李 波， 伍立群， 方 戀， 徐 丹， 肖鳳儀

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬隨州醫(yī)院/湖北省隨州市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科， 湖北 隨州 441300)

宮頸癌是婦科常見惡性腫瘤，主要組織學(xué)是鱗癌，常在50歲左右人群中發(fā)病，近年來趨于年輕化[1]。宮頸癌細(xì)胞學(xué)篩查技術(shù)應(yīng)用廣泛，宮頸癌能夠被及早發(fā)現(xiàn)和治療，患者預(yù)后明顯改善[2]。有研究報道，轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白-2α(Transcription factor activator protein-2α，AP-2α)在胃癌組織中表達水平顯著低于癌旁組織，AP-2α低表達與腫瘤低分化、不良預(yù)后有關(guān)[3]。AP-2α上調(diào)可明顯降低肝癌細(xì)胞生長和增殖能力，抑制肝癌組織侵襲和遷移[4]。整合素β1蛋白(Integrin β1，ITGB1)與上皮性惡性腫瘤進展有關(guān)。結(jié)直腸癌中ITGB1表達上調(diào)，可促進結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖和侵襲[5]。ITGB1高表達與結(jié)直腸癌患者整體生存時間短等不良預(yù)后有關(guān)，可作為潛在預(yù)后預(yù)測因子[6]。二者均與上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化過程密切相關(guān)[7,8]。然而二者在宮頸鱗癌中表達情況研究較少，因此，本研究通過檢測宮頸鱗癌組織中二者表達水平，分析與患者預(yù)后關(guān)系，以期為宮頸鱗癌臨床治療及預(yù)后改善提供一定幫助。

1 資料與方法

1.1一般資料:選擇2013年10月至2016年12月本院收治的宮頸鱗癌患者93例，患者年齡31～74歲，平均(52.34±10.26)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)臨床及病理切片檢測確診為宮頸鱗癌。②需行子宮切除術(shù)。③FIGO分期[9]Ⅰ～Ⅲ期患者。④入組前未進行任何治療。⑤臨床及隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并患有其它部位腫瘤者。②心、腎、肝臟功能異常者。③患有嚴(yán)重精神疾病者。根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO)分期標(biāo)準(zhǔn)[9]分為：Ⅰ～Ⅱ期47例，Ⅲ期46例；根據(jù)分化程度分為：高、中分化60例，低分化33例；根據(jù)肌層浸潤程度分為：<1/2浸潤38例，≥1/2浸潤55例。根據(jù)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況分為：無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移61例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例。另選取同期因子宮肌瘤需行全子宮切除術(shù)患者正常宮頸組織93例作為對照。兩組患者年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)同意。所有患者及其家屬同意并簽署知情同意書。

1.2主要試劑和儀器:兔抗人AP-2α多克隆抗體、兔抗人ITGB1多克隆抗體(貨號分別為：PAB27019、PAB16520，美國Abnova公司)；鼠抗兔IgG二抗(貨號：211-035-109，美國Abcam公司)；免疫組織化學(xué)染色試劑盒(貨號：CD-104007GM，武漢純度生物科技有限公司)；光學(xué)顯微鏡(型號：DSX100，日本奧林巴斯有限公司)

1.3方 法

1.3.1樣本采集:分別于術(shù)中收集入組宮頸鱗癌患者癌組織及子宮肌瘤患者正常宮頸組織。10%福爾馬林浸泡后，常規(guī)石蠟包埋制成4μm厚石蠟切片，用于免疫組織化學(xué)染色。

1.3.2免疫組織化學(xué)染色:嚴(yán)格按照免疫組織化學(xué)染色試劑盒說明書進行操作，將光學(xué)顯微鏡調(diào)至400倍鏡觀察最終所得切片，并選取6個視野計陽性細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞核中呈棕黃色或棕褐色為AP-2α陽性細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)中呈棕黃色或棕褐色為ITGB1陽性細(xì)胞。染色結(jié)果評定標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)染色強度和陽性細(xì)胞比例記分。染色強度：無色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；陽性細(xì)胞所占百分比：<5%計0分，5%～25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，>75%計4分。兩組分值相乘，≤3分為陰性表達，>3分為陽性表達。

1.4隨訪:本研究中入組宮頸鱗癌患者經(jīng)治療出院后，以復(fù)查或電話形式對其進行3年隨訪，截止日期2019年12月31日，期間觀察并記錄患者生存情況。

2 結(jié) 果

2.1兩組AP-2α、ITGB1蛋白表達水平:AP-2α蛋白表達主要定位于細(xì)胞核中，ITGB1蛋白表達主要定位于細(xì)胞質(zhì)中，見圖1。宮頸鱗癌組織中AP-2α蛋白陽性表達率顯著低于正常宮頸組織(P<0.05)，ITGB1蛋白陽性表達率顯著高于正常宮頸組織(P<0.05)，見表1。

表1 兩組AP-2α ITGB1蛋白表達水平比較n(%)

2.2宮頸鱗癌組織中AP-2α、ITGB1蛋白表達水平與患者臨床病理特征關(guān)系:宮頸鱗癌組織中AP-2α、ITGB1蛋白陽性組與陰性組患者年齡、腫瘤直徑、腫瘤分化程度之間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。AP-2α、ITGB1蛋白表達水平均與肌層浸潤、FIGO分期及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)，見表2。

