王培卿 李山雷 蔣鳳婷 劉振花

1.河南大學(xué) 淮河醫(yī)院,河南 開封 475004;2.河南龍豐實(shí)業(yè)股份有限公司,河南 濮陽 457300;3.河南省功能食品工程技術(shù)研究中心,河南 開封 475004;4.河南省藥食兩用資源功能研究國際聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室,河南 開封 475004

馬兜鈴為馬兜鈴科植物北馬兜鈴 (AristolochiacontortaBunge.) 和南馬兜鈴 (Aristolochia debilisSieb.et Zucc.)的干燥成熟果實(shí)[1]?！独坠谥苏摗酚涊d馬兜鈴具有清肺降氣、止咳平喘、清腸消痔之功效,主要用于肺熱喘咳,痰中帶血,腸熱痔血,痔瘡腫痛[2]。其主要成分是水溶性季胺生物堿、馬兜鈴酸、馬兜鈴次酸及木蘭堿等[3]。楊標(biāo)等[4]采用高效液相色譜法對馬兜鈴及各炮制品中馬兜鈴酸類物質(zhì)的含量進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示,炮制后幾種主要的馬兜鈴酸類物質(zhì)的含量均降低,馬兜鈴酸的毒性降低。

傅立葉變換紅外光譜法具有操作簡便、整體、快速、無損檢測復(fù)雜體系的特點(diǎn),能夠?qū)χ兴幉牡娜M分進(jìn)行測定,反映整個體系的細(xì)節(jié)問題,更具有整體性,因此更適合中藥材的質(zhì)量控制,在中藥的鑒別研究中應(yīng)用日益廣泛[5-7]。本實(shí)驗(yàn)主要采用紅外二階導(dǎo)數(shù)譜分析了馬兜鈴炮制前后紅外光譜的變化,分析并總結(jié)其變化規(guī)律,為進(jìn)一步規(guī)范馬兜鈴不同炮制品的質(zhì)量控制提供一定的理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

IR Affinity-1s傅里葉變換紅外光譜儀(島津企業(yè)管理有限公司);HW-3型紅外烘干箱(天津市拓普儀器有限公司);DHG-9053A 型電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海-恒科學(xué)儀器有限公司);AL204型千分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司);F-300型手壓塑料封接機(jī)(溫州市鹿城區(qū)南浦豐奇包裝機(jī)械廠);100目分樣篩(上虞市儀器紗篩廠);十分之一電子天平(佑科儀器);平底鍋;電磁爐;電爐等。

1.2 材料

NaHCO3顆粒(天津市化學(xué)試劑批發(fā)公司);溴化鉀顆粒(光譜純);新鮮生姜;蜂蜜(上海冠生園蜂制品有限公司);陳醋(山西紫林醋業(yè)股份有限公司);鹽(中鹽上海市鹽業(yè)公司)。

馬兜鈴于2016年10月購自河南省禹州藥材市場,經(jīng)河南大學(xué)藥學(xué)院中藥教研室李昌勤教授鑒定為馬兜鈴科植物馬兜鈴(AristolochiadebilisSieb.et Zucc.)的果實(shí),標(biāo)本存放于河南大學(xué)中藥研究所。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 樣品炮制

2.1.1 生品

取馬兜鈴,揀去果柄,除凈雜質(zhì),篩去灰屑。

2.1.2 蜜炙

取馬兜鈴生品,與煉蜜拌勻,待蜜液吸盡,置于熱鍋內(nèi),用文火炒至不粘手,顏色加深,取出,放涼。每100 kg馬兜鈴用煉蜜30 kg。

2.1.3 醋炙

取馬兜鈴生品,與適量醋混勻,燜潤至醋被藥材吸盡,用文火炒干。每100 kg 馬兜鈴用米醋20 kg。

2.1.4 鹽炙

取馬兜鈴生品,與一定量食鹽水拌勻,待鹽水吸盡,置炒鍋內(nèi)用文火炒干。每100 kg馬兜鈴用食鹽2 kg。

2.1.5 姜炙

取馬兜鈴生品,與適量姜汁(新鮮生姜榨取)拌勻,待姜汁被吸盡后,置炒鍋內(nèi)用文火炒干。每100 kg馬兜鈴用姜汁45 kg。

2.1.6 堿制

取馬兜鈴生品,加10 倍量0.1 mol/L 的NaHCO3溶液浸泡3次,每次2 h,取出用蒸餾水洗至無色,干燥。

2.1.7 先堿制后醋炙

取堿制馬兜鈴,與三分之一用量米醋拌勻,待醋被吸盡,用文火炒干。

2.2 供試品的制備

分別取馬兜鈴的生品及炮制品,分別打粉,過200目篩,60 ℃干燥至恒重,置EP管中備用。

2.3 圖譜采集

將上述樣品粉末與溴化鉀粉末同置于瑪瑙研缽中,在紅外烘箱內(nèi)混合研磨均勻。樣品(除蜜炙品)與KBr用量之比約為2∶100,蜜炙品與KBr用量之比為2.6∶100。研磨均勻的粉末取約15.0 mg,壓片,掃描測定其紅外光譜圖。平行操作3次。

紅外光譜條件:光譜測量范圍4 000～400 cm-1,光譜分辨率為4 cm-1,掃描次數(shù)為20次,掃描時實(shí)時扣除水和CO2的干擾[8]。對馬兜鈴不同炮制品的一維紅外光譜進(jìn)行10點(diǎn)平滑、峰檢測、15點(diǎn)二階導(dǎo)數(shù)處理。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 精密度考察

將同一樣品馬兜鈴生品連續(xù)掃描5次,對所得到的譜圖進(jìn)行相似度比較,相關(guān)系數(shù)分別為1.000 0、0.999 8、0.999 7、0.999 6、0.999 3,見 圖1。RSD 值為2.43×10-4,結(jié)果表明,儀器具有較好的精密度。

