楊光勇, 郭蒼亭, 薛 光, 郭金喜

(1. 新疆維吾爾自治區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院, 新疆 烏魯木齊 830011;2. 烏魯木齊市疾病預(yù)防控制中心, 新疆 烏魯木齊 830026)

3-氯-1,2-丙二醇脂肪酸酯(3-chloro-1,2-propanediol fatty acid esters, 3-MCPDE)的危害和污染狀況近年受到國際社會(huì)的廣泛關(guān)注。3-MCPDE主要存在于食用植物油中[1,2],且大多產(chǎn)生于精煉過程,尤其是脫臭步驟[3,4],形成機(jī)制尚不明確。此外,食品在烹飪、加工過程中也會(huì)生成3-MCPDE[5,6],尤其是加入氯化物后,3-MCPDE的含量會(huì)急劇上升[7,8]。隨著研究范圍的不斷擴(kuò)大,研究者發(fā)現(xiàn)3-MCPDE廣泛存在于奶粉[9]、油炸食品[10]、牛奶[11]、谷物[12]等多種食品及其原材料中。我國于2015年開始將3-MCPDE納入食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)計(jì)劃,近幾年相關(guān)研究[13-16]及監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示,國內(nèi)3-MCPDE的整體檢出率居高不下,污染狀況不容樂觀。

3-MCPDE的毒性目前仍不清楚,但其代謝產(chǎn)物3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)被證明具有生殖毒性、腎臟毒性、潛在的致癌性及免疫抑制性[17,18],是氯丙醇類化合物中危害性最大的物質(zhì),常被作為氯丙醇的代表和毒性參照物[1]。3-MCPD具有兩個(gè)羥基和兩種光學(xué)異構(gòu)體,可與多種脂肪酸反應(yīng)形成各類3-MCPD單酯和二酯,結(jié)構(gòu)上的差異使其在人體內(nèi)的酶解速率、代謝途徑、毒理學(xué)作用等方面表現(xiàn)出極大差異[19,20]。因此,有必要對(duì)各3-MCPDE單體進(jìn)行分離和測(cè)定,為評(píng)估3-MCPDE的健康風(fēng)險(xiǎn)提供更加準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。

目前,3-MCPDE的檢測(cè)方法有間接法和直接法。間接法是將樣品水解后,提取出水解液中的3-MCPD進(jìn)行衍生,用氣相色譜-質(zhì)譜法分析其衍生物[21,22]。間接法只能測(cè)定氯丙醇酯總量,無法確定其單體的種類和含量。方法操作煩冗復(fù)雜,所用衍生試劑昂貴且不穩(wěn)定;水解過程還會(huì)將油脂中的縮水甘油酯轉(zhuǎn)化成氯丙醇,影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性[23]。直接法是在不破壞3-MCPDE結(jié)構(gòu)的情況下,采用液相色譜法[24]、液相色譜-質(zhì)譜法[25,26]、超臨界流體色譜-質(zhì)譜法[27]等測(cè)定其單體含量的方法,其中有些采用溶解后直接進(jìn)樣分析的方法[27,28],但大部分是先凈化再檢測(cè)[29-31]。液相色譜法定性能力不足,靈敏度低,無法測(cè)定痕量3-MCPDE?；诜聪嘁合嗌V的質(zhì)譜方法,流動(dòng)相與樣品不能很好兼容,色譜柱易堵塞,柱效下降極快;未經(jīng)凈化或凈化不充分時(shí)質(zhì)譜儀極易污染,基質(zhì)干擾明顯,盡管使用了氘代化合物作為內(nèi)標(biāo),但某些研究的回收率仍很低(≥62.55%)[27,32];一些研究[28,32]使用含鈉鹽的流動(dòng)相,嚴(yán)重污染和腐蝕離子源,需每天清洗甚至更換組件,大幅增加檢測(cè)成本。

