高倩，程誠，蔣笑，朱衛(wèi)芳，周益倩

（宿遷子淵司法鑒定所，江蘇宿遷 223800）

祖孫關(guān)系鑒定是法醫(yī)物證學(xué)親緣關(guān)系鑒定中的難點(diǎn)，特別是在外祖父、外孫鑒定案例中，在當(dāng)事人隱瞞等原因造成存在祖孫關(guān)系而鑒定人不知情的情況下，會干擾甚至造成錯誤鑒定意見，讓鑒定機(jī)構(gòu)和鑒定人承擔(dān)較高風(fēng)險。

目前，二聯(lián)體親權(quán)鑒定使用的遺傳標(biāo)記包括常染色體短串聯(lián)重復(fù)（Short tandem repeat，STR）序列基因座、性染色體STR基因座，判別方法主要包括基于常染色體STR基因座分型結(jié)果的累積親權(quán)指數(shù)（CPI）。2018年，我國國家市場監(jiān)督管理總局、中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會針對親權(quán)鑒定頒布了《親權(quán)鑒定技術(shù)規(guī)范》（GB/T 37223-2018，以下簡稱規(guī)范1）[1]，按照要求，二聯(lián)體親權(quán)鑒定采用的標(biāo)準(zhǔn)遺傳標(biāo)記是常染色體STR基因座，判別方法為CPI法，該方法直觀、準(zhǔn)確率較高并容易掌握，但適用范圍是甄別父代子代與無關(guān)個體關(guān)系。

祖孫關(guān)系鑒定使用的遺傳標(biāo)記包括常染色體STR序列基因座，判別方法主要包括基于常染色體STR基因座分型結(jié)果的累積祖孫關(guān)系指數(shù)（CGI）。2014年，我國司法部司法鑒定管理局針對祖孫關(guān)系鑒定頒布了《生物學(xué)祖孫關(guān)系鑒定規(guī)范》（SF/Z JD0105005-2015，以下簡稱規(guī)范2）[2]，按照要求，祖孫關(guān)系鑒定采用的標(biāo)準(zhǔn)遺傳標(biāo)記是常染色體STR基因座，判別方法為CGI法，但使用的適用范圍是甄別祖孫與無關(guān)個體關(guān)系。該規(guī)范中的祖孫關(guān)系鑒定特指生母、祖父、祖母同時參與鑒定下被檢孩子與祖父、祖母間的祖孫關(guān)系鑒定。在實(shí)檢案中，由于當(dāng)事人隱瞞、不知情等原因造成誤將祖孫關(guān)系當(dāng)作父子關(guān)系來鑒定，會造成較高鑒定風(fēng)險。

STR基因座是遺傳標(biāo)記，組合在一起作為一個整體遺傳給子代。2018年，我國司法部司法鑒定管理局針對Y-STR檢驗(yàn)頒布了《法醫(yī)物證鑒定Y-STR檢驗(yàn)規(guī)范》（SF/Z JD0105007-2018，以下簡稱規(guī)范3）[3]，按照要求，Y染色體的微缺失現(xiàn)象會導(dǎo)致異常分型結(jié)果。通常情況下，同一父系的所有男性個體具有相同的Y-STR單倍型。Y-STR基因座在遺傳過程中有發(fā)生突變的可能性，不能僅以單個Y-STR基因座分型結(jié)果的不一致來否定親緣關(guān)系。無關(guān)個體可能表現(xiàn)出相同的Y-STR單倍型，不能僅以Y-STR單倍型的匹配認(rèn)定親緣關(guān)系。

本文綜合應(yīng)用了多種遺傳標(biāo)記（常染色體STR基因座、性染色體STR基因座）、多種判斷標(biāo)準(zhǔn)（基于常染色體STR的CPI法、孟德爾遺傳定律）用于存疑父子案例鑒定，并最終獲得了可靠的鑒定意見。

1 材料與方法

1.1 檢測對象

據(jù)委托方J1自訴，J2是其孩子，特委托司法鑒定所對J1與J2是否存在親緣關(guān)系進(jìn)行檢驗(yàn)和鑒定。對J1（男）、J2（男）進(jìn)行指尖血血痕（載體為濾紙片）采樣。

1.2 試劑與儀器

21Plex試劑盒、NC22Plex試劑盒、Y27Plex試劑盒，江蘇蘇博生物醫(yī)學(xué)科技南京有限公司；MR21試劑盒、MR23sp試劑盒，蘇州閱微基因技術(shù)有限公司；Applied BiosystemsTM3130xl基因分析儀，美國Thermo Fisher Scientific公司。

