馬志慧

(河北省承德市中醫(yī)院檢驗科， 河北 承德 067000)

高齡孕婦主要是指分娩年齡≥35歲的孕婦，近年來，由于我國二孩政策的全面開放，加之生育年齡的不斷推遲，臨床上高齡孕婦人數(shù)日益增多[1]。然而，由于高齡孕婦機體狀態(tài)出現(xiàn)顯著的改變，不但會增加妊娠并發(fā)癥發(fā)生風(fēng)險，同時亦會導(dǎo)致胎兒染色體非整倍體的發(fā)生幾率增加，從而增加了新生兒先天性缺陷疾病的發(fā)生風(fēng)險，不利于我國人口素質(zhì)的提高[2]。因此，針對高齡孕婦，國內(nèi)外的專家學(xué)者均建議實施產(chǎn)前診斷，以確定胎兒染色體異常情況，避免先天性缺陷兒的出生。羊膜腔穿刺羊水細胞染色體核型分析是全球范圍內(nèi)所公認的產(chǎn)前診斷有效手段之一，其在胎兒染色體異常檢測方面具有一定的價值。但該檢測方式屬于有創(chuàng)新檢查，可能引發(fā)早產(chǎn)、宮內(nèi)感染以及流產(chǎn)的風(fēng)險，存在一定的局限性，不利于臨床推廣普及。隨著近年來分子生物學(xué)技術(shù)以及醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)的逐漸發(fā)展，無創(chuàng)產(chǎn)前DNA檢測(NIPT)技術(shù)開始被應(yīng)用臨床孕婦產(chǎn)前診斷中。迄今為止，國內(nèi)關(guān)于高齡孕婦NIPT檢測的相關(guān)研究并不多見。鑒于此，本文通過探究NIPT診斷高齡孕婦異常核型的價值并進行分析，旨在為NIPT用于高齡孕婦產(chǎn)前診斷中提供理論依據(jù)?，F(xiàn)作以下報道。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取我院從2016年1月至2019年1月收治的自愿接受NIPT檢測的高齡孕婦1467例作為研究對象。年齡35～47歲，平均年齡(39.74±2.33)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥35歲；②均自愿接受NIPT檢測；③均為單胎妊娠；④孕周在12～24周之內(nèi)。已獲得納入對象及其家屬同意，并得到醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2研究方法:①高齡孕婦外周血采集和處理：通過EDTA-K2管分別采集所有受試者的外周血5mL，于4℃條件下，以4000r/min作為離心條件，進行時長10min的離心處理。隨后在同樣的溫度條件下，以12000r/min作為離心條件，進行時長10min的離心處理。獲取血漿保存在-20℃冰箱中備用，實施后續(xù)大規(guī)模平行測序。②胎兒游離DNA采集：通過離心柱法提取孕婦外周血血漿游離DNA的提取，具體操作務(wù)必以試劑盒說明書進行，相關(guān)試劑盒購自華大生物科技有限公司。③文庫的制備及DNA測序：具體方式為半導(dǎo)體測序法，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行，相關(guān)檢測試劑盒為胎兒染色體非整倍體(T21、T18、T13)檢測試劑盒。嚴(yán)格遵循說明書操作完成孕婦外周血血漿游離DNA文庫的構(gòu)建。④測序結(jié)果分析：通過BGISEQ-100完成測序后，將測序數(shù)據(jù)與人參考基因組進行比對，統(tǒng)計21號、18號以及13號染色體的有效數(shù)據(jù)占總有效數(shù)據(jù)的比例。并對上述相關(guān)染色體的Z值進行計算。通過基于二元假設(shè)的Z-score值對某條染色體是否存在拷貝數(shù)目異常進行評價。評價標(biāo)準(zhǔn)：若Z值≥3，提示非整倍體高風(fēng)險，反之，若Z值<3，提示非整倍體低風(fēng)險。⑤核型分析：以羊水穿刺檢測完成核型分析確診，具體操作如下：于超聲診斷的引導(dǎo)下，于妊娠18～24周進行羊膜腔穿刺術(shù)，采集羊水20mL。穿刺獲得的標(biāo)本行常規(guī)羊水細胞培養(yǎng)、制片以及G帶顯色。通過蔡司全自動染色體核型分析系統(tǒng)采集、保存染色體核型圖。

1.3觀察指標(biāo)：分析24例行NIPT檢測異常孕婦的結(jié)果，對比24例行NIPT檢測結(jié)果異常和羊水核型驗證結(jié)果，以及不同年齡高齡孕婦的異常核型檢出率。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法:以SPSS20.0軟件實施數(shù)據(jù)的分析，計數(shù)數(shù)據(jù)通過n(%)表示，予以χ2檢驗。P<0.05即為差異顯著。

2 結(jié) 果

2.124例行NIPT檢測異常孕婦的結(jié)果分析：1467例高齡孕婦行NIPT檢測異常人數(shù)24例，其中6例提示為21三體高風(fēng)險，4例提示為18三體高風(fēng)險，3例提示為13三體高風(fēng)險，7例提示為性染色體異常，4例提示為其他染色體異常。24例孕婦均行羊水穿刺檢測，確診胎兒染色體異常疾病人數(shù)13例，包括21三體6例，18三體3例，13三體1例，性染色體異常2例，其他染色體異常1例。剩余11例羊水驗證核型正常孕婦繼續(xù)妊娠，見表1。

