郭瑋瑋,秦悅,楊海波,米占虎

（寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院創(chuàng)傷骨科,寧夏 銀川 750001）

脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）具有自我更新和多向分化潛能，可用于再生或修復(fù)骨組織［1］。與骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞比較，ADSCs 組織來(lái)源更豐富，細(xì)胞增殖速度更快［2］。然而，盡管有大量研究ADSCs 可分化為多種譜系，但ADSCs 分化的分子機(jī)制仍不明了。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，LncRNA）和微小RNA（miRNA）在成骨細(xì)胞分化中起關(guān)鍵作用［3-4］。研究［5］表明：LncRNAKCNQ1OT1 通過(guò)激活Wnt/β-catenin 通路促進(jìn)成骨分化以減弱骨溶解。LncRNA H19 的異常表達(dá)與成骨分化有關(guān)［6］。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)［7］表明：LncRNA 肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1（metastasis-associated lung ademocarcinoma transcript 1，MALAT1）通過(guò)抑制miR-204 的表達(dá)，促進(jìn)成骨細(xì)胞特異性標(biāo)志物堿性磷酸酶（ALP）、骨鈣蛋白（OCN）和礦化的骨基質(zhì)形成。研究［8］表明：miRNA 參與調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞分化過(guò)程。miR-34c 通過(guò)調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞中特異AT 序列結(jié)合蛋白2（special AT-rich sequence binding protein 2，SATB2）和Runt 相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（Runx2）等多個(gè)靶點(diǎn)，影響成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞在體內(nèi)的骨穩(wěn)態(tài)［9］。過(guò)表達(dá)SATB2可以促進(jìn)乙醇誘導(dǎo)的骨壞死患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchyml stem cells，BMSCs）的成骨分化［10］。目前，LncRNA MALAT1 在ADSCs 成骨分化中的作用尚不清楚。本研究旨在探討LncRNA MALAT1 通過(guò)miR-34c/SATB2 軸在ADSCs 成骨分化中的作用，以期為明確LncRNA MALAT1 調(diào)控ADSCs 成骨分化的機(jī)制和骨損傷的治療提供科學(xué)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞、主要試劑和儀器原代人ADSCs 購(gòu)自美國(guó)ScienCell 公司，HEK-293T 細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心。DMEM培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Hyclone公司，胎牛血清（FBS）購(gòu)自美國(guó)Gibco 公司，青鏈霉素混合液（100×）購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司，Lipofectamine 3000 轉(zhuǎn)染試劑購(gòu)自美國(guó)Invitrogen 公司，SYBRPremix Ex TaqTMⅡ試劑盒購(gòu)自日本TaKaTa 公司，BCA 蛋白定量試劑盒購(gòu)自北京全式金公司，lentiviral-pEF-1a/Puro-NC（Lenti-NC）、lentiviral-pEF-1a/Puro-MALAT1（Lenti-MALAT1）、lentiviral-pEF-1a/Puro-SATB2（Lenti-SATB2）、lentiviralpGLVU6/Puro-sh-NC（sh-NC）、lentiviralpGLVU6/Puro-sh-MALAT1（sh-MALAT1）、miR-NC 和miR-34c mimic（miR-34c）均購(gòu)自上海GenePharma 公司，油紅O 和茜素紅購(gòu)自美國(guó)Sigma 公司，F(xiàn)ITC-CD44 抗體、FITCCD29 抗體、PE-CD90 抗體、PE-CD105 抗體和PE-vWF 抗體購(gòu)自美國(guó)BD 公司，Runx2 抗體、OPN 抗體和OCN 抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam 公司。倒置相差顯微鏡購(gòu)自日本Nikon 公司，實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀購(gòu)自瑞士Roche 公司，微量分光光度計(jì)購(gòu)自美國(guó)Thermo Scientific 公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)ADSCs 和HEK-293T 細(xì)胞用含10% FBS、100 IU·mL－1青霉素和100 mg·L－1鏈霉素的DMEM 培養(yǎng)基中，于37℃、5% CO2條件下培養(yǎng)。

1.3 成骨細(xì)胞分化誘導(dǎo)誘導(dǎo)ADSCs 成骨分化：當(dāng)ADSCs 長(zhǎng)至80%～90%密度時(shí)，將培養(yǎng)基替換為成骨細(xì)胞特異性誘導(dǎo)培養(yǎng)基（含10%FBS，10 mmol·L－1β-甘油磷酸鈉，0.1μmol·L－1地塞米松和0.2 mmol·L－1抗壞血酸磷酸的低糖DMEM），每2 d 更換1 次培養(yǎng)基，于37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)0、3、7、14 和21 d。誘導(dǎo)ADSCs成脂分化：當(dāng)ADSCs 長(zhǎng)至80%～90%密度時(shí)，將培養(yǎng)基替換為成脂細(xì)胞特異性誘導(dǎo)培養(yǎng)基（含10%FBS，10 mmol·L－1β-甘油磷酸鈉，1 μmol·L－1地塞米松，0.5 mmol·L－13-異丁基-1-甲基黃嘌呤，10 μmol·L－1胰島素和200 μmol·L－1吲哚美辛的低糖DMEM），每2d更換1 次培養(yǎng)基，于37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)14 d。

