余麗

【中圖分類號】R446.6 【文獻標識碼】B 【DOI】10.12332/j.issn.2095-6525.2020.12.045

免疫熒光檢查是目前臨床上檢查自身抗體病較好的診斷方法之一，尤其是針對早期系統性紅斑狼瘡的診斷效果更佳，然而免疫熒光檢查是什么呢？相信大家對此一知半解，下面本文將對此進行簡單介紹。

1 何為免疫熒光檢查？

免疫熒光是根據抗原抗體反應的原理，將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體或抗原上，與其相應的抗原或抗體結合后，在熒光顯微鏡下進行觀察，從而確定抗原或抗體的性質和定位。免疫熒光實驗的主要步驟包括細胞片、蠟片或冰凍切片制備、固定及通透、封閉、抗體孵育及熒光檢測等。

2 常見方法

2.1量子點免疫層析

量子點是一種由主族Ⅱ～Ⅵ，Ⅲ～Ⅴ元素等組成（如CdSe、CdTe 等）的半導體納米晶體，其粒徑介于 2～10 nm之間，其特點為高量子產率、吸收光譜寬、發(fā)射光譜窄、發(fā)光穩(wěn)定、對光褪色較高耐受等。伴隨著量子點抗體偶聯技術的不斷精進，其標記的生物大分子生物活性得以有效保持，量子點材料作為理想的熒光標志物在病原體示蹤、食品環(huán)境毒素檢測等方面發(fā)揮著重大作用。

2.2熒光微球免疫層析

熒光微球是直徑在納米至微米級范圍內，表面吸附或內含熒光染料，受外界能量刺激而發(fā)射熒光的功能性微球，其載體多為有機或聚合物材料，現以聚苯乙烯微球應用較為廣泛，因其形態(tài)結構相對穩(wěn)定、發(fā)光效率高而適用于生物檢測 。隨著懸浮芯片檢測技術研究的深入，適用于高通量樣本分析的熒光編碼微球制備技術大有進展，其在臨床診斷、即時檢測領域的前景透現曙光。

2.3時間分辨熒光免疫層析

時間分辨熒光免疫分析系以鑭系稀土金屬（如銪 Eu 等）為標記物，其熒光衰變時間長，能有效消除自然熒光的干擾，且無放射性污染，通過配備相應的熒光免疫分析檢測儀而滿足了定量生物檢驗分析的需求 。此外尚可借以采納不同的鑭系元素作為生物標記而實現多標記檢測

2.4熒光淬滅免疫層析

熒光淬滅免疫層析技術是在膠體金免疫層析基礎上改進的，以硝酸纖維素膜上均勻鋪置熒光物質，依靠以膠體金標記的待測抗體結合于 檢 測 線 后 使 該 區(qū) 域 因 熒 光 共 振 能 量 轉 移（fluorescence resonance energy transfer，FRET）現象造成熒光淬滅而實行定量檢測的技術。有學者通過以納米銀（AgNP）為標記物與檢測線上的摻雜釕元素的二氧化硅納米顆粒（RuNPs）發(fā)生熒光淬滅，而實現對葡萄汁及紅酒樣本中赭曲霉素A的定量檢測。

3 臨床應用

3.1炎癥反應性疾病

降鈣素原（procalcitonin，PCT）作為敏感性較高的炎癥性指標，在細菌性感染所致的全身炎癥反應綜合征、膿毒血癥及感染性休克中具有指向意義。有學者通過時間分辨熒光免疫層析技術在 15 min 內便已完成了對樣本中PCT濃度的定量檢測，而在樣本量為234例臨床血清樣本的檢測中，相較于羅氏商業(yè)化試劑盒，該技術展現了耗時短、特異性高的特點，可作為即時檢測的又一選擇。商業(yè)化的 PCT 熒光免疫層析試劑盒已投入臨床使用，其效果亦得到證實 。針對臨床上又一常用的血清炎癥反應指標 —C 反應蛋白（C?reactive protein，CRP），葛宇新等 經由建立了量子點（碲化鎘CdTe）免疫層析技術而實現了快速（10 min 內）、定量檢測，其檢測范圍寬達 0.1～1000 ng/mL。

3.2惡性增殖性疾病

甲胎蛋白（alphafetoprotein，AFP）作為原發(fā)性肝細胞癌的特異性生物學標記物，在疾病的初篩、輔助診斷、復發(fā)判斷中起著重要作用。有學者通過熒光淬滅免疫層析技術對血清樣本中AFP含量進行測定，確定了最低檢測濃度為 1 ng/mL，提出了當供血者在定性的膠體金層析檢測呈陰性而熒光定量免疫層析檢測陽性時不宜獻血的建議。癌胚抗原（carcino embryonicantigen，CEA）作為一種臨床常用的腫瘤標志物，對結直腸腫瘤、胰腺癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤均有提示意義，有學者通過對臨床樣本的 CEA 濃度的檢測驗證了熒光定量免疫層析技術在臨床運用的可行性。有研究者所制的量子點熒光免疫層析試劑檢測閾值為0.72 ng/mL，其靈敏性遠高于傳統的膠體金免疫層析技術。姜欣等 所建立的架構于新型熒光素基礎上的熒光定量免疫層析法，完成了快速、精確的針對胃蛋白酶原的檢測，滿足了國內基層中心與醫(yī)療機構對人群胃癌的早期篩查的需要。

4 科普小結

用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法;用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的方法稱熒光抗原法。這兩種方法總稱免疫熒光技術，以熒光抗體方法較常用。用免疫熒光技術顯示和檢查細胞或組織內抗原或半抗原物質等方法稱為免疫熒光細胞化學技術。免疫熒光技術至今逐漸應用于臨床，對皮膚病的診斷、鑒別診斷、預后判斷及治療觀察等方面具有極高的參考價值。