程相前

摘? 要：中藥在我國有著數(shù)千年傳承歷史，是我國最為重要的文化之一，隨著時代不斷改變，中藥如今已經(jīng)得到廣大醫(yī)務(wù)人員的認(rèn)可，并在臨床方面得到了廣泛的應(yīng)用。但由于中藥成為較為復(fù)雜，為能夠更好的發(fā)揮其作用，會對其成分進(jìn)行檢測。本文以丹參為例，采用薄層層分析法對丹參提取物中的有效成分質(zhì)量進(jìn)行鑒定，以便能夠更好的了解其成分和在臨床方面的應(yīng)用，并根據(jù)檢測結(jié)果采取相應(yīng)措施控制其質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：丹參;提取物;有效成分質(zhì)量

丹參主要是由鼠尾草屬植物丹參的根制成，在臨床質(zhì)量方面具有祛瘀止痛，活血通絡(luò)，清心除煩的療效，屬于較為常見的中藥之一。丹參中含有的化學(xué)成分可以分為兩類，其一是脂溶性，其二是水溶性。二萜類化合物是脂溶性中主要成分，其中大部分都是丹參酮型的二萜類化合物。本文主要對丹參提取物中含有的脂溶性成分隱丹參酮、丹參酮I和丹參酮IIA采取相應(yīng)的方式進(jìn)行鑒定，將這三種成分最終檢測結(jié)果作為丹參提取物有效成分質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，從而為新藥研發(fā)工作提供科學(xué)性參考資料。

1 儀器與試藥

Agilent 1100 Series液相色譜儀，電子天平（十萬分之一）隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮IIA對照品自制;丹參提取物20050901批、20051102批、20051201批（3批中試產(chǎn)品）;硅膠G板（自制）;甲醇（分析純、色譜純）;水為重蒸餾水;醋酸乙酯為分析純。

2 薄層鑒別

2.1 供試品溶液制備

在丹參提取物中稱量適當(dāng)?shù)乃幤贩勰?，將粉末放置于專用器皿?dāng)中，結(jié)合實際情況選取5ml醋酸乙酯放入于器皿當(dāng)中，使藥末得到充分溶解，利用醋酸乙酯定容到指定刻度，通過上述操作即可得到適用于本次研究過程的試品溶液。

2.2 對照品溶液制備

在選取的樣品當(dāng)中結(jié)合實際情況稱量適當(dāng)?shù)碾[丹參酮、丹參酮I和丹參酮IIA等藥品成分，將它們分別放置于專用檢測器皿當(dāng)中，分別向每個器皿當(dāng)中加入酷酸乙醋，使其與藥品成分混合，從而完全溶解于酷酸乙醋當(dāng)中，通過上述操作即可得到適用于本次研究過程的對照品溶液。

2.3 測定方法

參照我國有關(guān)醫(yī)療單位編寫的《中國藥典》中記錄的薄層色譜法開展試驗，從試品溶液當(dāng)中與對照品溶液當(dāng)中分別抽取5μL液體，并從中抽取一滴液體放置同一硅膠薄層板之上，以石油醚（60～90℃）一醋酸乙酯（7：3）作為此次研究過程的展開劑，準(zhǔn)備工作完成之后將先前抽取的液體平鋪在薄層板之中，取出，放在通風(fēng)之處將其晾干。之后將薄層板放在陽光下觀察液體變化情況，發(fā)現(xiàn)在丹參提取物供試品色譜當(dāng)中有許多斑點出現(xiàn)，在對照品色譜中同樣有許多斑點出現(xiàn)，且兩方斑點位置，顏色均相同。

3 含量測定

3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗

迪馬DiamonsiTM（鉆石）C18（250mm×4.6mm，5μm）柱;甲醇-水（85：15）為流動相;檢測波長為270nm。柱溫：25℃;流速：1mL/min;進(jìn)樣量10 uL。在上述色譜條件下隱丹參酮、丹參酮I丹參酮IA與其他組分能得到很好的分離。

3.2 供試品溶液的制備

在事先準(zhǔn)備的丹參提取物中稱量大約20mg藥品粉末，使其符合實驗要求，將這些粉末放置在容量瓶當(dāng)中，向其中加入適量的甲醇，放在超聲環(huán)境當(dāng)中，直至溶液溫度與室內(nèi)溫度保持一致，向容量瓶中加入甲醇直至指定刻度，搖晃容器使內(nèi)部藥品混合在一起，當(dāng)藥品粉末充分溶解之后將液體倒入過濾器具當(dāng)中，在過濾之后的藥品溶液當(dāng)中稱量5ml液體，將其注入在25ml容量器皿當(dāng)中，再次向其中加入甲醇直至指定刻度，搖晃過濾之后的藥品溶液即可得到供試品溶液。

