孫春玲 ，王亞慧 ，王東玉 ，朱 靜 ， 郝苗苗

（1.錫林郭勒職業(yè)學(xué)院，內(nèi)蒙古錫林浩特 026000；2.錫林郭勒食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心，內(nèi)蒙古錫林浩特 026000）

0 引言

沙門氏菌是一種常見的食源性致病微生物，誤食會(huì)導(dǎo)致人體出現(xiàn)傷寒、急性腸胃炎、菌血癥和敗血癥等癥狀[1]。由于其廣泛存在于自然界中，是引起的細(xì)菌性食物中毒的頭號(hào)細(xì)菌[2]，因此沙門氏菌是食品微生物檢測(cè)中常檢項(xiàng)。在日常檢測(cè)中極少檢出沙門氏菌，為了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，檢測(cè)機(jī)構(gòu)需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制。參加能力驗(yàn)證是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的重要方法之一，通過能力驗(yàn)證，可以檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室試劑和耗材的品質(zhì)，能夠驗(yàn)證檢測(cè)人員的檢測(cè)能力，也可以識(shí)別實(shí)驗(yàn)室存在的問題并啟動(dòng)改進(jìn)措施等[3]。為提高檢測(cè)室檢測(cè)能力，檢測(cè)中心參加了內(nèi)蒙古自治區(qū)組織的乳粉樣品中沙門氏菌能力驗(yàn)證，樣品編號(hào)為SLM9-19153，獲得了滿意的結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源

乳粉中沙門氏菌檢出能力驗(yàn)證樣品，內(nèi)蒙古自治區(qū)食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心提供，編號(hào)為SLM9-19153。

1.1.2 試劑和儀器

（1） 試劑。緩沖蛋白胨水（BPW）、亞硫酸鉍瓊脂（BS）、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）、四硫磺酸鈉煌綠增菌液基礎(chǔ)（TTB）、HE瓊脂、木糖懶氨酸脫氧酸鹽瓊脂（XLD）、沙門氏菌干制生化鑒定試劑盒、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、0.1%煌綠溶液、碘液等，北京陸橋技術(shù)股份有限公司提供；沙門氏菌屬診斷血清，寧波天潤(rùn)生物藥業(yè)有限公司提供。

（2） 儀器。BagMixer 400CC型均質(zhì)器、BSC-1360ⅡA2型生物安全柜、IGS400型微生物培養(yǎng)箱、MLS-3751L-PC型壓力蒸汽滅菌器等。

1.2 檢測(cè)步驟

1.2.1 樣品的制備

樣品的制備參照樣品作業(yè)指導(dǎo)書，具體做法如下：檢測(cè)前先將未開封的能力驗(yàn)證樣品置于室溫條件下；待樣品恢復(fù)至室溫后，無菌開啟鋁塑蓋和膠塞，將西林瓶中樣品完全溶解于25 mL無菌生理鹽水中。

1.2.2 檢測(cè)過程

沙門氏菌檢驗(yàn)參照《GB 4789.4-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》[4]方法進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 沙門顯色培養(yǎng)基、XLD、HE和BS平皿上菌落形態(tài)

不同培養(yǎng)基上菌落形態(tài)見表1。

由表1可知，不同培養(yǎng)基上菌落形態(tài)不盡相同，同一種培養(yǎng)基上從TTB或SC轉(zhuǎn)接后形成的菌落也不盡相同。根據(jù)GB 4789.4—2016及沙門顯色培養(yǎng)基說明書可以初步判斷，沙門顯色培養(yǎng)基上呈紫色的菌落為疑似沙門氏菌，XLD上黃色和黑色菌落疑似沙門氏菌，XLD上黑色菌落為疑似沙門氏菌，BS上帶金屬光澤的黑色菌落疑似沙門氏菌。

表1 不同培養(yǎng)基上菌落形態(tài)

2.2 生化試驗(yàn)及血清學(xué)鑒定結(jié)果

由于沙門氏菌血清型眾多，為了做到不漏檢，將不同類型的菌落全部都進(jìn)行生化試驗(yàn)及血清學(xué)鑒定。

生化試驗(yàn)及血清學(xué)鑒定結(jié)果見表2。

表2 生化試驗(yàn)及血清學(xué)鑒定結(jié)果

由表2可知，生化鑒定結(jié)果與血清學(xué)鑒定結(jié)果一致，經(jīng)綜合判定，XLD上的黑色菌落、沙門顯色培養(yǎng)基上的紫紅色菌落、HE上的黑色菌落、BS上的帶金屬光澤的黑色菌落為沙門氏菌，即該能力驗(yàn)證樣品判定為沙門氏菌陽(yáng)性樣品。

3 結(jié)論

采用GB 4789.4—2016對(duì)沙門氏菌進(jìn)行檢測(cè)的過程中，從選擇性培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)典型菌落十分重要[5]。試驗(yàn)中可以看出不同選擇性培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)不盡相同，由于沙門氏菌有眾多的血清型，雖然國(guó)標(biāo)中只需要BS和其他1種選擇性培養(yǎng)基即可，但是為了不漏檢，也為了相互驗(yàn)證，在選擇性分離時(shí)應(yīng)選擇多種培養(yǎng)基。

在GB 4789.4—2016中沙門氏菌在BS上的菌落特征為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色，有些菌株形成灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。在HE上的菌落特征為藍(lán)綠色或藍(lán)色，多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色，有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色。在XLD上的菌落特征為粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色菌落，帶或不帶黑色中心。這3種選擇性培養(yǎng)基中，典型沙門氏菌的形態(tài)有多種，而在沙門顯色培養(yǎng)基上，典型沙門氏菌為紫紅色，其他菌為藍(lán)色或者其他顏色，能更方便有效地將目標(biāo)菌和雜菌區(qū)分開，可以作為沙門氏菌檢測(cè)的首選培養(yǎng)基。

沙門氏菌作為食品微生物檢測(cè)中的常檢項(xiàng)，傳統(tǒng)國(guó)標(biāo)方法符合食品安全法的強(qiáng)制標(biāo)準(zhǔn)，方法成熟，對(duì)菌體濃度要求不高，但是耗時(shí)較長(zhǎng)，一般需要4～7 d，而且對(duì)檢測(cè)者的能力要求較高。隨著試驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展，沙門氏菌的檢測(cè)技術(shù)也在不斷完善，分子生物學(xué)方法和免疫學(xué)方法也被用于沙門氏菌的檢測(cè)中。劉立兵等人[6]建立了一種利用RPA（Recombinase polymerase amplification） 技術(shù)檢測(cè)沙門氏菌的方法，該方法經(jīng)過8 h就可完成不同濃度沙門氏菌的檢測(cè)。文其乙等人[7]利用沙門氏菌特異性抗體建立了檢測(cè)沙門氏菌的直接ELISA方法，該方法在檢測(cè)肉樣時(shí)能在48 h內(nèi)得出結(jié)果。在檢測(cè)的過程中，可以采用多種方法進(jìn)行確認(rèn)，以確保檢測(cè)結(jié)果的正確性。