1.3 試驗(yàn)方法

按照《法庭科學(xué)DNA實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)范》（GA/T 383-2014）[4]提取上述檢材的DNA，常染色體STR基因座分型采用21Plex試劑盒、MR21，加位點(diǎn)常染色體STR基因座分型采用NC22Plex試劑盒、MR23sp，Y染色體STR（Y-STR）基因座分型采用Y27Plex試劑盒進(jìn)行檢測。對上述PCR產(chǎn)物，用基因分析儀進(jìn)行毛細(xì)管電泳和基因型分析。二聯(lián)體親權(quán)鑒定判定依據(jù)規(guī)范1進(jìn)行，20個必檢基因座親緣關(guān)系判定標(biāo)準(zhǔn)：（1）CPI≥10 000，支持被檢測男子是孩子的生物學(xué)父親；（2）10 000＞CPI＞0.000 1，增加檢測遺傳標(biāo)記；（3）CPI≤0.000 1，排除被檢測男子是孩子的生物學(xué)父親。同一父系親緣關(guān)系判定依據(jù)規(guī)范3進(jìn)行，同一父系親緣關(guān)系判定標(biāo)準(zhǔn)：（1）兩個個體所有Y-STR基因座具有相同的Y-STR單倍型，則符合同一父系遺傳規(guī)律；（2）兩個個體所有Y-STR基因座具有不相同的Y-STR單倍型，則不符合同一父系遺傳規(guī)律。

2 結(jié)果與分析

2.1 常染色體STR基因座分型結(jié)果分析

J1、J2血痕的D3S1358等20個常染色體STR基因分型結(jié)果見表1。依據(jù)常染色體STR分型結(jié)果，參照規(guī)范1，對J1、J2樣本進(jìn)行PI計(jì)算，獲得CPI為0.001 2。

為進(jìn)一步驗(yàn)證和明確J1、J2之間的親緣關(guān)系，增加檢測遺傳標(biāo)記，J1、J2血痕的D4S2366等21個常染色體STR基因分型結(jié)果見表2。依據(jù)所有常染色體STR分型結(jié)果，參照規(guī)范1，對J1、J2樣本進(jìn)行PI（父權(quán)指數(shù)）計(jì)算，獲得CPI為773 144.268 6。依據(jù)現(xiàn)有資料和DNA分析結(jié)果，支持J1為J2的生物學(xué)父親。

因涉及突變，為了慎重起見，采用另一常染色體試劑盒進(jìn)行驗(yàn)證。對J1和J2樣本進(jìn)行換試劑盒常染色體STR基因分型。J1、J2血痕的D19S433等39個常染色體STR基因分型結(jié)果見表3。依據(jù)常染色體STR分型結(jié)果，參照規(guī)范1，對J1、J2樣本進(jìn)行PI計(jì)算，獲得CPI為0.089 7。據(jù)此CPI，無法給出排除親權(quán)關(guān)系或支持親權(quán)關(guān)系的鑒定意見。

2.2 性染色體STR基因座分型結(jié)果

因委托方未能提供更多親屬樣本，為了確認(rèn)J1與J2的實(shí)際親緣關(guān)系，對J1和J2樣本進(jìn)行Y-STR基因分型。J1、J2血痕的DYS481等27個Y-STR基因分型結(jié)果見表4。Y-STR基因分型結(jié)果顯示，J1與J2在DYS481、DYS389Ⅰ、DYS635、DYS389Ⅱ、DYS533、DYS460、DYS19、DYF387S1、DYS456、DYS385、DYS576、DYS437、DYS392、DYS448、DYS393、DYS438、Y GATAH4、DYS449共 18個 Y染色體STR基因座上分型不一致。Y染色體為男性所特有，Y染色體STR是父系遺傳標(biāo)記之一，可用來進(jìn)行父系親緣認(rèn)定，根據(jù)遺傳規(guī)律，同一父系的男性Y染色體來自相同的父系祖先，依據(jù)上述Y-STR分型結(jié)果，參照規(guī)范3，對J1、J2樣本進(jìn)行基因分型比對，J2與J1不符合同一父系遺傳規(guī)律，因此排除J1為J2的生物學(xué)父親，結(jié)合常染色體STR分型結(jié)果，根據(jù)孟德爾遺傳定律，推斷J1為J2的生物學(xué)外祖父。

