阮 勇，張 彬，楊 康

結(jié)直腸腫瘤為發(fā)生于結(jié)、直腸及肛管黏膜上皮的腫瘤，包括肛管直腸癌、結(jié)腸癌，是大腸黏膜上皮在環(huán)境與遺傳等多種致癌因素共同作用下發(fā)生的惡性病變[1-3]，是常見的惡性腫瘤。DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)是最早在人體中發(fā)現(xiàn)的且最為重要的甲基轉(zhuǎn)移酶，DNMT1與許多抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)域CpG島的過度甲基化密切相關(guān)[4]。組蛋白去乙?；?(HDAC1)對(duì)多種血液系統(tǒng)腫瘤及實(shí)體腫瘤有一定治療作用，研究認(rèn)為HDAC1在腫瘤中的表達(dá)可能是腫瘤對(duì)HDAC1敏感的重要因素[5]。故本研究選取88例結(jié)直腸癌為研究對(duì)象，分析其HDAC1、DNMT1表達(dá)及與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2015年4月—2017年11月收治的88例結(jié)直腸癌作為研究對(duì)象，均經(jīng)手術(shù)病理檢查證實(shí)。88例中男49例，女39例；年齡36～90(58.74±18.31)歲；組織學(xué)分化程度：高分化17例，中分化45例，低分化26例；腫瘤部位：乙狀結(jié)腸37例，直腸21例，升結(jié)腸18例，降結(jié)腸12例；Dukes分期：A期27例，B期23例，C期20例，D期18例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移50例；25例腫瘤浸潤(rùn)深度未及外膜，余63例侵及外膜。同時(shí)隨機(jī)選取本組24例距離腫瘤組織≥5 cm的腸黏膜作為正常組織。納入標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前未接受放化療或其他治療手段；②臨床資料完整；③無其他惡性疾病；④簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肝、腎、心等臟器嚴(yán)重疾病者；②妊娠期或哺乳期孕婦；③合并嚴(yán)重神經(jīng)功能、認(rèn)知功能障礙者；④合并嚴(yán)重高血壓、糖尿病、冠心病者；⑤有藥物過敏史者。

1.2研究方法 標(biāo)本準(zhǔn)備：組織切片后脫蠟、水化。采用S-P免疫組織化學(xué)染色對(duì)HDAC1和DNMT1進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)過程嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。一抗陰性對(duì)照使用磷酸鹽緩沖液代替。

1.3結(jié)果判定 根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比、染色強(qiáng)度判定染色結(jié)果。陽(yáng)性細(xì)胞百分比判定：0分為無陽(yáng)性細(xì)胞，1分為陽(yáng)性細(xì)胞百分比<10%，2分為陽(yáng)性細(xì)胞百分比10%～50%，3分為陽(yáng)性細(xì)胞百分比50%～75%，4分為陽(yáng)性細(xì)胞百分比>75%。染色強(qiáng)度判定：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。以上述兩項(xiàng)評(píng)分的乘積計(jì)算總積分，總積分>4分為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2.1不同組織中HDAC1與DNMT1的表達(dá) 癌旁正常組織和結(jié)直腸癌組織中HDAC1、DNMT1陽(yáng)性表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1 組蛋白去乙酰化酶1與DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1在不同組織中的表達(dá)[例(%)]

2.2HDAC1表達(dá)與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系 HDAC1在結(jié)直腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)與組織學(xué)分化程度呈反比，分化程度越低，HDAC1陽(yáng)性表達(dá)越高(P<0.01)；Dukes分期A、B期和腫瘤未侵及外膜的結(jié)直腸癌組織HDAC1陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于Dukes分期C、D期和腫瘤侵及外膜的結(jié)直腸癌組織(P<0.05或P<0.01)；淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者的結(jié)直腸癌組織HDAC1陽(yáng)性表達(dá)率也顯著高于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移者的結(jié)直腸癌組織(P<0.05)。而結(jié)直腸癌患者年齡、性別、腫瘤直徑與HDAC1表達(dá)無顯著差異(P>0.05)。見表2。

表2 組蛋白去乙酰化酶1表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系[例(%)]

2.3DNMT1表達(dá)與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系 DNMT1在結(jié)直腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)與組織學(xué)分化程度呈反比，分化程度越低，DNMT1陽(yáng)性表達(dá)越高(P<0.05)；Dukes分期A、B期和腫瘤未侵及外膜的結(jié)直腸癌組織DNMT1陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于C、D期和腫瘤侵及外膜的結(jié)直腸癌組織(P<0.01)；淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者的結(jié)直腸癌組織DNMT1陽(yáng)性表達(dá)率也顯著高于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移者的結(jié)直腸癌組織(P<0.01)。而結(jié)直腸癌患者年齡、性別、腫瘤直徑與DNMT1表達(dá)無顯著差異(P>0.05)。見表3。