超高效合相色譜(ultra performance convergence chromatography, UPC2)兼具超臨界流體色譜的優(yōu)勢(shì)和傳統(tǒng)高效液相色譜的易用性,已被成功應(yīng)用于甘油三酯(TAGs)[33]、游離脂肪酸(FFAs)[34]、塑化劑[35]等脂溶性化合物的分析。本實(shí)驗(yàn)用超高效合相色譜-三重四極桿質(zhì)譜建立了測(cè)定食用植物油和油條中15種3-MCPDE單體含量的方法,為測(cè)定植物油及油炸食品中氯丙醇酯類化合物提供了綠色環(huán)保、快速準(zhǔn)確的新方法。該法靈敏度高,專屬性好,基質(zhì)兼容性強(qiáng),較傳統(tǒng)方法極具優(yōu)勢(shì),能有效測(cè)定3-MCPDE的組成和含量,對(duì)其毒理學(xué)評(píng)價(jià)、形成機(jī)制研究等具有重要意義。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

UPC2-TQS超高效合相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀、ACQUITY QDa質(zhì)譜檢測(cè)器(美國Waters公司), N-EVAP-24氮吹儀(美國Organomation公司),渦旋混合器(德國Heidolph公司);氨基吸附劑(40 μm,美國Agilent公司)。

標(biāo)準(zhǔn)品:1-棕櫚酸-3-氯-1,2-丙二醇酯(P)、1-硬脂酸-3-氯-1,2-丙二醇酯(St)、1-油酸-3-氯-1,2-丙二醇酯(O)、1-亞油酸-3-氯-1,2-丙二醇酯(L)、1-亞麻酸-3-氯-1,2-丙二醇酯(Ln)、1,2-二棕櫚酸-3-氯-1,2-丙二醇酯(PP)、1,2-二硬脂酸-3-氯-1,2-丙二醇酯(StSt)、1,2-二油酸-3-氯-1,2-丙二醇酯(OO)、1,2-二亞油酸-3-氯-1,2-丙二醇酯(LL)、1,2-二亞麻酸-3-氯-1,2-丙二醇酯(LnLn)購自日本和光公司;1-月桂酸-3-氯-1,2-丙二醇酯(La)、1-肉豆蔻酸-3-氯-1,2-丙二醇酯(My)、1-油酸-2-亞油酸-3-氯-1,2-丙二醇酯(OL)、1-油酸-2-亞麻酸-3-氯-1,2-丙二醇酯(OLn)、1-油酸-2-硬脂酸-3-氯-1,2-丙二醇酯(OSt)購自加拿大TRC公司;甲酸、正己烷、甲醇、乙腈、乙酸乙酯、異丙醇均為色譜純,購自美國Thermo Fisher公司。食用植物油和油條樣品均購自當(dāng)?shù)厥袌?chǎng)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1儀器條件

色譜條件:色譜柱為Viridis HSS C18 SB柱(150 mm×2.1 mm, 1.8 μm);柱溫為45 ℃;流動(dòng)相A為超臨界CO2, B為40%乙腈甲醇溶液(含0.1%甲酸);流速為1.0 mL/min。洗脫梯度程序?yàn)?～1.0 min, 0.2%B; 1.0～9.0 min, 0.2%B～2.0%B; 9.0～11.0 min, 2.0%B～25%B; 11.0～13.0 min, 25%B; 13.0～14.0 min, 25%B～0.2%B。系統(tǒng)背壓為12.07 MPa;補(bǔ)償液為97%異丙醇水溶液(含0.2%氨水);流速為0.2 mL/min;進(jìn)樣體積為5 μL。

質(zhì)譜參數(shù):電噴霧電離源,正離子模式(ESI+);采集方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式;離子源溫度150 ℃;去溶劑氣流量750 L/h;去溶劑氣溫度350 ℃;毛細(xì)管電壓3.5 kV;流動(dòng)相切換時(shí)間設(shè)置為4～9 min切換至ESI源,其他時(shí)間段排至廢液。15種3-MCPDE的保留時(shí)間、相對(duì)分子質(zhì)量、母離子和子離子見表1。

