步曉筠， 邵 峰

（寧夏回族自治區(qū)血液中心，銀川 750001）

Rh血型系統(tǒng)是人類紅細胞血型系統(tǒng)中最為重要的基于蛋白的血型系統(tǒng)，在34個已知血型系統(tǒng)中，它表達的抗原數(shù)量最多，分子機制也最復雜，其中與臨床關系較為密切的Rh血型抗原主要是D、C、c、E、e這5種。為了給臨床提供及時、安全、有效的血液，提高對RhD陰性受血者的供血能力，本研究對寧夏回族自治區(qū)初篩為RhD陰性的獻血者的血清學表型分布及表型與D變異型的關系進行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2015年1月1日至2019年6月30日寧夏回族自治區(qū)血液中心的初次無償獻血且初篩RhD陰性獻血者共1092例。

1.2 儀器與試劑

意大利GSM公司的Hemotype全自動血型分析儀，日本Kubota公司的KA-2200型離心機。RhD陰性初篩試劑使用英國Millipore公司的單克隆IgM和IgG抗-D混合劑，RhD陰性確認試驗采用加拿大Dominion Biologicals limited公司的單克隆IgM和IgG抗-D混合劑、英國Millipore公司的單克隆IgM和IgG抗-D混合劑以及上海血液生物醫(yī)藥公司的抗-D（IgG），直接抗人球蛋白試劑、抗C、抗c、抗E、抗e試劑均由上海血液生物醫(yī)藥公司提供。

1.3 方法

1.3.1 鹽水微板法初篩Rh 初篩使用單克隆IgM和IgG抗-D混合劑進行鹽水微板初篩。

1.3.2 間接抗人球蛋白試驗（IAT）進行RhD陰性確認 初篩陰性者的受檢紅細胞分別與3種不同來源的單克隆抗-D（lgM+lgG）或抗-D（IgG）應用生理鹽水試管法進行IAT，同時做陰陽對照。觀察結果均為陰性就確認判定為RhD陰性。實驗結果陽性標本加做直接抗球蛋白試驗排除假陽性。

1.3.3 Rh血清學表型鑒定 分別用抗C、抗c、抗E和抗e試劑對RhD陰性標本進行鹽水試管法血清學分型。

1.4 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析。RhD陰性獻血者與D變異型獻血者間Rh抗原分布差異采用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 RhD陰性獻血者表型分布

1092例初篩RhD陰性獻血者中，1032例確認為RhD陰性獻血者（94.51%），分型為ccee 635例（61.53%）、Ccee 276例（26.74%）、CCee 40例（3.88%）、ccEe 50例（4.84%）、CcEe 29例（2.81%）、CCEe 2例（0.19%）。未見ccEE和CcEE表現(xiàn)型。見表1。

2.2 60例D變異型表型分布

1092例初篩RhD陰性獻血者經間接抗人球蛋白試驗，確定為D變異型共計60例，占總數(shù)的5.49%。ccEe初篩RhD陰性84例，D變異型占40.48%（34/84）；Ccee初篩RhD陰性288例，D變異型占4.17%（12/288）；CCee初篩 RhD 陰性 44例，D 變異型占9.09%（4/44）。見表1。

表1 Rh表現(xiàn)型分布

2.3 Rh抗原分布

C抗原陽性初篩371例，D變異型占6.47%（24/371）；c抗原陽性初篩RhD陰性1046例，D變異型占5.35%（56/1046）；E抗原陽性初篩RhD陰性 125例，D 變異型占 35.20%（44/125）；e抗原陽性初篩RhD陰性1090例，D變異型占5.32%（58/1090）。確認Rh陰性獻血者與D變異型獻血者E抗原分布差異有統(tǒng)計學意義（χ2=239.88，P＜0.01），C 抗原、c抗原、e抗原分布差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表 2。

3 討論

RHD和RHCE基因位于 1p34.3-36.1，RHD基因編碼RhD抗原，RHCE基因編碼RhCE抗原，兩基因緊密連鎖，高度同源[1]。RHD目前已發(fā)現(xiàn)255種等位基因[2]。將過去習慣分類的“弱D”“部分D”統(tǒng)稱為“D變異型”。大體上，D變異型的分子機制有兩種：一種是RHD基因上一些堿基改變導致RhD蛋白上氨基酸轉變；另一種是基因重組產物，基因轉換導致產生RHD-CE-D基因，其中RHD基因的一部分片段被RHCE基因的片段取代[3]。

本研究共檢出D變異型60例，占初篩RhD陰性總數(shù)的 5.49%，濟南為 2.70%[4]、蘇州為2.88%[5]、北京為 3.82%[6]、西安為 4.06%[7]、岳陽為4.80%[8]。60例D變異型分型主要為ccEe 34例（56.67%）、Ccee 12例（20%）、CcEe 8例（13.33%），D變異型表現(xiàn)型分布與西安、北京的研究結果相似，其中西安ccEe占比44.30%[7]、北京ccEe占比63.80%[6]，均以ccEe占比率最高。本研究中ccEe初篩RhD陰性84例中D變異型占40.48%，蘇州為 40%[5]，西安為 27.56%[7]，北京為 27.54%[6]，提示ccEe表現(xiàn)型初篩陰性血樣，出現(xiàn)D變異型概率較高。

本研究中E抗原陽性初篩RhD陰性125例，檢出D變異型占35.20%，確認RhD陰性獻血者與D變異型獻血者間Rh抗原分布進行卡方檢驗，兩組間E抗原分布差異具有統(tǒng)計學意義，以上數(shù)據(jù)均提示含有E抗原的初篩RhD陰性個體，出現(xiàn)D變異型的占比遠高于不含E抗原的初篩RhD陰性個體，與之前北京、濟南的研究結果一致[4，6]。因此，E抗原陽性或表現(xiàn)型為ccEe為初篩RhD陰性血樣中有較高比例為D變異型，建議對這類血樣尤以關注，避免D變異型的漏檢。

表2 Rh抗原分布

如果將D變異型的血液輸給RhD陰性的受血者，受血者可能產生免疫反應，從而產生抗D抗體，也可能引起嚴重的新生兒溶血病[9]。D變異型的檢出，避免了RhD陰性輸血患者接受D抗原刺激產生抗D抗體的風險，提高了免疫后產生抗體的RhD陰性輸血患者的輸血安全性和有效性。寧夏地區(qū)RhD陰性及D變異型獻血者的表現(xiàn)型分布資料，對進一步指導臨床特殊配血，保障輸血安全具有重要意義。