圖1 免疫組織化學(xué)染色法檢測AP-2α、ITGB1蛋白表達(×400)

圖2 Kaplan-Meier生存分析

2.3AP-2α與ITGB1蛋白表達水平相關(guān)性:宮頸鱗癌組織中AP-2α與ITGB1蛋白表達水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.582，P<0.05)。見表3。

表2 宮頸鱗癌組織中AP-2α ITGB1蛋白表達水平與患者臨床病理特征關(guān)系n(%)

表3 AP-2α與ITGB1蛋白表達水平相關(guān)性

2.4AP-2α、ITGB1蛋白表達與宮頸鱗癌患者預(yù)后關(guān)系:AP-2α陽性組患者3年總生存率為78.57%，顯著高于AP-2α陰性組患者3年總生存率32.31%(P<0.05)。ITGB1陽性組患者3年總生存率為44.44%，顯著低于ITGB1陰性組患者3年總生存率76.92%(P<0.05)，見圖2。

2.5宮頸鱗癌患者不良預(yù)后影響因素分析:Cox單因素回歸分析結(jié)果顯示，年齡、腫瘤直徑與宮頸鱗癌患者預(yù)后無關(guān)(P均>0.05)；分化程度低、浸潤程度≥1/2、FIGO分期Ⅲ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、AP-2α陰性、ITGB1陽性是影響宮頸鱗癌患者不良預(yù)后危險因素(P均<0.05)。多因素分析結(jié)果顯示，F(xiàn)IGO分期Ⅲ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、AP-2α陰性、ITGB1陽性影響宮頸鱗癌患者不良預(yù)后獨立危險因素(P均<0.05)。見表4。

表4 Cox回歸分析宮頸鱗癌患者不良預(yù)后影響因素

3 討 論

宮頸鱗癌患者常出現(xiàn)陰道不規(guī)則出血、陰道排液異常等癥狀，隨疾病進展常伴有輸尿管梗阻、尿毒癥、多種器官衰竭等并發(fā)癥，預(yù)后極差[10]。研究報道，上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化過程是腫瘤進展的主要機制和治療靶點[9]。

Ross等研究表明，AP-2α在乳腺癌組織中表達水平較低，與乳腺癌細(xì)胞增殖率較高有關(guān)，AP-2α可能作為抑癌因子，抑制腫瘤增殖和侵襲[11]。本研究結(jié)果顯示，與正常宮頸組織相比，AP-2α蛋白在宮頸鱗癌組織中陽性表達率顯著降低，提示AP-2α蛋白陰性表達可能與宮頸鱗癌發(fā)生有關(guān)，AP-2α蛋白在宮頸鱗癌中可能作為抑癌因子。研究報道，AP-2α表達水平與大腸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[12]。本研究結(jié)果中，AP-2α蛋白表達水平與肌層浸潤、FIGO分期及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示AP-2α低表達可能通過影響腫瘤肌層浸潤加深、FIGO分期加重、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，促進宮頸鱗癌進展。AP-2α與上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化機制密切相關(guān)，內(nèi)源性AP-2α表達水平下調(diào)對上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化起抑制作用[7]。推測AP-2α也可能通過調(diào)控上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，影響癌細(xì)胞增殖和遷移，進而影響宮頸鱗癌發(fā)展。

研究發(fā)現(xiàn)，ITGB1在前列腺癌組織中過表達，可促進癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲[13]。本研究結(jié)果顯示，ITGB1蛋白在宮頸鱗癌組織中陽性表達率顯著升高，與肌層浸潤加深、FIGO分期升高及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示ITGB1可能通過影響宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲等促進宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展。有研究證實，過表達ITGB1可激活上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化參與乳腺癌進展[14]。上調(diào)ITGB1表達可誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，促進癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移[15]。提示本研究中，ITGB1可能通過影響上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，促進宮頸鱗癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移，影響宮頸鱗癌疾病進展。進一步研究發(fā)現(xiàn)，宮頸鱗癌組織中AP-2α與ITGB1蛋白水平呈負(fù)相關(guān)，提示AP-2α與ITGB1可能存在相互作用，通過共同調(diào)控上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化影響宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展。但具體機制有待進一步深入研究。

胃癌和乳腺癌中AP-2α、ITGB1異常表達已被證實與患者生存率低有關(guān)[3,14]。本研究結(jié)果顯示，AP-2α陰性組及ITGB1陽性組患者3年總生存率顯著降低，提示AP-2α、ITGB1水平變化可能與宮頸鱗癌患者預(yù)后有關(guān)，AP-2α陰性及ITGB1陽性可能預(yù)示患者不良預(yù)后。本研究還發(fā)現(xiàn)，AP-2α陰性、ITGB1陽性影響宮頸鱗癌患者不良預(yù)后獨立危險因素，提示AP-2α、ITGB1可能作為宮頸鱗癌患者生物標(biāo)志物，對評估患者預(yù)后有重要意義。

綜上所述，宮頸鱗癌組織中AP-2α陽性表達率降低，ITGB1陽性表達率升高，與肌層浸潤、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及患者生存率有關(guān)，二者可能共同參與宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展，影響患者預(yù)后。但由于本研究樣本量較少，研究方法較簡單，具體機制尚需大量研究證實。