ACQUITY QDa質(zhì)譜檢測(cè)器操作簡(jiǎn)單直觀,抗污染能力強(qiáng),實(shí)驗(yàn)將其與超高效合相色譜儀聯(lián)用后用于優(yōu)化樣品制備條件。

ACQUITY QDa質(zhì)譜檢測(cè)器參數(shù)為:正離子模式,掃描范圍300～910 Da,離子源溫度150 ℃,去溶劑氣溫度300 ℃,毛細(xì)管電壓1.5 kV,錐孔電壓15 kV,增益1,采集速率1點(diǎn)/s;負(fù)離子模式,掃描范圍180～400 Da,毛細(xì)管電壓0.8 kV,采集速率2點(diǎn)/s,其他參數(shù)同前。

表 1 15種3-MCPDE的保留時(shí)間、相對(duì)分子質(zhì)量、母離子及子離子

1.2.2樣品溶液的制備

標(biāo)準(zhǔn)品溶液:精密稱取適量各標(biāo)準(zhǔn)品,用正己烷制成1 g/L的儲(chǔ)備液;再量取各儲(chǔ)備液適量,用正己烷稀釋成1 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)使用液,上述溶液均置于-18 ℃冰箱保存。

樣品溶液:將植物油充分混勻備用,油條按GB 5009.6-2016《食品中脂肪的測(cè)定索氏提取法》提取出油脂后備用;稱取2.00 g氨基吸附劑,以正己烷為溶劑濕法裝入自制層析柱(經(jīng)改造的10 mL酸式滴定管),臨用前排出正己烷。

稱取0.100 g樣品,置于1.5 mL離心管中,加入0.2 mL正己烷,渦旋溶解后轉(zhuǎn)入層析柱,以0.4 mL正己烷分兩次洗滌離心管,洗滌液一并轉(zhuǎn)入層析柱;用20 mL正己烷洗脫,控制流速為3 mL/min,收集第7～14 mL洗脫液,其余棄去;再以10 mL正己烷-乙酸乙酯(6∶4, v/v)洗脫,流速同上,收集第3～9 mL洗脫液。合并收集的洗脫液,置于離心管中,于60 ℃氮吹至干,加入1 mL正己烷-異丙醇(98∶2, v/v),渦旋溶解殘?jiān)?過0.22 μm濾膜。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜和質(zhì)譜條件的優(yōu)化

2.1.1色譜柱的選擇

因未酯化羥基和碳鏈數(shù)的影響,使3-MCPD單酯和雙酯的分離較為容易,但各單酯、雙酯單體之間的結(jié)構(gòu)和極性極為相似,為選擇色譜柱帶來一定難度。實(shí)驗(yàn)考察了3種填料的UPC2色譜柱Viridis HSS C18 SB(150 mm×2.1 mm, 1.8 μm)、Torus 1-AA(100 mm×3.0 mm, 1.8 μm)、BEH(100 mm×3.0 mm, 1.8 μm)對(duì)分離效果的影響。HSS C18 SB色譜柱是經(jīng)過改進(jìn)的反相色譜柱,對(duì)酯類化合物具有很好的保留能力;1-AA色譜柱填料在硅膠顆粒上鍵合了1-氨基蒽,可與3-MCPDE的不飽和酯鏈產(chǎn)生電子轉(zhuǎn)移、π-π等多種作用,具有較好的選擇性;BEH色譜柱填裝了亞乙基橋雜化顆粒,對(duì)于各3-MCPDE單體間的極性差異較為敏感。然而選用1-AA色譜柱無法有效分離15種3-MCPDE,各組分色譜峰均互相包埋或形成肩峰;選用BEH色譜柱雖能分離3-MCPD單酯和雙酯,但對(duì)于極性差異較小的目標(biāo)化合物仍無法實(shí)現(xiàn)基線分離；選用HSS C18 SB色譜柱時(shí),各3-MCPDE分離趨勢(shì)最為明顯。因此,實(shí)驗(yàn)選擇HSS C18 SB色譜柱進(jìn)行測(cè)定。