表1 24例NIPT檢測異常孕婦的結(jié)果分析

表2 24例行NIPT檢測結(jié)果異常和羊水核型驗證結(jié)果對比

2.224例行NIPT檢測結(jié)果異常和羊水核型驗證結(jié)果對比:NIPT檢測與羊水核型驗證結(jié)果的符合率為54.17%，其中NIPT檢測21三體、18三體、13三體、性染色體異常、其他染色體異常與羊水核型驗證結(jié)果的符合率分別為100.00%、75.00%、33.33%、28.57%、25.00%，見表2。

2.3不同年齡高齡孕婦的異常核型檢出率對比:年齡≥40歲高齡孕婦異常核型檢出率為1.82%(9/494)，相較于年齡35～39歲高齡孕婦的0.41%(4/973)，明顯更高(P<0.05)，見表3。

表3 不同年齡高齡孕婦的異常核型檢出率對比

3 討 論

我國屬于出生缺陷兒高發(fā)國家之一，相關(guān)數(shù)據(jù)表明，我國出生缺陷兒的發(fā)生率約為5.6%，且每年增加的出生缺陷兒例數(shù)約為90萬[3]。而染色體異常是引起出生缺陷的最主要因素之一，在新生兒中的發(fā)生率可達0.6%。其中21-三體綜合征、18-三體綜合征、13-三體綜合征的發(fā)生率在圍生期常染色體非整體中占比約為95%[4,5]。因此，對孕婦實施染色體異常的篩查顯得尤為重要，亦是產(chǎn)前診斷重要內(nèi)容之一[6]。羊水穿刺檢測是染色體異常檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但作為有創(chuàng)檢測手段之一，羊水穿刺檢測可能對胎兒造成誤傷，甚至引發(fā)流產(chǎn)以及宮內(nèi)感染等，加上該技術(shù)檢測所需時間較長，技術(shù)要求較高以及工作強度較大等缺陷，導(dǎo)致大部分的高齡孕婦存在不同程度的顧慮，繼而拒絕接受該項檢查，從而可能導(dǎo)致染色體異常胎兒的漏診，最終導(dǎo)致出生缺陷兒的出生，增加了家庭及社會負擔(dān)[7]。

本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NIPT檢測21三體、18三體、13三體、性染色體異常、其他染色體異常與羊水核型驗證結(jié)果的符合率分別為100.00%、75.00%、33.33%、28.57%、25.00%。其中司艷梅等的研究報道表明[8]，NIPT檢測21三體、18三體、13三體、性染色體異常、其他染色體異常與羊水核型驗證結(jié)果的符合率分別為100.00%、75.00%、33.33%、37.50%、25.00%。兩項該研究高度一致，這提示了NIPT檢測應(yīng)用于高齡孕婦中，對21三體、18三體的檢測符合率較高，可能成為高齡孕婦產(chǎn)前染色體異常診斷的有效手段之一。其中NIPT主要是通過大規(guī)模平行測序技術(shù)深度測序母體外周血中的游離DNA，從而獲取胎兒染色體的信息，并得出染色體數(shù)目異常風(fēng)險程度[9]。然而，NIPT檢測與羊水核型驗證結(jié)果的符合率為54.17%，這提示了NIPT當(dāng)前僅可作為產(chǎn)前染色體非整倍體評估的一種補充檢測手段，尚且無法完全替代細胞遺傳學(xué)診斷。分析原因，筆者認為NIPT所篩查的目標(biāo)疾病相對較少，僅針對胎兒的21/18/13-三體綜合征等非整倍體異常，尚且無法有效對胎兒染色體異位、微缺失等異常疾病進行診斷。與此同時，孕婦若近期接受過異體輸血、細胞治療以及移植手術(shù)等，亦或是孕周計算不準(zhǔn)確，均可能導(dǎo)致游離胎兒DNA的含量相較檢出量更低，進一步影響檢測結(jié)果。此外，染色體三體型疾病中具有部分嵌合體，從而會導(dǎo)致NIPT檢測的靈敏度以及特異度下降。另外，年齡≥40歲高齡孕婦異常核型檢出率為1.82%，相較于年齡35～39歲高齡孕婦的0.41%明顯更高(P<0.05)。這和既往研究高度一致[10]，說明了隨著年齡的不斷提高，高齡孕婦胎兒染色體異常疾病的發(fā)生風(fēng)險隨之增加。究其原因，筆者認為隨著年齡的不斷增長，孕婦的卵巢儲備功能下降，卵泡刺激素水平隨之升高，卵泡期縮短，從而使得監(jiān)督卵泡發(fā)育機能可能異常，導(dǎo)致卵母細胞減數(shù)分裂過程中出現(xiàn)染色體的異常分離，進一步引起胎兒染色體異常的發(fā)生。

綜上所述，NIPT檢測可用于高齡孕婦產(chǎn)前診斷中，且對21三體、18三體的檢測價值較高。然而，該檢測技術(shù)尚且無法取代傳統(tǒng)有創(chuàng)檢測技術(shù)，仍需進一步研究。