOx1 85A(黑猩猩腺病毒載體表達(dá)Ag85A)誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)[27,53]，給控制結(jié)核病帶來(lái)了新的希望。

Ad5Ag85A是一種表達(dá)Ag85A的復(fù)制缺陷型5型腺病毒(Ad5)載體疫苗，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型研究結(jié)果顯示Ad5Ag85A能明顯促進(jìn)BCG的保護(hù)作用，且通過(guò)呼吸道黏膜免疫能提供更好的保護(hù)；臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示Ad5Ag85A是安全的，能誘導(dǎo)接種BCG的青少年產(chǎn)生抗原特異性多功能T細(xì)胞[26]。但有學(xué)者認(rèn)為機(jī)體內(nèi)預(yù)先存在的腺病毒載體的抗體可能會(huì)中和腺病毒載體從而影響疫苗的效果[54]。但Ⅰ期臨床試驗(yàn)證實(shí)預(yù)先存在的Ad5抗體并沒(méi)有抑制疫苗誘導(dǎo)的T細(xì)胞免疫反應(yīng)[26]。盡管如此，Ad5Ag85A尚未進(jìn)行進(jìn)一步的臨床試驗(yàn)。

為了解決機(jī)體預(yù)先存在的抗腺病毒載體影響疫苗免疫原性的問(wèn)題，新的病毒載體如猿類(lèi)腺病毒或猩猩腺病毒被認(rèn)為是下一代病毒載體疫苗的候選載體[55]。ChAdOx1 85A是一種新型的表達(dá)Ag85A的黑猩猩腺病毒載體疫苗。研究發(fā)現(xiàn)，盡管呼吸道黏膜免疫ChAdOx1 85A能誘導(dǎo)肺產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng)，但不能提供抗MTB感染保護(hù)；相反，用鼻內(nèi)或皮內(nèi)免疫ChAdOx1.85A(初次免疫)-MVA85A(二次免疫)均能誘導(dǎo)明顯的免疫反應(yīng)，并能提高BCG的抗感染保護(hù)作用。結(jié)果表明，BCG-ChAdOx1 85A-MVA85A免疫方案具有明顯的抗感染保護(hù)作用[53]。最近的臨床試驗(yàn)用ChAdOx1 85A免疫幼時(shí)接種過(guò)BCG的成年人，用MVA85A進(jìn)行二次加強(qiáng)免疫。結(jié)果顯示，ChAdOx1 85A能誘導(dǎo)明顯的Ag85A特異性CD4+和CD8+T細(xì)胞反應(yīng)，但用ChAdOx1 85A進(jìn)行二次加強(qiáng)免疫并未加強(qiáng)這種免疫反應(yīng)。而MVA85A二次加強(qiáng)免疫可促進(jìn)ChAdOx1 85A誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)[27]?？赡苡捎隗w內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生的腺病毒載體免疫反應(yīng)影響了疫苗的免疫原性，二次免疫用異源病毒載體能起到更好的免疫保護(hù)作用。

ChAdOx1 85A和MVA85A及Ad5Ag85A腺病毒載體疫苗都表達(dá)單一抗原Ag85A。Ad35-TBS(AERAS-402)則是一種表達(dá)三種抗原(Ag85A、Ag85B和TB10.4)的復(fù)制缺陷型35型腺病毒載體疫苗。對(duì)免疫過(guò)BCG的志愿者用AERAS-402進(jìn)行加強(qiáng)免疫，結(jié)果顯示AERAS-402可以明顯增強(qiáng)BCG免疫后的抗原特異性CD4+和CD8+T細(xì)胞反應(yīng)[56]。但也有研究表明AERAS-402疫苗誘導(dǎo)的CD8+T細(xì)胞在多數(shù)情況下不能識(shí)別受MTB感染的細(xì)胞，提出檢測(cè)疫苗誘導(dǎo)的多功能T細(xì)胞可能并不能反映這些細(xì)胞識(shí)別MTB感染細(xì)胞的能力[57]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)對(duì)肺結(jié)核患者或曾患肺結(jié)核者免疫AERAS-402也能誘導(dǎo)較強(qiáng)的免疫應(yīng)答[58]。最近，研究發(fā)現(xiàn)表達(dá)優(yōu)勢(shì)抗原Ag85A和Ag85B 的仙臺(tái)病毒載體疫苗SeV85A是一個(gè)有應(yīng)用潛力的結(jié)核候選疫苗，SeV85A免疫小鼠后可誘導(dǎo)抗原特異性CD4+和CD8+T細(xì)胞反應(yīng)，明顯增強(qiáng)BCG的免疫保護(hù)作用[29，59]。除了優(yōu)化抗原組合，有研究者嘗試通過(guò)構(gòu)建雙價(jià)疫苗[60]或與DNA疫苗聯(lián)合使用[61]來(lái)提高病毒載體疫苗的免疫效果。