表1 J1、J2常染色體STR基因座分型結(jié)果（21Plex）

表2 J1、J2常染色體STR基因座分型結(jié)果（NC22Plex）

表3 J1、J2常染色體STR基因座分型結(jié)果（MR21+MR23sp）

至此，基于多種遺傳標(biāo)記（常染色體STR、性染色體STR）檢測結(jié)果相互驗(yàn)證和補(bǔ)充，并根據(jù)孟德爾遺傳定律進(jìn)行綜合分析，推斷J1與J2的實(shí)際生物學(xué)關(guān)系為J1為J2的生物學(xué)外祖父。

祖孫關(guān)系鑒定是親權(quán)關(guān)系鑒定中檢案量僅次于親子鑒定的項(xiàng)目，但由于技術(shù)手段的有限性及實(shí)際工作的復(fù)雜性，該項(xiàng)工作一直是司法鑒定中的難點(diǎn)和研究熱點(diǎn)。

規(guī)范1中的二聯(lián)體親權(quán)鑒定CPI是通過計(jì)算兩個個體間常染色體STR兩個條件概率的似然比率，計(jì)算直觀、有效，準(zhǔn)確率高，已廣泛用于二聯(lián)體親權(quán)鑒定，但在使用時要注意兩點(diǎn)：（1）不符合遺傳規(guī)律的遺傳標(biāo)記應(yīng)參與計(jì)算累計(jì)親權(quán)指數(shù)。（2）在不能滿足累計(jì)親權(quán)指數(shù)小于0.000 1或大于10 000時，應(yīng)增加檢測遺傳標(biāo)記。（3）鑒定意見是以不考慮雙胞胎或者近親情況為前提的。筆者在本案例遇到由于當(dāng)事人隱瞞等原因，誤將祖孫關(guān)系鑒定作為二聯(lián)體親權(quán)鑒定的案例，在客觀上違背了規(guī)范1使用前提。根據(jù)筆者經(jīng)驗(yàn)，在增加STR基因座檢測時，若選擇的試劑盒基因座大部分個體鑒別能力（DP）值小于0.9，則可能會造成誤判；同時由于目前市面上很少有DP值均大于0.9的商品化試劑盒，因此，本案例使用必檢的20個基因座（準(zhǔn)確率依然大于99%），雖然系統(tǒng)效能相對較低，出現(xiàn)對J1、J2是否存在親子關(guān)系無法給出傾向性意見情況，但增加檢測遺傳標(biāo)記，符合出具鑒定意見的情況，錯判率極低。因此，在使用規(guī)范1時鑒定人要注意甄別和核實(shí)委托方實(shí)際情況，注意適用范圍及系統(tǒng)效能，并建議同時使用其他方法或其他試劑盒并增加遺傳標(biāo)記加以相互驗(yàn)證和甄別，以免使用試劑盒和方法不當(dāng)，造成干擾鑒定意見甚至錯誤鑒定。

由于父系及母系遺傳特點(diǎn)，性染色體STR在祖孫關(guān)系鑒定中可作為重要的支持和補(bǔ)充證據(jù)。Y-STR可作為同父男性間鑒定的可靠遺傳標(biāo)記，若參與鑒定的個體足夠多，還可用于家系重建。本案中，由于參與鑒定人較少，無法使用規(guī)范2進(jìn)行判斷，結(jié)合性別，綜合使用了加位點(diǎn)常染色體STR及Y染色體STR，根據(jù)規(guī)范3，J2與J1不符合同一父系遺傳規(guī)律，排除J1為J2的生物學(xué)父親，根據(jù)孟德爾遺傳定律，推斷J1為J2的生物學(xué)外祖父。

表4 J1、J2的Y-STR基因座分型結(jié)果（Y27Plex）

3 結(jié)論

隨著社會發(fā)展，親權(quán)鑒定工作不斷增多，案情的復(fù)雜性和風(fēng)險性也隨之增高，在疑難、復(fù)雜、存疑的鑒定案例中要注意甄別和核實(shí)委托人陳述的情況，而多種遺傳標(biāo)記的綜合運(yùn)用是鑒定機(jī)構(gòu)和鑒定人降低鑒定風(fēng)險、獲得可靠鑒定意見的最有效手段。法醫(yī)物證學(xué)鑒定機(jī)構(gòu)和鑒定人可以在實(shí)際工作中不斷積累經(jīng)驗(yàn)，正確運(yùn)用各種遺傳標(biāo)記和計(jì)算方法以相互驗(yàn)證、支持，以便得到可靠的鑒定意見，提高鑒定意見準(zhǔn)確性和鑒定工作質(zhì)量。