丁崇正

摘? 要：自2019年12月以來，由嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2（SARS-CoV-2）感染引發(fā)的2019冠狀病毒?。–OVID-19）疫情已在全世界超200個(gè)國(guó)家流行。有研究指出，COVID-19疫情在武漢的初次爆發(fā)和2020年6月北京市的疫情反彈均可能與當(dāng)?shù)氐呐l(fā)市場(chǎng)有關(guān)。盡管目前尚無確切證據(jù)表明SARS-CoV-2的輸入來自于批發(fā)市場(chǎng)所售食品，但對(duì)食品中潛在的SARS-CoV-2進(jìn)行檢測(cè)，將有助于防止病毒的輸入和擴(kuò)散，可大幅降低批發(fā)市場(chǎng)食品中潛在的疫情傳播風(fēng)險(xiǎn)。文章就SARS-CoV-2的潛在宿主、檢測(cè)食品中SARS-CoV-2所存在的困難及相關(guān)檢測(cè)技術(shù)展開探討，以期為食品的新冠病毒檢測(cè)方法的建立提供參考。

關(guān)鍵詞：嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2（SARS-CoV-2）;食品安全;病毒檢測(cè)

中圖分類號(hào)：TS207.5? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ? ? ?文章編號(hào)：2095-2945（2020）30-0070-02

Abstract： Since December 2019， the Corona Virus Disease 2019（COVID-19） caused by Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 （SARS-CoV-2） infection has been prevalent in more than 200 countries. Some studies have pointed out that the initial outbreak of COVID-19 in Wuhan and its rebound in Beijing in June 2020 might have been related to the local wholesale market. Although there is no definite evidence that the import of SARS-CoV-2 came from the food sold in the wholesale market， the detection of potential SARS-CoV-2 in food will help prevent the import and spread of the virus and may greatly reduce the potential spread risk of the epidemic in the food in the wholesale market. This paper discusses the potential host of SARS-CoV-2， the difficulties in detecting SARS-CoV-2 in food， and related detection technologies， so as to provide reference for the establishment of COVID-19 detection methods for food.

Keywords： SARS-CoV-2; food safety; virus detection

1 概述

嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2（SARS-CoV-2）感染所引發(fā)的2019冠狀病毒病（COVID-19）是本世紀(jì)的第三次冠狀病毒大流行。世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，截至2020年6月29日，全球共有COVID-19患者9843043名，死亡人數(shù)達(dá)495760，全球的防疫形勢(shì)依舊十分嚴(yán)峻[1]。2020年6月11日，北京市疫情出現(xiàn)反彈;與COVID-19在武漢的初次爆發(fā)相似，新發(fā)地最初報(bào)告的COVID-19病例與當(dāng)?shù)氐呐l(fā)市場(chǎng)有關(guān)[2]，提示了這些最初的病例可能是通過接觸傳播或環(huán)境暴露的方式感染。盡管目前尚無確切證據(jù)表明SARS-CoV-2的輸入來自于批發(fā)市場(chǎng)所售食品，但已有報(bào)道證實(shí)，以諾如病毒為代表的食源性病毒污染廣泛存在于市售食品中[3-4]。其中，蘭州地區(qū)的諾如病毒污染狀況的調(diào)查結(jié)果顯示，4.17%的樣品呈諾如病毒陽(yáng)性，提示了貝類海鮮和蔬菜等食品是諾如病毒傳播的媒介[4]。因此，食品污染可能是SARS-CoV-2的潛在傳播途徑之一。

2 SARS-CoV-2的潛在宿主

基于同為冠狀病毒屬的SARS-CoV病毒和MERS-CoV病毒的傳播途徑進(jìn)行推測(cè)，SARS-CoV-2很可能源自于天然宿主，并通過天然宿主感染中間宿主最終感染人類[5-7]。多項(xiàng)基于基因組序列比對(duì)及系統(tǒng)發(fā)育分析的研究表明，蝙蝠是SARS-CoV-2的天然宿主[6，8]。在SARS-CoV的研究中發(fā)現(xiàn)，蝙蝠的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2（ACE2）具有更豐富的遺傳多樣性，該特性可使蝙蝠來源的冠狀病毒傳染多種不同來源的中間宿主[9]。由于人類與蝙蝠直接接觸的機(jī)會(huì)并不多，中間宿主是SARS-CoV-2由蝙蝠傳染給人類的重要媒介。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，貓、雪貂、豬等動(dòng)物較易被SARS-CoV-2感染，而雞和鴨等動(dòng)物對(duì)該病毒不敏感，說明不同物種對(duì)SARS-CoV-2病毒的親和力有所不同且部分人類常接觸動(dòng)物也可作為該病毒的傳播媒介[10-11]。李鑫等對(duì)華南海鮮市場(chǎng)的進(jìn)貨名單及

SARS-CoV-2檢測(cè)呈陽(yáng)性的動(dòng)物樣品的信息進(jìn)行分析，認(rèn)為鹿、狐貍、鼠、水貂、果子貍、穿山甲等動(dòng)物可能是該病毒的中間宿主[12]。因此，SARS-CoV-2既可通過對(duì)上述潛在中間宿主的動(dòng)物樣品進(jìn)行吸附或感染的方式進(jìn)行進(jìn)一步傳播，又可對(duì)批發(fā)市場(chǎng)內(nèi)老鼠等生物進(jìn)行感染，使病毒能較長(zhǎng)時(shí)間地存活于中間宿主體內(nèi)。