圖1 馬兜鈴生品精密度考查紅外光譜圖

2.4.2 重現(xiàn)性考察

取同一樣品馬兜鈴生品,按相同制備方法重復(fù)壓片5次,分別進(jìn)行掃描測定,對所得到的譜圖進(jìn)行相似度比較,相關(guān)系數(shù)分別為1.000 0、0.999 0、0.998 3、0.999 3、0.998 1,見圖 2。RSD 值為7.77×10-4,結(jié)果表明,該方法具有良好的重現(xiàn)性,符合實(shí)驗(yàn)分析的要求。

圖2 馬兜鈴生品重現(xiàn)性考查紅外光譜圖

2.4.3 穩(wěn)定性考察

取同一樣品馬兜鈴生品片放入真空干燥器內(nèi)保存,每隔30 min測定1次,測7次,譜圖間相關(guān)系數(shù)分別 為 1.000 0、0.999 7、0.999 2、0.999 3、0.999 2、0.999 0、0.998 8,RSD 值為 4.21×10-4,結(jié)果在3 h內(nèi)所測得的圖譜基本一致,見圖3。

圖3 馬兜鈴生品穩(wěn)定性考查紅外光譜圖

3 結(jié)果

馬兜鈴的不同炮制品的譜圖的基本峰形基本相似。醋炙馬兜鈴和馬兜鈴生品相比,2 854 cm-1處峰稍增強(qiáng),1 651 cm-1處峰稍增強(qiáng)。1 037～1 265 cm-1處峰均有增強(qiáng)的趨勢。姜炙馬兜鈴基本和馬兜鈴生品相似。馬兜鈴堿制與馬兜鈴生品相比,2 854 cm-1處峰增強(qiáng),1 743 cm-1處峰增強(qiáng),1 651 cm-1處峰稍增強(qiáng)。馬兜鈴先堿制后醋炙與馬兜鈴生品相比較,1 743 cm-1處峰增強(qiáng),1 265 cm-1處峰增強(qiáng)。馬兜鈴鹽炙與馬兜鈴生品相比,2 854 cm-1處峰增強(qiáng),1 743 cm-1處峰增強(qiáng),1 256、1 056、1 037 cm-1處等峰有所增強(qiáng)。蜜炙馬兜鈴與馬兜鈴生品相比較,2 854、1 743、1 256、1 056、1 037 cm-1處峰形均有所減小。

通過對馬兜鈴不同炮制品的局部2 000～500 cm-1波譜分析,醋炙馬兜鈴與生品比較,1 265 cm-1處峰消失,出現(xiàn)了1 157 cm-1處峰;姜炙馬兜鈴在810 cm-1處峰和1 265 cm-1處峰消失,出現(xiàn)了1 157 cm-1處峰,1 516 cm-1處峰紅移4 cm-1;馬兜鈴堿制與生品相比,810 cm-1處峰藍(lán)移84 cm-1,出現(xiàn)了1 157 cm-1處峰;馬兜鈴先堿制后醋炙與生品相比,1 377 cm-1處峰紅移4 cm-1,1 512 cm-1處峰藍(lán)移4 cm-1,出現(xiàn)了1 157 cm-1處峰;馬兜鈴鹽炙與馬兜鈴生品相比,810 cm-1處峰藍(lán)移84 cm-1,出現(xiàn)了1 157 cm-1處峰;蜜炙馬兜鈴與生品相比變化較大,810 cm-1處峰藍(lán)移7 cm-1,1 377 cm-1處峰紅移4 cm-1,1 612 cm-1處峰紅移39 cm-1,1 743 cm-1處峰紅移4 cm-1。

通過對馬兜鈴不同炮制品的二階導(dǎo)數(shù)圖譜進(jìn)行對比,發(fā)現(xiàn)馬兜鈴的不同炮制品的譜圖基本相似。除了蜜炙馬兜鈴?fù)?其他馬兜鈴炮制品的二階導(dǎo)數(shù)圖譜峰均有增強(qiáng)的趨勢。而蜜炙馬兜鈴峰形變小,說明蜜炙后的馬兜鈴中部分成分含量有所下降。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)之所以選擇紅外光譜技術(shù),主要是因?yàn)榧t外光譜法不需要對中藥進(jìn)行提取、分離等一系列復(fù)雜的化學(xué)處理,就可直接進(jìn)行檢測。體現(xiàn)了中藥的整體性,反映整個體系的細(xì)節(jié)問題,沒有喪失原本性以及配伍性。能以綜合、宏觀、非線性的理念分析和質(zhì)量控制模式來評價中藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣。以一定的量化指標(biāo)評價中藥的穩(wěn)定性和一致性,基本解決了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化的問題。

本實(shí)驗(yàn)通過比較馬兜鈴不同炮制品的一維紅外圖譜和二階導(dǎo)數(shù)圖譜,可以發(fā)現(xiàn)不同馬兜鈴的炮制品(除了蜜炙馬兜鈴)的紅外圖譜基本相似,說明其成分基本相似。此外,可以看出蜜炙馬兜鈴的圖譜變化最明顯,說明蜜炙馬兜鈴的成分及含量變化最大。馬兜鈴經(jīng)炮制后,可以看出部分峰形有所改變。或位移,或消失,或出現(xiàn)新峰,表明炮制對馬兜鈴有一定影響。

二階導(dǎo)數(shù)圖譜可以提高譜圖分辨率,使各種樣品的紅外特征更加突出。紅外光譜法樣品制備簡單,儀器設(shè)備普及性強(qiáng),在中藥的差異性分析中具有一定的優(yōu)勢。