曾麗洪，張小團(tuán)，曾 童，劉卓然

(南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖南 衡陽 421001)

生殖支原體(mycoplasma genitalium，MG)是引起人類非淋菌性病的主要病原體之一，目前臨床上最常見的是解脲脲原體(ureaplasma urealyticum, Uu)和人型支原體(mycoplasma hominis, Mh)[1]。此外，MG的感染也是臨床不孕不育的生物因素之一，同時(shí)還可以引起盆腔炎、流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)等[1-2]。Mh引起生殖道以外感染也偶有報(bào)道，如傷口組織感染、血流和顱內(nèi)感染等[3-4]。支原體屬是一種特殊的病原體，無細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，對所有作用于細(xì)胞壁的抗生素不敏感。近年來對MG的耐藥報(bào)道提示，Uu和Mh具有較高的耐藥率，且呈現(xiàn)明顯的地域差異[2，5]。為了解本地區(qū)支原體的耐藥情況，本文現(xiàn)就本院2014至2019年MG體外培養(yǎng)及藥敏結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014年1月1日至2019年12月31日就診于本院疑似MG感染患者的支原體培養(yǎng)及藥敏結(jié)果和患者的基本資料，同一患者多次送檢只分析第一次陽性標(biāo)本的資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：檢出有淋球菌感染者。共納入分析病例資料502例，送檢標(biāo)本包括陰道分泌物或?qū)m頸分泌物、尿道拭子、前列腺液和精液等。患者年齡6～81歲，中位年齡34歲，其中男性患者67例，女性435例。

1.2 主要儀器與試劑

DHP500型電熱恒溫培養(yǎng)箱購于北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司，支原體培養(yǎng)鑒定計(jì)數(shù)藥敏試劑盒(液態(tài)型)購于鄭州安圖生物工程有限公司，該試劑可同時(shí)鑒定解脲脲原體和人型支原體，包含12種抗生素：交沙霉素、美滿霉素、強(qiáng)力霉素、加替沙星、左氧氟沙星、阿齊霉素、克拉霉素、紅霉素、羅紅霉素、甲砜霉素、司巴沙星、克林霉素。

1.3 方法

采用一次性的無菌拭子，由臨床醫(yī)生按照試劑要求進(jìn)行標(biāo)本采集，并在2 h內(nèi)送檢支原體培養(yǎng)。支原體培養(yǎng)采用液體培養(yǎng)，由檢驗(yàn)醫(yī)師嚴(yán)格按照無菌要求和試劑說明書進(jìn)行操作，置于37 ℃空氣培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng)48 h，期間每24 h記錄支原體生長狀況并嚴(yán)格按照試劑說明進(jìn)行定量和結(jié)果判斷。對結(jié)果異?；蛘呷退幍臉?biāo)本，通知患者重新采樣進(jìn)行培養(yǎng)。

1.4 支原體鑒定及藥敏判斷標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)安圖生物的支原體鑒定計(jì)數(shù)藥敏試劑盒(液態(tài)型)的說明書規(guī)定，C-孔為陰性對照，C+孔為陽性對照，變紅表示有支原體生長，Uu孔變紅，表示解脲脲原體陽性，Uu>104cfu/mL孔變紅，表示菌量>104cfu/mL；Mh孔變紅，表示人型支原體陽性，Mh>104cfu/mL孔變紅，表示菌量>104cfu/mL。每種抗生素設(shè)高濃度和低濃度兩個(gè)孔，兩孔都變紅色表示耐藥；低濃度孔變紅色，高濃度孔保持黃色表示中介，兩孔都保持黃色為敏感；其它類型需符合藥敏。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件對男性和女性患者生殖支原體培養(yǎng)和臨床分布情況的差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，男女性別在生殖支原體培養(yǎng)和臨床分布的差異采用陽性率進(jìn)行比較，使用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有顯著性。采用耐藥率描述生殖支原體的耐藥性，構(gòu)成比描述支原體的多重耐藥情況。