更多不同來源的中間宿主將在COVID-19的蔓延過程中受到感染，使得SARS-CoV-2的傳播網(wǎng)絡(luò)變得更為復(fù)雜，對(duì)受感染物種的防控將變成不得不面對(duì)的難題。

3 食品病毒檢測(cè)中存在的難題及相關(guān)檢測(cè)方法

目前，對(duì)食品攜帶的病毒進(jìn)行檢測(cè)主要存在以下難點(diǎn)。首先，不同食品組成成分的差異較大，除去食品雜質(zhì)的預(yù)處理過程會(huì)使食品攜帶的病毒量大幅降低甚至丟失，從而造成檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)假陰性[13]。第二，食品來源病毒的濃度往往較低且部分病毒的離體活力很強(qiáng)，在檢測(cè)前病毒的富集過程中易造成操作人員的感染[13]。第三，某些病毒可在食品表面長(zhǎng)時(shí)間吸附且不喪失感染性，會(huì)造成食品的交叉污染，降低了陽(yáng)性結(jié)果的可信度[14]。此外，鑒于SARS-CoV-2具有潛在宿主多樣、傳播網(wǎng)絡(luò)復(fù)雜的特點(diǎn)且該病毒對(duì)食品造成污染的途徑目前尚不清楚，對(duì)食品攜帶的SARS-CoV-2的檢測(cè)將會(huì)更加困難。

應(yīng)用于食品病毒檢測(cè)的傳統(tǒng)方法主要有電鏡檢查法、細(xì)胞培養(yǎng)法、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）和核酸雜交等方法[14-16]，這些方法大多具有明顯的局限性而無法應(yīng)用于SARS-CoV-2的檢測(cè)當(dāng)中。電鏡檢測(cè)需要105-106個(gè)病毒顆粒，食品所攜帶病毒的滴度往往難以達(dá)到該方法的檢出限[16]。細(xì)胞培養(yǎng)法需將SARS-CoV-2病毒進(jìn)行離體培養(yǎng)，該過程需要在P3生物安全實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行且該病毒刺突蛋白與人ACE 2受體的高親和性為將操作人員帶來了巨大的感染風(fēng)險(xiǎn)，故細(xì)胞培養(yǎng)法也不適合應(yīng)用于該病毒的食品檢測(cè)[16-18]。ELISA法具有操作簡(jiǎn)便、省時(shí)高效等優(yōu)勢(shì)，但該方法的靈敏度較低，難以滿足SARS-CoV-2的檢測(cè)要求[14，16]。綜上所述，以上傳統(tǒng)食品病毒檢測(cè)方法難以滿足食品中SARS-CoV-2的高效檢測(cè)，故需參考該病毒現(xiàn)有的臨床檢測(cè)方法選取合適的病毒檢測(cè)技術(shù)。

目前，用于COVID-19臨床檢測(cè)診斷的主要技術(shù)有熒光PCR法、實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄PCR法（RT-qPCR法）、巢式RT-PCR法和逆轉(zhuǎn)錄數(shù)字PCR法（RT-dPCR法）等[19-21]。其中， RT-qPCR法被認(rèn)為是COVID-19臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn)[19]。RT-qPCR法可通過嵌入式核酸染料或熒光探針對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，具有較高的靈敏度及準(zhǔn)確性;但是該方法在痰液、血液、糞便等樣品的檢測(cè)中均出現(xiàn)了漏檢的現(xiàn)象，提示了該方法的靈敏度無法滿足于病毒滴度更低的食品樣品的檢測(cè)[19]。RT-dPCR法能在數(shù)小時(shí)之內(nèi)對(duì)食品樣品中的核酸進(jìn)行定量，在食品檢測(cè)中得到了廣泛的應(yīng)用[21]。有研究表明，RT-dPCR法在SARS-CoV-2的檢測(cè)中具有極高的靈敏度，檢出限僅為兩個(gè)拷貝，提示了該方法適和低病毒滴度樣品的檢測(cè)[19]。此外，基于分子雜交的生物芯片技術(shù)具有高效、特異能實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，在病原體的檢測(cè)中具有廣闊的應(yīng)用前景，但鑒于該技術(shù)的所需設(shè)備的要求較高，生物芯片技術(shù)難以在短期內(nèi)應(yīng)用到食品檢測(cè)。

4 結(jié)束語(yǔ)

隨著COVID-19疫情的持續(xù)蔓延，SARS-CoV-2的宿主傳播網(wǎng)絡(luò)將變得更加復(fù)雜，許多常見的家禽牲畜也將不可避免的感染、傳播該病毒。禁止食用野生動(dòng)物并對(duì)市場(chǎng)所出售食品進(jìn)行檢測(cè)對(duì)COVID-19防控具有重大意義。目前對(duì)食品中SARS-CoV-2檢測(cè)的報(bào)道較少，檢測(cè)樣本的預(yù)處理困難、食品中病毒滴度低、檢測(cè)方法的靈敏度和重復(fù)性低可能是制約針對(duì)該病毒高效檢測(cè)的難點(diǎn)。結(jié)合臨床診斷技術(shù)對(duì)現(xiàn)有食品病毒檢測(cè)的技術(shù)進(jìn)行優(yōu)化可能對(duì)食品中SARS-CoV-2的高效檢測(cè)具有重要的指導(dǎo)意義。

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