表3 DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系[例(%)]

2.4HDAC1與DNMT1表達(dá)與結(jié)直腸癌患者病理特征的相關(guān)性分析 經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，結(jié)直腸癌患者HDAC1與DNMT1表達(dá)與腫瘤組織學(xué)分化程度、Dukes分期、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性(P<0.01)。見表4。

表4 HDAC1與DNMT1表達(dá)與結(jié)直腸癌患者病理特征的相關(guān)性分析

2.5結(jié)直腸癌患者預(yù)后情況 隨訪2年，88例結(jié)直腸癌2年總生存率為63.64%(56/88)。HDAC1陽(yáng)性表達(dá)和陰性表達(dá)患者2年總生存率分別為61.02%(36/59)、68.97%(20/29)，比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；DNMT1陽(yáng)性表達(dá)和陰性表達(dá)患者2年總生存率分別為63.49%(40/63)、64.00%(16/25)，比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

結(jié)直腸癌指大腸黏膜上皮和腺體發(fā)生的惡性腫瘤[6]。我國(guó)結(jié)直腸癌發(fā)病率與病死率低于胃癌、肺癌等常見惡性腫瘤，居第四位[7]。近年來資料顯示，隨人民生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)的改變，結(jié)直腸癌發(fā)病率逐年上升[8-9]。腫瘤的發(fā)生與發(fā)展與細(xì)胞增殖、分化失控及凋亡障礙等因素密切相關(guān)。研究顯示腫瘤的發(fā)生與DNA超甲基化狀態(tài)有關(guān)[10]。

DNMT1是人體發(fā)育過程中必不可少的一種基因，通常主要具有維護(hù)甲基化活性和一小部分新甲基化活性[11-13]。與正常的細(xì)胞和組織相比，大多數(shù)癌組織中，DNMT1體外測(cè)量活性非常高，而DNA整體甲基化水平較低[14]。DNMT1轉(zhuǎn)錄本在癌細(xì)胞和腫瘤組織中較正常細(xì)胞和組織高。Cao等[15]研究顯示，DNMT1在肺癌組織中高表達(dá)，且與腫瘤細(xì)胞低分化趨勢(shì)密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示結(jié)直腸癌組織DNMT1陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于癌旁正常組織，表明結(jié)直腸癌組織中確實(shí)存在DNMT1過表達(dá)；且DNMT1在結(jié)直腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率與組織學(xué)分化程度呈反比，分化程度越低陽(yáng)性表達(dá)率越高；Dukes分期A、B期和腫瘤未侵及外膜的結(jié)直腸癌組織DNMT1陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于Dukes分期C、D期和腫瘤侵及外膜的結(jié)直腸癌組織；淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者的結(jié)直腸癌組織DNMT1陽(yáng)性表達(dá)率也顯著高于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移者的結(jié)直腸癌組織。說明結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等與DNMT1表達(dá)具有一定相關(guān)性。

HDAC1是一種經(jīng)典的蛋白酶，在染色體結(jié)構(gòu)修飾和基因調(diào)控中起重要作用，還可有效促進(jìn)結(jié)腸細(xì)胞的增殖，阻礙其異常分化[16]。大多惡性腫瘤都是由腺瘤惡變而來，近年隨醫(yī)學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，大腸鏡檢查在臨床中得到廣泛應(yīng)用，結(jié)直腸病變檢出率也不斷提升[17]。本研究顯示結(jié)直腸癌組織HDAC1陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁正常組織；HDAC1表達(dá)與患者腫瘤組織分化程度、Dukes分期、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯關(guān)系，與患者年齡、性別、腫瘤直徑無明顯差異，與費(fèi)云飛等[18]研究結(jié)果一致。提示HDAC1過表達(dá)會(huì)刺激腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、縮短腫瘤細(xì)胞的倍增時(shí)間。通過我們對(duì)患者手術(shù)后2年的隨訪發(fā)現(xiàn)，DNMT1與HDAC1表達(dá)與患者術(shù)后生存率無相關(guān)性，這與Cacan等[19]研究結(jié)果一致。表明DNMT1與HDAC1過表達(dá)與疾病進(jìn)展可能不相關(guān)。

綜上，DNMT1與HDAC1表達(dá)在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移等過程中發(fā)揮著重要作用，臨床可據(jù)二者表達(dá)情況評(píng)估患者病情并指導(dǎo)治療。