2 結(jié) 果

2.1 MG感染的檢出情況

2014年至2019年本院接診的502例疑似MG感染患者的標(biāo)本中，共檢出支原體陽性334例，檢出陽性率66.5%，其中男性患者67例，檢出18例，陽性率26.9%，女性患者435例，檢出316例，陽性率72.6%。女性患者M(jìn)G感染率顯著高于男性患者(χ2=2694，P<0.001)，見表1。從標(biāo)本分布情況看，435例女性標(biāo)本全部來自于陰道或?qū)m頸分泌物，67例男性標(biāo)本包括62例尿道拭子(16例陽性)，3例前列腺液(1例陽性)和2例精液標(biāo)本(1例陽性)。從支原體檢出陽性患者的年齡分布來看，中位年齡為33歲，以20～45歲(87.1%)的人群為主。

表1 不同性別患者M(jìn)G感染的情況 (例)

MG:生殖支原體

2.2 MG感染的臨床分布

對不同性別和不同支原體感染的臨床分布情況進(jìn)行分析顯示，334例支原體陽性標(biāo)本中，單純Uu感染檢出293例，占比87.7%，單純Mh感染檢出9例，占比2.7%，Uu+Mh混合感染檢出32例，占比9.9%。比較Uu、Mh和Uu+Mh在男性和女性生殖道感染中的構(gòu)成，未發(fā)現(xiàn)明顯差異(P>0.05),見表2，提示生殖道支原體Uu和Mh在人群中的感染類型不存在性別差異。

表2 不同性別患者生殖道支原體感染的構(gòu)成情況 (例)

2.3 MG對12種常用抗生素的耐藥情況

對334例陽性患者的藥敏結(jié)果進(jìn)行分析。從整理的耐藥情況看，MG對交沙霉素、美滿霉素和強(qiáng)力霉素的耐藥率最低，均小于2.0%，其次是加替沙星，耐藥率為4.2%。耐藥率最高的是克林霉素，高達(dá)53.5%。從不同類型支原體分析看，9例Mh和32例Mh+Uu除上述四種抗生素外，對其它八種抗生素均表現(xiàn)高度耐藥，而單純的Uu則只對甲砜霉素、司巴沙星和克林霉素具有較高的耐藥率。從耐藥譜可以看出，Uu對克林霉素和甲砜霉素高度耐藥，而Mh則對其耐藥率較低，見表3。

表3 334例MG陽性標(biāo)本的耐藥與敏感率 (%)

2.4 MG的多重耐藥和交叉耐藥的檢出情況

334例支原體的多重耐藥情況分析顯示，對兩種及兩種以上抗生素耐藥的支原體占50.0%(167/334)，這提示支原體的多重耐藥情況已經(jīng)很嚴(yán)峻。293例Uu感染組對兩種及以上抗生素耐藥率達(dá)43.0%(126/293)；9例Mh感染組中，均對兩種及以上藥物耐藥，8例(88.9%)對四種及以上藥物表現(xiàn)耐藥；32例Uu合并Mh感染組中，28例(87.5%)表現(xiàn)為四種及以上抗生素耐藥；多重耐藥情況見表4。

表4 MG的多重耐藥和交叉耐藥情況 (例，%)

3 討 論

支原體是非淋菌性病的主要病原體[1]。研究報(bào)道，支原體的感染和耐藥性在經(jīng)濟(jì)發(fā)展、文化和生活習(xí)慣等不同的地域存在較大差異[6-8]。本研究分析了近年來本院MG感染患者的人口數(shù)據(jù)和細(xì)菌的耐藥情況。結(jié)果顯示，MG感染的檢出率為66.5%，顯著高于劉青林等[5]報(bào)道的長沙市MG總體檢出率38.4%和鐘敏等[9]報(bào)道的四川省人民醫(yī)院MG的檢出率38.7%，略低于張華萍等[7]報(bào)道的70.1%。其原因可能與多方面因素有關(guān)，如地域的氣候和經(jīng)濟(jì)差異、衛(wèi)生和生活習(xí)慣以及人口綜合素質(zhì)的差異等。