4.Ag85在DNA疫苗中的作用：作為第三代疫苗的DNA疫苗相對(duì)于其他類(lèi)型的結(jié)核病疫苗，如蛋白佐劑疫苗、病毒載體和重組BCG疫苗，是一種較新的結(jié)核病預(yù)防技術(shù)。DNA疫苗一般通過(guò)肌內(nèi)注射途徑到達(dá)體內(nèi)，然后由抗原提呈細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞)內(nèi)吞DNA到酸性囊泡中，隨后運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞核。最后，利用真核細(xì)胞進(jìn)行抗原表達(dá)和蛋白翻譯，產(chǎn)生保護(hù)性免疫應(yīng)答。盡管DNA疫苗具有良好的應(yīng)用前景，但到目前為止，尚未有結(jié)核DNA疫苗進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。

由于DNA疫苗表達(dá)單一MTB抗原對(duì)抗MTB感染的作用有限，越來(lái)越多的多抗原DNA疫苗進(jìn)入人們的視野。早期構(gòu)建的含多階段抗原的DNA疫苗pAEH(表達(dá)Ag85B、ESAT-6和HspX)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型上顯示出較高的免疫原性，并具有抗感染保護(hù)作用[38]。但目前尚無(wú)進(jìn)一步的研究。最近，Su等[37]構(gòu)建含多抗原Ag85A、Rv3425和潛伏感染相關(guān)抗原Rv2029c的DNA疫苗A39，在MTB感染前，A39可為小鼠提供保護(hù)性免疫。此外，感染后接種A39可抑制MTB的再活化，明顯降低了小鼠肺部和脾臟的細(xì)菌數(shù)量。此外，有研究發(fā)現(xiàn)DNA疫苗Hsp65-Ag85B比DNA疫苗Hsp65-ESAT6能誘導(dǎo)更強(qiáng)的T細(xì)胞免疫應(yīng)答，具有更高的保護(hù)效力[62]。此結(jié)果提示抗原的組合對(duì)于構(gòu)建多抗原疫苗的重要性。最近研究發(fā)現(xiàn)，將表達(dá)相同抗原Ag85A 和Ag85B的DNA疫苗與病毒載體疫苗進(jìn)行聯(lián)合免疫比單獨(dú)免疫DNA疫苗或病毒載體疫苗能誘導(dǎo)更高水平的T細(xì)胞免疫反應(yīng)，提供更好的抗感染保護(hù)作用[61]。此外，有研究表明將表達(dá)Ag85B的重組BCG和DNA疫苗進(jìn)行聯(lián)合免疫能增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞的免疫應(yīng)答，可能有助于克服BCG的局限性[39]。

綜上所述，Ag85復(fù)合物主要通過(guò)與纖維連接蛋白、彈性蛋白結(jié)合介導(dǎo)MTB在宿主細(xì)胞的黏附和侵襲，通過(guò)其分枝菌酸轉(zhuǎn)移酶活性介導(dǎo)MTB的細(xì)胞壁合成。Ag85復(fù)合物作為毒力因子具有較強(qiáng)的免疫原性，其中，Ag85A和Ag85B的免疫原性更優(yōu)。但是不同的疫苗類(lèi)型、抗原的組成、佐劑、免疫途徑、接種人群的年齡及是否感染MTB或HIV等均會(huì)影響疫苗的免疫保護(hù)效果。H1∶IC31和H4∶IC31在動(dòng)物模型上顯示出良好的免疫保護(hù)作用，但進(jìn)入臨床試驗(yàn)后其免疫效果卻不理想。經(jīng)過(guò)優(yōu)化抗原組成的H56∶IC31在臨床試驗(yàn)中顯示出良好的免疫原性，但需要進(jìn)一步研究其對(duì)QFT+和QFT-個(gè)體的適用性。MVA85A對(duì)嬰幼兒的免疫保護(hù)作用不佳，但與ChAdOx1 85A聯(lián)合免疫成人后可加強(qiáng)ChAdOx1 85A的免疫原性。因此，疫苗抗原的選擇和免疫方案的優(yōu)化及其對(duì)不同類(lèi)型人群的適應(yīng)性等因素對(duì)疫苗的免疫效果尤為重要。盡管近年來(lái)體液免疫反應(yīng)逐漸引起研究者們的注意[63]，但目前大多數(shù)疫苗的設(shè)計(jì)靶標(biāo)仍然是細(xì)胞免疫反應(yīng)。對(duì)于Ag85、ESAT-6等抗原，T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)較抗體介導(dǎo)的免疫反應(yīng)對(duì)抗MTB感染可能更有效。僅使用主要誘導(dǎo)體液免疫反應(yīng)的鋁佐劑未能誘導(dǎo)明顯的抗感染免疫應(yīng)答[64]。而使用主要誘導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)的蛋白佐劑疫苗[44]或病毒載體疫苗[27，58]能發(fā)揮較好的抗感染保護(hù)作用?？赡芏嗵穷?lèi)抗原以誘導(dǎo)體液免疫反應(yīng)為主發(fā)揮抗感染作用[65-66]，但尚需進(jìn)一步的臨床研究證實(shí)。