霍天武，李亞雄，孟艷莉

[1. 丹尼斯克生物科技(上海)有限公司，上海 200050；2. 上海漢聯(lián)生物科技有限公司，上海 200072]

本測(cè)試旨在測(cè)評(píng)格利特(Glutex GS2)消毒劑對(duì)SARS綜合征冠狀病毒的殺滅效力，病毒殺滅有效性試驗(yàn)按照試驗(yàn)承擔(dān)單位美國(guó)微生物檢測(cè)公司建議的方案和方法進(jìn)行。

1 材料與方法

⑴病毒：SARS綜合征冠狀病毒(美國(guó)ZeptoMetrix公司)。

⑵檢測(cè)材料：美國(guó)陶氏化學(xué)公司生產(chǎn)的格利特(Glutex GS2)消毒劑(批號(hào)：RD1455S4G1)。

⑶攻擊病毒：SARS綜合征冠狀病毒(美國(guó)ZeptoMetrix公司)。

⑷受體：E6非洲綠猴腎細(xì)胞(美國(guó)ZeptoMetrix公司)。

⑸檢測(cè)產(chǎn)品中的活性成分：20%戊二醛[格利特(Glutex GS2)]。

⑹中和劑：含有0.1%氨基乙酸的胎牛血清。

⑺稀釋劑和稀釋方法：1 200 μg/kg±2.9%美國(guó)官方分析化學(xué)家協(xié)會(huì)規(guī)定的合成硬水，參照該協(xié)會(huì)規(guī)定的方法稀釋。

⑻測(cè)試用消毒劑：格利特(Glutex GS2)消毒劑由測(cè)試提請(qǐng)方美國(guó)陶氏化學(xué)公司直接提供，接觸時(shí)間5 min，接觸溫度21 ℃ (室溫 )。

⑼受體接種：被檢測(cè)受體接種0.2 mL的病毒類族，并干燥40 min。

⑽有機(jī)荷載量：至少5%有機(jī)荷載量的病毒體。

⑾介質(zhì)和試劑：含有10%胎牛血清(FBS)的RPMI 1640試劑，含有0.1%氨基乙酸的胎牛血清，美國(guó)官方分析化學(xué)家協(xié)會(huì)規(guī)定使用的硬水，分別為100 mg/kg(±2.9%) 和 1 200 mg/kg(±2.9%)。

本測(cè)試的試驗(yàn)在位于美國(guó)弗吉尼亞州斯特林市卡蓬特大道105號(hào)的美國(guó)微生物測(cè)試公司內(nèi)進(jìn)行。研究完成日期為研究室主任所簽署的報(bào)告最終出爐日期。對(duì)協(xié)議的任何變更和修正都要由研究室主任簽字備案，注明日期并與原協(xié)議一并保存。

所有測(cè)試數(shù)據(jù)、協(xié)議及其擴(kuò)展文件、測(cè)試材料記錄、最終報(bào)告以及美國(guó)微生物測(cè)試公司與測(cè)試提請(qǐng)方美國(guó)陶氏化學(xué)公司的來(lái)往信件將一并保存在微生物測(cè)試公司內(nèi)，或者由第三方控制機(jī)構(gòu)保存。

2 測(cè)試結(jié)果

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表1、表2和表3中列出了測(cè)試結(jié)果。為確定病毒的滴定濃度對(duì)其進(jìn)行了滴定。利用Reed-Muench法(1938)計(jì)算每毫升有50%的細(xì)胞培養(yǎng)感染劑量(CCID50)。細(xì)胞存活率控制顯示E-6非洲綠猴腎細(xì)胞的存活率以及培養(yǎng)基處于無(wú)菌狀態(tài)。細(xì)胞存活率控制過程中沒有出現(xiàn)病毒。

3 結(jié)論

依據(jù)美國(guó)的法規(guī)條款，如果在所有的稀釋濃度下病毒完全失活，則該消毒劑被認(rèn)為是通過了該病毒試驗(yàn)。當(dāng)細(xì)胞毒性存在時(shí)，則消毒劑必須顯示扣除細(xì)胞毒性水平之后至少降低三個(gè)數(shù)量級(jí)。

格利特(Glutex GS2)消毒劑，500 mg/kg戊二醛溶液和1 000 mg/kg戊二醛溶液在21 ℃接觸時(shí)間為5 min條件下，均通過了SARS綜合征冠狀病毒殺滅有效性試驗(yàn)。以上結(jié)論是基于本次試驗(yàn)觀察而得出的。

感謝以下技術(shù)人員參與了本次研究工作：Lauren A. Blaszak和Lisa M.Lundberg