2.1.2色譜柱溫度及系統(tǒng)背壓的選擇

色譜柱溫度和系統(tǒng)背壓的變化會(huì)改變超臨界CO2的密度,從而影響其洗脫能力,當(dāng)柱溫升高、背壓減小時(shí),流動(dòng)相密度變小,化合物保留時(shí)間延長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)分別考察了不同柱溫(25、35、45、55 ℃)、不同背壓(12.07、12.76、13.45、14.13 MPa)對(duì)分離效果的影響。結(jié)果表明,背壓對(duì)分離的影響較小;柱溫較高時(shí),分析時(shí)間延長(zhǎng),柱溫較低時(shí),OSt和StSt的色譜峰略有拖尾。綜合考慮分離度、系統(tǒng)壓力極限等因素,選取45 ℃柱溫、12.07 MPa背壓為測(cè)定條件。

2.1.3流動(dòng)相改性劑的選擇

為改變超臨界CO2對(duì)化合物的溶解和洗脫能力,需在流動(dòng)相中引入適量甲醇、乙腈等溶劑作為改性劑。實(shí)驗(yàn)分別以不同體積分?jǐn)?shù)(0、10%、20%、30%、40%)的乙腈甲醇溶液作為改性劑,考察了改性劑洗脫強(qiáng)度對(duì)分離效果的影響;同時(shí),為增強(qiáng)未鍵合硅醇羥基和氯丙醇酯的氫鍵作用,增加色譜選擇性,向各改性劑中加入0.1%(v/v)的甲酸。結(jié)果表明,隨著乙腈體積分?jǐn)?shù)的增加,洗脫強(qiáng)度變?nèi)?各組分保留時(shí)間延長(zhǎng),分離趨勢(shì)增加;當(dāng)乙腈體積分?jǐn)?shù)為40%時(shí),各組分基本達(dá)到基線分離(分離度≥1.33)。

在優(yōu)化的色譜條件下,采用UPC2-MS/MS對(duì)15種3-MCPDE混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 mg/L)進(jìn)行測(cè)定,其提取離子流色譜圖見圖1。

圖 1 15種3-MCPDE混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 mg/L)的提取離子流色譜圖Fig. 1 Extracted ion current chromatogram of the 15 3-MCPDE mixed standard solution (1 mg/L)

圖 2 補(bǔ)償液中(a)氨水和(b)純水的體積分?jǐn)?shù)對(duì)4種3-MCPDE峰高的影響Fig. 2 Effects of volume fractions of (a) ammonium hydroxide and (b) water in compensation solution on the peak heights of the four 3-MCPDE

2.1.4補(bǔ)償液組成及流速的優(yōu)化

補(bǔ)償液由柱塞泵輸送至系統(tǒng)中,主要用于傳輸化合物至質(zhì)譜儀,并促使其離子化。補(bǔ)償液不參與色譜分離,但其流速和組成對(duì)化合物色譜峰形、離子化效率等均有較大影響。為獲得較好的色譜峰形和響應(yīng)強(qiáng)度,實(shí)驗(yàn)選用溶解性能和促離子化能力較為折中的異丙醇作為補(bǔ)償液,并在異丙醇中加入添加劑以促進(jìn)3-MCPDE離子加合物的形成。尚月[36]的研究證實(shí),3-MCPDE的銨加合物比其他加合物形式具有更好的質(zhì)譜響應(yīng),因此,實(shí)驗(yàn)以P、O、PP、OO為對(duì)象考察了含不同體積分?jǐn)?shù)(0.1%、0.2%、0.3%、0.4%)氨水的異丙醇補(bǔ)償液在不同流速(0.1、0.2、0.3、0.4 mL/min)下對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。結(jié)果表明,當(dāng)補(bǔ)償液流速為0.2 mL/min、氨水體積分?jǐn)?shù)為0.2%(v/v)時(shí)目標(biāo)化合物色譜峰形和響應(yīng)可達(dá)到最佳狀態(tài)(見圖2a)。此外,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在含0.2%(v/v)氨水的異丙醇補(bǔ)償液中加入適量的純水可進(jìn)一步提高方法的靈敏度,通過比較添加不同體積分?jǐn)?shù)(1%、2%、3%、4%、5%、6%)純水時(shí)化合物的峰高(見圖2b),可知純水的最佳體積分?jǐn)?shù)為3%;當(dāng)超過5%后,系統(tǒng)壓力波動(dòng)明顯,設(shè)備無法就緒,可能因?yàn)樗母弑葻崛菔瓜到y(tǒng)動(dòng)態(tài)背壓閥無法正?？販?或管路中形成雙相流動(dòng)相。

