張彥博 張 滟 張學(xué)琴

(河北省秦皇島市第二醫(yī)院1 兒科，2 麻醉科，秦皇島市 066600，電子郵箱：hbzyb5088@163.com)

輕度胃腸炎伴良性嬰幼兒驚厥(benign infantile convulsions with mild gastroenteritis,BICE)是嬰幼兒期最常見的良性驚厥，其病因和發(fā)病機制尚不完全清楚，常容易出現(xiàn)誤診[1-2]。近年來，雖然對該病的了解有所加深，但多數(shù)相關(guān)研究仍為臨床病例觀察，而有關(guān)其發(fā)病機制的研究報告較少[3-4]。研究表明，一氧化氮有致癲癇的作用，可刺激釋放谷氨酸而增加驚厥的發(fā)生概率[5]，因此有學(xué)者推測BICE的發(fā)病機制可能與一氧化氮及其代謝物有關(guān)[6-7]。同時，BICE的發(fā)病過程涉及多種炎癥因子的調(diào)節(jié)作用，其中白細(xì)胞介素(interleukin,IL)表達(dá)水平對患兒病情進(jìn)展的預(yù)測作用逐漸引起重視。然而，目前一氧化氮和IL在BICE發(fā)病過程中的相互關(guān)系和作用的相關(guān)研究報告尚少見。本研究檢測BICE患兒血清中一氧化氮、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)以及可溶性白細(xì)胞介素2受體(soluble interleukin 2 receptor，SIL-2R)、IL-6、IL-8的表達(dá)情況，分析其在 BICE發(fā)生和病情發(fā)展過程中的作用，為該病的治療及預(yù)后評估提供理論參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年6月1日至2019年7月31日秦皇島市第二醫(yī)院收治的89例輕度胃腸炎患兒(單純腸炎組)及36例BICE患兒(BICE組)為研究對象。BICE納入標(biāo)準(zhǔn)：符合BICE的診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]，年齡3～36個月。排除標(biāo)準(zhǔn)：首次血標(biāo)本采集時間距驚厥發(fā)作時間超過72 h；有中重度脫水、電解質(zhì)紊亂、高熱、顱腦損傷、腦炎、腦膜炎、腦病和診斷明確的癲癇者。單純腸炎組納入標(biāo)準(zhǔn)：符合輕度胃腸炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]，年齡3～36個月。排除標(biāo)準(zhǔn)：首次血標(biāo)本采集時間距腸炎發(fā)生時間超過72 h；有中、重度脫水及電解質(zhì)紊亂；體溫>38.5℃。選取同期在我院進(jìn)行體檢的30例健康嬰幼兒(正常對照組)，年齡3～36個月。BICE組中男性20例、女性16例，年齡(18.86±2.56)個月；單純腸炎組中男性45例、女性44例，年齡(17.92±2.45)個月；正常對照組中男性15例、女性15例，年齡(18.37±3.07)個月。3組性別和年齡差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)，具有可比性。研究對象的家長對本研究均知情同意。本研究獲得秦皇島市第二醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 血清一氧化氮水平及NOS活力的檢測方法 BICE組與單純腸炎組患兒均于入院24 h內(nèi)(急性期)及發(fā)病后5～7 d(恢復(fù)期)留取靜脈血3 mL。正常對照組在取得家長同意，簽知情同意書后留取空腹外周靜脈血3 mL。所有標(biāo)本采集后立即以3 000 r/min離心15 min后取上清液，放置于-80℃冰箱保存。采用硝酸還原酶法檢測一氧化氮水平，采用化學(xué)比色法檢測NOS。實驗操作均由專業(yè)技術(shù)人員嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，試劑盒購自南京生物工程研究所(一氧化氮生產(chǎn)批號：20191208；NOS生產(chǎn)批號：20191215)。

1.3 血清SIL-2R、IL-6、IL-8的檢測方法 按1.2方法采集處理靜脈血標(biāo)本后，應(yīng)用德國西門子公司生產(chǎn)的SIL-2R(批號：XL-Er0358)、IL-6(批號：XL-Er0196)、IL-8(批號：XL-Er0199)同批次試劑盒，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清SIL-2R、IL-6、IL-8水平。由有經(jīng)驗的技術(shù)員按說明書操作。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料采用(x±s)表示，兩組間比較采用兩獨立樣本t檢驗或t′檢驗，組內(nèi)比較采用配對t檢驗，多組間比較，方差齊時采用單因素方差分析，方差不齊時采用Kruskal-Wallis檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)(百分比)表示，組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 3組血清一氧化氮水平和NOS活力的比較 在急性期，BICE組、單純腸炎組患者血清一氧化氮水平、NOS活力均高于正常對照組(均P<0.05)，且BICE組以上指標(biāo)均高于單純腸炎組(均P<0.05)，但在恢復(fù)期兩組以上指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。BICE組恢復(fù)期血清一氧化氮水平、NOS活力均較急性期降低(均P<0.05)，而單純腸炎組急性期與恢復(fù)期以上指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05) 。見表1。

表1 3組血清一氧化氮水平和NOS活力的比較(x±s)