3.3 線性范圍考察

精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥36h的隱丹參酮9.70mg、丹參酮I11.02mg和丹參酮IIA9.99mg分別于50mL量瓶中，加甲醇溶解，搖勻并用甲醇定容至刻度。分別精密吸取對照品貯備液各2ml至10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得混合對照品溶液。分別精密吸取混合對照品溶液適量，用甲醇配制成系列濃度的對照品溶液。精密吸取上述溶液各10μL進(jìn)樣，以進(jìn)樣溶液的濃度（μg/mL，x）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.4 實驗

3.4.1 精密度實驗

依照本次實驗流程，在相同供試品溶液之內(nèi)根據(jù)試驗需求稱量合適溶液10μL，將此操作重復(fù)執(zhí)行六次，記錄色譜峰峰面積，并根據(jù)操作流程計算其平均峰面積。根據(jù)計算結(jié)果得出隱丹參酮、丹參酮I丹參酮IIA的RSD分別為1.12%、1.00%和0.99%。從而表明本次實驗過程中使用的儀器在精密度方面沒有任何問題。

3.4.2 重現(xiàn)性實驗

依照供試品溶液制作過程再次制作六份相同的藥品溶液，制成之后從各個樣品當(dāng)中抽取適量的溶液，其重量大約為10μL，并對其進(jìn)行檢測，根據(jù)此次檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)樣品中隱丹參酮、丹參酮I丹參酮IIA的RSD分別為0.76%、1.33%和0.95%，此項數(shù)據(jù)表明該檢測方法具有良好的重現(xiàn)性。

3.4.3 穩(wěn)定性實驗

在同一品供試品溶液中抽取適量的藥液，其重量大約為10μL，將這份溶液分別放置在4個實驗器皿當(dāng)中放置12小時，并觀察此期間藥品溶液變化情況，重復(fù)精密度實驗操作流程，得到色譜峰峰面積，記錄其面積并計算得到丹參提取物中含有的隱丹參酮、丹參酮I和丹參酮IIA的RSD分別為2.67%、2.44%和2.38%，此次結(jié)果表明12小時之內(nèi)供試品溶液不會發(fā)生任何變化。

3.4.4 加樣回收率實驗

取已知含量的樣品適量（批號20050901），精密稱定，分別精密加入80%、100%、120%的對照品，按照"供試品溶液的制備"項下方法制備，進(jìn)樣測定，以加入法計算回收率。結(jié)果樣品中隱丹參酮、丹參酮I和丹參酮IIA的平均回收率分別為95.44%（RSD=1.75%）、97.59%（RSD=1.03%）、97.07%（RSD=1.60%）。

3.5 樣品的測定

精密吸取供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，測定，記錄峰面積，計算隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮IIA的含量。

4 討論

4.1 薄層色譜展開劑的選擇

本次實驗采用了不同比例的石油醚一丙酮、氯仿一丙酮及石油醚-醋酸乙酯系統(tǒng)來作為對照品及樣品的薄層展開劑，最終以石油醚-醋酸乙酯（7：3）展開為最佳。

4.2 提取溶劑的選擇

本次實驗考察了不同的溶劑及不同的提取方法處理樣品，分別采用了乙醇回流法、滲漉法、傳統(tǒng)水煎煮法、乙醇和甲醇的超聲提取法，最后確定用甲醇超聲（30min）提取的方法為最佳。藥品溶液制作方法雖然簡單便捷，但只能夠適用于此次實驗，這就意味上述溶液只能用于檢測丹參提取物中有效成分質(zhì)量，無法用于其他中藥檢測過程。

4.3 檢測波長的選擇

經(jīng)在200～400nm范圍內(nèi)光譜掃描確認(rèn)隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮IIA均在200～290nm波段有吸收，隱丹參酮最大吸收波長為262nm，丹參酮I最大吸收波長為245nm，丹參酮IIA最大吸收波長為270nm。為保證各成分都具合適的靈敏度和精密度，選用了3種成分均有較好吸收且吸收曲線平坦處的270nm作為檢測波長。

5 結(jié)束語

綜上所述可以看出，中藥當(dāng)中含有許多化學(xué)成分，正因如此，重要才能夠在臨床治療過程中發(fā)揮出顯著的療效，本文通過實驗對丹參中提取物中有效成分進(jìn)行分析，實驗表明單種成分含量情況并不能夠真實表明中藥本身具體療效，實驗根據(jù)丹參本身藥理確定丹參酮IIA、丹參酮I、隱丹參酮和二氫丹參酮為有效成分質(zhì)量測定指標(biāo)，通過多種體系來評價藥材本身質(zhì)量情況，將我國中醫(yī)藥整體情況以及作用體現(xiàn)出來。該方法操作簡單便捷無需復(fù)雜流程，實驗結(jié)果準(zhǔn)確可以反映出丹參提取物中有效成分的質(zhì)量。

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