2.2 樣品凈化條件的優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)曾將加標(biāo)植物油樣品(1 mg/kg)溶解后直接進(jìn)樣分析,但個(gè)別組分基質(zhì)效應(yīng)(ME)明顯,回收率較低(≥34.8%)。通過分析共流出組分的一級(jí)、二級(jí)質(zhì)譜圖得知,干擾組分主要為FFAs和短鏈TAGs。因此,實(shí)驗(yàn)在傅武勝等[37]研究的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步優(yōu)化了樣品前處理?xiàng)l件,制作洗脫曲線以確定收集體積,減小基質(zhì)干擾。

按1.2.2節(jié)流程制備樣品,每1 mL收集一次洗脫液,采用1.2.1節(jié)參數(shù)進(jìn)行掃描,并對(duì)3-MCPDE、TAGs及FFAs的提取離子流色譜圖進(jìn)行積分,繪制體積段和各組分峰面積的洗脫曲線。TAGs和FFAs母離子的m/z分別參考其他文獻(xiàn)[34,38]。結(jié)果表明,盡管3-MCPDE與TAGs、FFAs存在部分共洗脫現(xiàn)象,但該法仍可去除大部分雜質(zhì),有效減小了基質(zhì)干擾和設(shè)備污染,同時(shí)提高了方法靈敏度。根據(jù)洗脫曲線確定的收集體積為:3-MCPD二酯7～14 mL, 3-MCPD單酯3～9 mL。

2.3.1基質(zhì)效應(yīng)

分別配制系列基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液和系列空白溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液,然后進(jìn)行測(cè)定,按如下公式考察基質(zhì)效應(yīng):ME=|(基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率/空白溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率-1)|×100%, ME值≤20%為弱基質(zhì)效應(yīng),ME值為20%～50%為中等基質(zhì)效應(yīng),ME值>50%為強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)。結(jié)果表明,植物油和油條樣品的ME值為2.1%～14.6%,基質(zhì)效應(yīng)較弱,可以使用溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量。

2.3.2線性范圍、檢出限和定量限

用正己烷-異丙醇(98∶2, v/v)配制各組分質(zhì)量濃度均為0.5、2.0、5.0、10、25、50、100 μg/L的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,經(jīng)UPC2-MS/MS測(cè)定后,以目標(biāo)物定量離子峰面積為縱坐標(biāo)(Y)、對(duì)應(yīng)質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X, μg/L)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明,15種3-MCPDE在各自的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)(r2)≥0.997 3(見表2)。

在陰性植物油樣品添加適量混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 mg/L),使最終測(cè)試溶液中各目標(biāo)化合物信噪比(S/N)分別為3和10,計(jì)算檢出限(LOD)和定量限(LOQ)。結(jié)果如表2所示,15種3-MCPDE的LOD和LOQ分別為0.01～0.68 μg/L和0.04～1.74 μg/L,低于其他方法[22,24,28]。

2.3.3回收率、精密度

選取陰性植物油樣品,加入適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,制備成各組分含量均為100、250和1 000 μg/kg的加標(biāo)樣品,每個(gè)加標(biāo)水平制備3份,按1.2.2節(jié)前處理方法處理后進(jìn)行測(cè)定,得到樣品的平均回收率為81.6%～98.5%(n=9),相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.8%～6.4%(n=9)(見表2)。