2.2 3組血清SIL-2R、IL-6、IL-8水平的比較 在急性期，BICE組、單純腸炎組血清SIL-2R、IL-6、IL-8水平均高于正常對照組(均P<0.05)，但在急性期及恢復(fù)期兩組間以上指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。兩組恢復(fù)期血清SIL-2R、IL-6、IL-8水平均較急性期降低(均P<0.05)。見表2。

組別nIL-8(ng/L)急性期▲ 恢復(fù)期t值P值正常對照組3099.02±25.01—單純腸炎組89145.02±33.07*98.16±24.2010.866<0.001BICE組36153.21±31.04*105.11±27.147.006<0.001 H/t值29.9161.403P值<0.0010.163

3 討 論

隨著對驚厥發(fā)病機制的深入研究，目前認(rèn)為神經(jīng)遞質(zhì)及其相關(guān)調(diào)節(jié)介質(zhì)在驚厥發(fā)生過程中具有重要調(diào)節(jié)作用。而一氧化氮作為一種具有自由基性質(zhì)的氣性介質(zhì)，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的突觸傳遞及病理過程中，不僅具有逆信使的神經(jīng)介質(zhì)調(diào)節(jié)功能，同時還參與體內(nèi)的炎癥反應(yīng)[10-11]。目前國內(nèi)外已經(jīng)有較多研究報告了一氧化氮和NOS參與癲癇和發(fā)熱驚厥發(fā)病的作用機制，但有關(guān)一氧化氮和NOS參與BICE發(fā)病作用機制的研究報告仍不多見。國外有學(xué)者認(rèn)為，輪狀病毒感染機體后可刺激體內(nèi)大量炎癥介質(zhì)(腫瘤壞死因子、IL等)釋放，NOS被激活，患兒血液中一氧化氮水平明顯增高，這可能是患兒發(fā)生抽搐的原因[12-13]。本研究結(jié)果顯示，BICE及單純腸炎患兒在疾病急性期的血清一氧化氮水平、NOS活力均高于健康兒童，且BICE患兒以上指標(biāo)均高于單純腸炎患兒(均P<0.05)，這與石凱麗等[14]的研究結(jié)果相似。這提示一氧化氮水平、NOS活性增高可能與BICE有關(guān)，我們推測BICE患兒體內(nèi)一氧化氮及其合成物NOS的過量表達(dá)刺激谷氨酸過量分泌，是引起驚厥的原因之一。此外，BICE組恢復(fù)期血清一氧化氮水平、NOS活力均較急性期降低(均P<0.05)，且與單純腸炎組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而單純腸炎組急性期與恢復(fù)期以上指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。這提示血清一氧化氮水平可能對BICE的病情變化有重要影響，調(diào)節(jié)NOS活力水平及控制一氧化氮水平有可能是治療BICE的另一途徑。

目前，已有多種細(xì)胞因子被證實參與胃腸炎癥的免疫反應(yīng)，與疾病的發(fā)病及轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)[12]。許多學(xué)者研究認(rèn)為，SIL-2R水平可以反映體液免疫的活性，并可作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的預(yù)后評估標(biāo)準(zhǔn)。IL-6具有多重功能，既可以激活T淋巴細(xì)胞而增強細(xì)胞免疫功能，又可以刺激已經(jīng)激活的B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)具有增強機體抗損傷和防御能力的重要作用[15-16]。IL-8是由多種細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，可誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤，增強血管通透性。有研究表明，在感染、創(chuàng)傷患者的血清及組織液中都可以檢測到高水平的IL-8[17-18]。本研究結(jié)果顯示，在發(fā)病急性期無論單純腸炎組還是BICE組血清SIL-2R、IL-6、IL-8水平均較正常對照組升高(均P<0.05)，和文獻(xiàn)[19-20]報告的結(jié)果相似，提示SIL-2R、IL-6、IL-8參與嬰幼兒胃腸炎的免疫反應(yīng)，BICE患兒存在免疫失衡，從而導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的病理、生理改變。此外，BICE組恢復(fù)期血清SIL-2R、IL-6、IL-8水平明顯低于急性期(均P<0.05)，說明經(jīng)過臨床治療，隨著病情好轉(zhuǎn)，患兒機體免疫失衡有所糾正，這也提示動態(tài)檢測以上指標(biāo)變化有助于評估機體免疫功能紊亂糾正情況，對于判斷病情發(fā)展具有指導(dǎo)意義。Kawashima等[5]研究發(fā)現(xiàn)，輪狀病毒腸炎患兒血液中炎癥因子的表達(dá)水平可間接反映腦實質(zhì)損傷的程度。但在發(fā)病急性期單純腸炎組與BICE組之間以上指標(biāo)差異并無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，因此SIL-2R、IL-6、IL-8是否參與了BICE患兒的驚厥發(fā)作，還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述， BICE患兒血清一氧化氮水平及NOS活力增高，兩者可能是引起驚厥的原因之一，調(diào)節(jié)NOS活力水平及控制一氧化氮水平或有助于治療BICE； BICE患兒存在免疫失衡，動態(tài)檢測血清SIL-2R、IL-6、IL-8水平變化，或有助于評估機體免疫功能紊亂糾正情況，對于判斷病情發(fā)展也有一定的指導(dǎo)意義。