聶留俊，李桂華，鞏茜茜，牛秋芳

(1.河南華鑫檢測有限公司，河南 信陽 464000; 2.河南工業(yè)大學(xué)，河南 鄭州 450000)

近來，隨著水稻種植中病蟲害的日益嚴(yán)重，農(nóng)藥已廣泛應(yīng)用于水稻種植中。而有機(jī)磷農(nóng)藥具有廣譜、高效、施用量小以及使用方便、半衰期短等優(yōu)點(diǎn)，正廣泛應(yīng)用于水稻種植中[1]。由此而產(chǎn)生的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留問題，已引起人們的高度重視[2]。

目前，有機(jī)磷農(nóng)殘的檢測方法主要有氣相色譜法[2-3]、氣相色譜-質(zhì)譜法[4]、液相色譜-質(zhì)譜法[1,5-6]等。其中GB/T 20770—2008的方法是檢測大米中有機(jī)磷農(nóng)殘的主要依據(jù)方法之一，但該方法操作繁瑣，耗時，成本較高。本研究利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的高靈敏性和強(qiáng)選擇性的特點(diǎn)，建立了大米中5種有機(jī)磷農(nóng)殘的測定方法，具有易操作，耗時短，溶劑消耗少，檢測靈敏度高的特點(diǎn)，可滿足大米中5種有機(jī)磷農(nóng)殘的檢測。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甲胺磷、樂果和滅線磷標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(質(zhì)量濃度100 μg/ml)，北京坦墨質(zhì)檢科技有限公司;內(nèi)吸磷和丙溴磷標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(質(zhì)量濃度100 μg/ml)，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所;乙腈、甲苯、甲酸均為質(zhì)譜純;實(shí)驗用水，娃哈哈純凈水;大米，河南省固始縣豫申糧油工貿(mào)有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Vanquish-TSQ Fortis 液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜儀，美國賽默飛科技有限公司;GCB-NH2固相萃取柱(500 mg/500 mg,6 ml)，上海安譜實(shí)驗科技有限公司;XZ-10超聲波清洗機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司;RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠;FSH-2A高速均質(zhì)機(jī)，常州市億能實(shí)驗儀器廠;氮吹濃縮儀。

1.3 方法

1.3.1提取

準(zhǔn)確稱取粉碎均勻大米5 g(精確到0.01 g)于50 ml離心管中，加入10 ml乙腈，15 000 r/min均質(zhì)1 min，超聲提取10 min，于4 000 r/min下離心5 min,移出上層提取液；然后再加10 ml乙腈，重復(fù)提取一次，合并兩次提取液到雞心瓶中，在35℃的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上將提取液濃縮至約1 ml，待凈化。

1.3.2凈化

預(yù)先用5 ml乙腈∶甲苯(3∶1)溶液活化SPE小柱，然后將1 ml待凈化液加入到活化后的SPE小柱中，再用一定量的乙腈∶甲苯(3∶1)溶液洗脫，洗脫液在40℃下氮?dú)獯蹈桑⒂? ml流動相復(fù)溶，過0.22 μm膜后，上機(jī)檢測。

1.4 測定

1.4.1色譜條件

Hypersil GOLD C18色譜柱(100 mm×2.1 mm×1.9 μm);流動相A：0.1%甲酸水,流動相B：乙腈;梯度程序：0～0.5 min 90%A,2.1 min 10%A,6 min 90%A,8 min 90%A;柱溫：40℃;流速：0.2 ml/min;進(jìn)樣量：5 μl。

1.4.2質(zhì)譜條件

可加熱電噴霧離子源：HESI;正離子掃描模式;掃描方式：SRM;噴霧電壓：+3 500 V;離子傳輸管溫度：300℃;離子源溫度：350℃;鞘氣流量：4.09 L/min;輔助氣流量：7.97 L/min;碰撞氣壓力：0.199 5 Pa。選擇反應(yīng)監(jiān)測離子對信息見表1及各離子對二級質(zhì)譜圖見圖1。

表1 5種農(nóng)藥的質(zhì)譜分析參數(shù)

圖1 5種有機(jī)磷的二級質(zhì)譜圖

2 結(jié)果與分析

2.1 提取條件的選擇

本方法采用超聲法提取農(nóng)殘，易于操作，能有效地提取出大米中的農(nóng)殘。超聲法提取時間分別選擇5、10、15和20 min,同時加入20 μg/L的標(biāo)液。結(jié)果表明，10 min以后，超聲時間的延長對農(nóng)殘的提取效果已作用不大，所以選擇超聲時間為10 min。

2.2 凈化條件的選擇

分別選用NH2固相萃取柱和GCB-NH2固相萃取柱對提取液進(jìn)行凈化，結(jié)果表明，兩者對分析結(jié)果影響不大；但由于大米提取液中含有一小部分色素，加入GCB的固相萃取柱能很好的去除色素，保護(hù)色譜柱及離子源，因此選擇GCB-NH2固相萃取柱。

2.3 線性關(guān)系與檢出限

以空白基質(zhì)配制一系列不同質(zhì)量濃度的5種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，依次進(jìn)樣，以峰面積(y)為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度(x,μg/L)為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。5種農(nóng)藥在1～20 μg/L范圍內(nèi)線性良好，檢測靈敏度較高。標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性關(guān)系見圖2和表2。

圖2 5種有機(jī)磷的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

表2 5種有機(jī)磷的線性方程及檢出限

2.4 回收率與精密度

本實(shí)驗在空白大米中分別加入5、10和20 μg/L三個水平濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，每個濃度檢測6次(n=6),5種有機(jī)磷的總離子提取圖見圖3，同時以GB/T 20770—2008的方法進(jìn)行回收率與精密度檢測對比，結(jié)果見表3。

圖3 5種有機(jī)磷的總離子提取圖

表3 5種有機(jī)磷的加標(biāo)回收率及精密度(n=6)

結(jié)果表明，本實(shí)驗方法目標(biāo)化合物的回收率為70%～120%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD≤10%；GB/T 20770—2008檢測方法回收率為60%～100%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD≤10%。兩種方法相比，本實(shí)驗方法目標(biāo)化合物檢測更加準(zhǔn)確，能夠滿足大米中5種有機(jī)磷農(nóng)殘的檢測。

3 結(jié)論

本研究采用超聲提取、GCB-NH2凈化的方法檢測大米中的5種有機(jī)磷農(nóng)殘，再結(jié)合高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對其進(jìn)行檢測，較好的排除了樣品基質(zhì)的干擾。該方法較GB/T 20770—2008具有操作簡便，節(jié)約成本，耗時較少，檢測靈敏度高的特點(diǎn)，能夠滿足大米中5種有機(jī)磷的檢測要求，具有一定的推廣價值。