2.4 實(shí)際樣品的測(cè)定

按照建立的方法對(duì)44份植物油和8份油條樣品進(jìn)行檢測(cè)。選取的葵花籽油、棉籽油、紅花籽油、菜籽油、花生油等5類44份食用植物油中共有37份檢出3-MCPDE,總體檢出率為84.1%,檢出含量為0.024～4.481 mg/kg;其中菜籽油檢出率高達(dá)100%,可能與其特殊的加工工藝有關(guān);植物油中檢出率最高的3-MCPD單酯、3-MCPD二酯分別為1-硬脂酸-3-氯-1,2-丙二醇酯和1-油酸-2-亞油酸-3-氯-1,2-丙二醇酯,檢出含量分別為0.021～0.076 mg/kg和0.008～3.174 mg/kg,這與各文獻(xiàn)[25,26,29]報(bào)道情況基本一致。

8份油條的總檢出率為87.5%,檢出含量為0.018～1.144 mg/kg;油條中檢出率最高的3-MCPD單酯、3-MCPD二酯分別為1-亞油酸-3-氯-1,2-丙二醇酯和1-油酸-2-亞油酸-3-氯-1,2-丙二醇酯,檢出含量分別為0.021～0.053 mg/kg和0.011～0.988 mg/kg,該結(jié)果與棉籽油的檢出情況較為接近,可能因?yàn)榕胫茦悠窌r(shí)選用了價(jià)格低廉的棉籽油。

實(shí)驗(yàn)還檢出一些疑似氯丙醇酯的組分,因無相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品而無法準(zhǔn)確定量。如保留時(shí)間為7.26 min的化合物(見圖3a),其母離子m/z為629.1(見圖3b),推導(dǎo)其準(zhǔn)分子離子為[C37H67O4Cl+NH4]+,含2個(gè)C=C鍵。

二級(jí)質(zhì)譜圖如圖3c所示,m/z為355.7和331.9的二級(jí)碎片離子分別為母離子脫去棕櫚酸銨和亞油酸銨后形成的基團(tuán),m/z為263.3和239.2的碎片離子分別為亞油酸、棕櫚酸C-O單鍵斷裂后形成的亞油酰基團(tuán)和棕櫚?；鶊F(tuán),因此推測(cè)該化合物可能為1-棕櫚酸-2-亞油酸-3-氯-1,2-丙二醇酯或其位置異構(gòu)體。

圖 3 實(shí)際樣品中保留時(shí)間為7.26 min化合物的(a)提取離子流色譜圖、(b)一級(jí)質(zhì)譜圖和(c)二級(jí)質(zhì)譜圖Fig. 3 (a) Extracted ion current chromatogram, (b) primary mass spectrum and (c) secondary mass spectrum of the compound whose retention time is 7.26 min in the real sample

3 結(jié)論

本文建立了UPC2-MS/MS測(cè)定植物油和油條中15種3-MCPDE含量的方法,采用優(yōu)化的樣品前處理方式,有效減小了基質(zhì)干擾,并提高了檢測(cè)靈敏度。

方法快速準(zhǔn)確,靈敏度高,專屬性好,綠色環(huán)保,所用流動(dòng)相擴(kuò)散系數(shù)高,質(zhì)量轉(zhuǎn)移能力強(qiáng),基質(zhì)兼容性好,能直接測(cè)定植物油和油條中各3-MCPDE單體的種類和含量。同時(shí),該法在積累大量的、更為廣泛的分析數(shù)據(jù)后還具有辨別地溝油的潛力。

但該法仍存在一定不足,主要表現(xiàn)為:所用質(zhì)譜儀的分辨率有限,對(duì)未知3-MCPDE的定性結(jié)果可能存在偏差;定量過度依賴價(jià)格昂貴且種類有限的單體標(biāo)準(zhǔn)品,而自制標(biāo)準(zhǔn)品難度較大,純度也無法保證;3-MCPD單酯的離子化效率較雙酯低,可能與未酯化羥基有關(guān),后期研究將驗(yàn)證加入酰氯試劑等使其酯化以提高質(zhì)譜響應(yīng)的可能性。