從MG感染的人口學(xué)分布上看，以女性患者為主，占比72.6%，且顯著高于男性患者的26.9%(P<0.05)，但男女性別在不同種屬M(fèi)G感染中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。這與部分地區(qū)報(bào)道的情況類似[6-8]。女性患者感染率高于男性患者也可能與下列原因相關(guān)：(1)可能與女性生殖器的結(jié)構(gòu)特征有關(guān)，女性生殖道內(nèi)環(huán)境更容易受到破壞，使得定植的支原體形成感染；(2)隱性感染的男性患者導(dǎo)致女性的交叉感染；(3)服用避孕藥對女性局部免疫和內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響；(4)男性患者取材不當(dāng)或者標(biāo)本量少，導(dǎo)致漏檢或者假陰性。感染患者的中位年齡為33歲，20～45歲人群占87.1%，20歲以下和45歲以上人群的感染率較低，與以往報(bào)道的基本一致[7,9]。研究也提示，MG感染與性活躍、性伴侶個(gè)數(shù)和不潔性生活史密切相關(guān)，而20～45歲正為性活躍階段，這或許進(jìn)一步證實(shí)支原體感染與性活動(dòng)之間的關(guān)系[7-8]。從MG類型上看，本院檢出的MG感染以Uu為主，占87.7%，而Mh的檢出率僅為2.7%，Mh合并Uu混合感染的檢出率為9.9%，大致趨勢與國內(nèi)同行報(bào)道的一致[5,9]。

由于MG的細(xì)胞結(jié)構(gòu)是由三層細(xì)胞膜包繞，而無細(xì)胞壁。因此該菌對所有作用于細(xì)胞壁的抗生素均不敏感，同時(shí)也不能被革蘭染液著色。它主要通過與黏膜上皮細(xì)胞緊緊黏附而引起泌尿道生殖道感染，有研究顯示MG與細(xì)菌性陰道病、輸卵管炎和子宮內(nèi)膜炎有關(guān)[1，10]。對于MG的治療，大環(huán)內(nèi)酯類和林可酰胺類的耐藥性因支原體的種屬而異，Mh對紅霉素和其它十四、十五元大環(huán)內(nèi)酯類耐藥率高，而Uu則相反。本研究的結(jié)果顯示，Mh對阿奇霉素、克拉霉素、羅紅霉素以及紅霉素的耐藥率分別為66.7%、88.9%、77.8%、88.9%，而Uu的耐藥率則分別為3.8%、4.1%、12.3%、7.2%。這恰好與支原體不同種的耐藥模式相符，臨床醫(yī)生應(yīng)重視不同種支原體耐藥模式的差異，避免盲目地選用抗生素。值得注意的是，本研究數(shù)據(jù)提示，Uu對克林霉素的耐藥率要高于Mh，與部分地區(qū)報(bào)道的耐藥情況存在一定的差異，但均提示上述藥物的耐藥情況較為嚴(yán)峻[5,9,11]。左氧氟沙星雖然其耐藥率為11.7%，但其敏感性僅為45.2%，與劉青林等[5]報(bào)道耐藥情況存在較大差異，這可能與左氧氟沙星在臨床的不規(guī)范使用，甚至地區(qū)間的用藥習(xí)慣密切相關(guān)。Uu和Mh對交沙霉素、美滿霉素和強(qiáng)力霉素的耐藥率均非常低，耐藥率低于4%，與國內(nèi)外報(bào)道的情況基本相似[1,9,11-12]，這說明四環(huán)素類對支原體依然保持高度的敏感性，可作為嚴(yán)重感染患者的經(jīng)驗(yàn)性用藥。此外，對于Uu合并Mh混合感染時(shí)，其耐藥性較單純Uu或Mh感染的耐藥性要高，與以往報(bào)道的情況相符[5,9,11-14]，這使得臨床在日?？咕委熤行枰绕渥⒁?。

總之，MG在臨床上具有較高的感染率，尤其是中年女性患者的感染率更高。從耐藥問題上看，目前MG的多重耐藥現(xiàn)象也已經(jīng)越來越明顯，且Uu和Mh的耐藥模式有較大差異。臨床應(yīng)積極采樣送檢MG培養(yǎng)，關(guān)注MG鑒定及藥敏結(jié)果，合理使用抗菌藥物。