李翔 李大鵬 潘綿立 沈龍海 李炳生

摘要：目的研究薏苡仁油軟膠囊單用及合并索拉菲尼對(duì)移植于裸鼠的人體肝癌HepG2的抑制作用。方法制備移植于裸鼠的人體肝癌HepG2模型，分別按計(jì)劃方案給藥，動(dòng)態(tài)觀察和測(cè)量腫瘤大小及荷瘤鼠體重，按金氏公式計(jì)算腫瘤抑制率及相對(duì)腫瘤增長(zhǎng)率。結(jié)果單用薏苡仁油軟膠囊三個(gè)劑量組對(duì)移植于裸鼠的人體肝癌HepG2抑瘤率分別為45.67%、40.07%、37.20%，薏苡仁油軟膠囊（三個(gè)劑量）合并索拉菲尼對(duì)應(yīng)抑瘤率分別為52.33%、49.20%、46.80%。結(jié)論在本實(shí)驗(yàn)條件下，單用薏苡仁油軟膠囊三個(gè)劑量組對(duì)移植于裸鼠的人體肝癌腫瘤細(xì)胞具有很好的抑制作用，合并索拉菲尼具有明顯相加作用。

關(guān)鍵詞：薏苡仁油軟膠囊;裸鼠;肝癌HepG2;金氏公式

薏苡仁油注射液（商品名：康萊特注射液）是中國(guó)工程院院士李大鵬教授研制開(kāi)發(fā)的中藥二類抗腫瘤藥物，是從禾本科植物薏苡仁中提取天然有效抗癌活性物質(zhì)薏苡仁油制備而成的脂肪乳劑，大量臨床研究已證實(shí)其具有明顯的廣譜抗腫瘤作用[1-3]。薏苡仁油軟膠囊是在該注射液產(chǎn)品基礎(chǔ)上對(duì)劑型進(jìn)行改進(jìn)后開(kāi)發(fā)而成的口服制劑，相對(duì)于注射劑型，更方便患者服用，主要用于原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌的治療。索拉菲尼（如多吉美）為當(dāng)前臨床廣泛應(yīng)用的用于治療無(wú)法手術(shù)或遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移肝細(xì)胞癌（HCC）的一線靶向藥物，然而該藥在肝癌治療中存在的原發(fā)性或獲得性耐藥情況愈發(fā)突出，影響了肝癌的療效[4]，如何有效應(yīng)對(duì)此類疾病一線藥物耐藥后的治療選擇，逐漸成為熱點(diǎn)問(wèn)題。鑒于前述薏苡仁油乳劑的廣譜抗癌作用，筆者進(jìn)行了薏苡仁油軟膠囊單用及合并索拉菲尼對(duì)移植于裸鼠的人體肝癌HepG2的抑制作用實(shí)驗(yàn)，初步探索薏苡仁油軟膠囊單用及聯(lián)合索拉非尼治療肝癌的效果，為緩解索拉菲尼耐藥問(wèn)題提供新的思路與依據(jù)。

1.??? 實(shí)驗(yàn)材料

1.1? 實(shí)驗(yàn)藥物

薏苡仁油軟膠囊（含薏苡仁油99.5%，維生素E0.5%）（浙江康萊特藥業(yè)有限公司，薏苡仁油軟膠囊原液直接灌胃使用）;多吉美（甲苯磺酸索拉菲尼，拜耳醫(yī)藥）;生理鹽水。

1.2? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

BALB/C裸鼠（SPF級(jí)），上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（滬）20121-0002。

1.3? 瘤源

人體腫瘤肝癌HepG2由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院藥理室傳代。

2.??? 實(shí)驗(yàn)方法

取液氮凍人體腫瘤肝癌HepG2細(xì)胞株，復(fù)蘇后，置37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)。經(jīng)傳代培養(yǎng)后，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，用生理鹽水制備成（1-2）×106細(xì)胞·mL·1濃度的細(xì)胞懸液，接種于裸鼠右腋皮下。待腫瘤生長(zhǎng)至1g以上時(shí)，無(wú)菌條件下取體內(nèi)生長(zhǎng)旺盛的人體腫瘤肝癌HepG2第 2代異種移植模型的腫瘤組織，切割成1～2mm3大小的均勻小塊，用套管針于每只裸小鼠右腋皮下接種一塊。待接種腫瘤被觸及后，隨機(jī)分組，按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案給藥，見(jiàn)表1。

所應(yīng)用的飼料、墊料、籠具及接觸的器械等均應(yīng)高壓消毒后使用，裸鼠置于層流架中SPF條件飼養(yǎng)，動(dòng)態(tài)觀察和測(cè)量腫瘤大小及荷瘤鼠體重，每 5d用卡尺測(cè)量各裸鼠腫瘤的短徑（a）及長(zhǎng)徑（b），按（a2×b）/2公式計(jì)算腫瘤體積。根據(jù)測(cè)量計(jì)算的腫瘤體積計(jì)算出相對(duì)腫瘤體積（RTV），RTV=Vt/V0。其中V0為隨機(jī)分組（即d0）時(shí)的腫瘤體積，Vt為每一次測(cè)量（即dn）時(shí)的腫瘤體積。四周左右處死各組動(dòng)物，剖取腫瘤稱重，按下列公式計(jì)算腫瘤抑制率及相對(duì)腫瘤增長(zhǎng)率。

腫瘤抑制率%=[（對(duì)照組平均瘤重- 給藥組平均瘤重）/對(duì)照組平均瘤重]×100%

相對(duì)腫瘤增殖率%=（給藥組RTV/對(duì)照組RTV）×100%

合并用藥的效應(yīng)根據(jù)金氏公式計(jì)算Q值：

Q=Ea+b/（Ea+Eb-Ea×Eb）

Ea+b為合并用藥的抑瘤率，Ea和Eb分別為A藥和B藥的抑瘤率。如Q值0.85-1.15為相加（+），﹥1.15為增強(qiáng)（++）。

3.??? 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

按照實(shí)驗(yàn)方法操作，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1 及表2。

根據(jù)金氏公式計(jì)算Q值，結(jié)果顯示薏苡仁油軟膠囊聯(lián)合索拉菲尼具有相加作用：

薏苡仁油軟膠囊10mL·kg-1合并索拉菲尼100mg·kg-1，Q值0.8805（+）。

薏苡仁油軟膠囊5mL·kg-1合并索拉菲尼100mg·kg-1，Q值0.8905（+）。

薏苡仁油軟膠囊2.5mL·kg-1合并索拉菲尼100mg·kg-1，Q值0.8812（+）。

4.??? 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

薏苡仁油軟膠囊劑量10，5，2.5mL·kg-1， 按照連續(xù)灌胃給藥14d，1次·d-1的方案單獨(dú)給藥，對(duì)移植于裸鼠的人體肝癌HepG2的生長(zhǎng)有明顯抑制作用。

薏苡仁油軟膠囊劑量10，5，2.5mL·kg-1，分別合并索拉菲尼100mg·kg-1，對(duì)移植于裸鼠的人體肝癌HepG2的抑瘤作用明顯強(qiáng)于薏苡仁油軟膠囊或索拉菲尼單獨(dú)給藥，兩藥合并有明顯的相加作用。

5.??? 討論

肝癌是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，據(jù)國(guó)家癌癥中心2015年惡性腫瘤流行病學(xué)估算結(jié)果顯示，肝癌當(dāng)年新發(fā)病例約37萬(wàn)，居惡性腫瘤第4 位，死亡約32.6萬(wàn)，居惡性腫瘤第2 位。2015年肝癌發(fā)病率位居男性第3 位，女性第7 位;死亡率居男性第2 位，女性第3 位[5]。而據(jù)全球癌癥負(fù)擔(dān)估計(jì)結(jié)果顯示，在全球185個(gè)國(guó)家或地區(qū)中，中國(guó)的惡性腫瘤發(fā)病、死亡位居中等偏上水平，其中如食管癌、胃癌、肝癌等惡性腫瘤的發(fā)病和死亡約占全球的一半[6]，整體防控形勢(shì)嚴(yán)峻。

對(duì)于晚期肝癌病人，有效的系統(tǒng)治療可減輕腫瘤負(fù)荷，改善腫瘤相關(guān)癥狀，提高生活質(zhì)量，延長(zhǎng)生存時(shí)間。多激酶抑制劑索拉非尼是被美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的用于治療晚期肝癌的一線分子靶向藥物。國(guó)家衛(wèi)健委頒布的原發(fā)性肝癌診療規(guī)范（2019年版）及CSCO發(fā)布的原發(fā)性肝癌治療指南（2018年版）均將索拉非尼推薦為晚期HCC的一線治療藥物[7，8]。多項(xiàng)臨床研究表明，索拉非尼對(duì)不同國(guó)家地區(qū)、不同肝病背景的晚期肝癌病人都具有一定的生存獲益[9]。而相對(duì)于肝功能Child-Pugh B級(jí)，Child-Pugh A級(jí)的病人生存獲益更明顯[10]。然而，部分HCC對(duì)其耐藥性的出現(xiàn)影響了總體療效，耐藥分為原發(fā)性（HCC原本就對(duì)索拉非尼缺乏敏感性）和獲得性（開(kāi)始敏感，治療過(guò)程中出現(xiàn)耐藥）兩類，相關(guān)機(jī)制研究尚未達(dá)成統(tǒng)一認(rèn)識(shí)[11]。如何有效應(yīng)對(duì)此類疾病一線療法耐藥后的治療方式選擇，成為一線臨床醫(yī)生所面臨的新問(wèn)題，形成了新的臨床需求。

HepG2是肝癌藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用瘤株。從本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，薏苡仁油軟膠囊不僅單用可明顯抑制其生長(zhǎng)，合并索拉非尼更具有明顯相加作用。此外，薏苡仁油軟膠囊還具有增強(qiáng)免疫、降低化療藥物不良反應(yīng)的效果，其原料薏苡仁屬藥食同源，在中國(guó)已有上千年應(yīng)用歷史，多年臨床經(jīng)驗(yàn)亦證實(shí)其安全性良好。綜上所述，薏苡仁油軟膠囊對(duì)于提高晚期HCC的治療水平具有較大潛力，有望成為晚期HCC患者另一治療用藥選擇，值得進(jìn)一步臨床研究與探討。

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