1.4 免疫熒光染色檢測(cè)ADSCs 中CD44、CD29、CD90、CD105 和vWF表達(dá)ADSCs 成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)21d后，棄去細(xì)胞培養(yǎng)基，PBS 緩沖液清洗后，4%多聚甲醛固定，0.1% Triton X-100 穿透，10%脫脂奶粉封閉，F(xiàn)ITC-CD44 抗體（1∶200）、FITC-CD29 抗體（1 ∶200）、PE-CD90 抗體（1 ∶200）、PE-CD105抗體（1∶200）和PE-vWF 抗體（1∶200）避光孵育2h，DAPI染色，熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞發(fā)光情況。

1.5 油紅O 染色法檢測(cè)細(xì)胞脂滴形成ADSCs 棄去成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基，PBS 緩沖液清洗后，4%多聚甲醛固定。PBS 緩沖液清洗細(xì)胞后，0.3%油紅O室溫染色20 min。棄去染液，蒸餾水洗滌后，顯微鏡觀察并拍照。

1.6 ADSCs 中ALP 水平檢測(cè)ADSCs 棄去成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基，根據(jù)BCIP/NBT 堿性磷酸酯酶顯色試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)細(xì)胞中ALP 水平，酶標(biāo)儀405 nm 處檢測(cè)各組細(xì)胞吸光度（A）值，對(duì)ALP水平進(jìn)行定量。計(jì)算公式：ALP 水平＝［（樣品組A 值－空白組A 值）－（對(duì)照組A 值－空白組A值）］/（對(duì)照組A 值－空白組A 值）。

1.7 RT-PCR 法檢測(cè)ADSCs 中miR-34c 表達(dá)和LncRNA MALAT1、SATB2、Runx2、OPN 及OCN mRNA 表達(dá)水平收集轉(zhuǎn)染后的ADSCs，TRIzol法提取樣品中的總RNA，分光光度計(jì)測(cè)定RNA 濃度，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。按照SYBRPremix Ex TaqTMⅡ試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行RT-PCR 法檢測(cè)。反應(yīng)條件：95℃、30 s；95℃、5 s，58℃、30 s，40 個(gè)循環(huán)；95℃、15 s，58℃、30 s，95℃、15 s。以U6和GAPDH 為內(nèi)參，采用2－ΔΔCt法計(jì)算miR-34c 表達(dá)水平和LncRNA MALAT1、SATB2、Runx2、OPN及OCN mRNA表達(dá)水平。引物序列見(jiàn)表1。

表1 RT-PCR 法引物序列Tab.1 Primer sequences of RT-PCR method

1.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染成骨誘導(dǎo)后的ADSCs 或293T 細(xì)胞接種于6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔4×105個(gè)細(xì)胞，待細(xì)胞密度達(dá)到60%～70% 時(shí)，按照Lipofectamine 3000 說(shuō)明書(shū)進(jìn)行miR-34c 和miR-NC 的轉(zhuǎn)染，終濃度均為60 nmol·L－1。37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)48 h。ADSCs 轉(zhuǎn)染慢病毒時(shí)，將細(xì)胞培養(yǎng)液更換為含6 mg·L－1聚凝胺和感染復(fù)數(shù)（MOI）＝20 的lentiviral-pEF-1a/Puro-NC（Lenti-NC）、lentiviralpEF-1a/Puro-MALAT1（Lenti-MALAT1）、lentiviral-pEF-1a/Puro-SATB2（Lenti-SATB2）、lentiviralpGLVU6/Puro-sh-NC（sh-NC）和lentiviralpGLVU6/Puro-sh-MALAT1（sh-MALAT1）慢病毒的新鮮培養(yǎng)基，37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)48 h。

1.9 熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LncRNA MALAT1與miR-34c 和miR-34c 與SATB2 之間的靶向結(jié)合作用miRcode（http：//www.miRcode.org/）預(yù)測(cè)MALAT1 與 miR-34c 的靶向結(jié)合位點(diǎn)，TargetScan 7.1（http：//www.TargetScan.org/vert_/）預(yù)測(cè)miR-34c 和SATB2 之間的靶向結(jié)合位點(diǎn)。針對(duì)LncRNA MALAT1 3'-UTR 端和SATB2 3'-UTR 端序列構(gòu)建野生型（WT）和突變型（MUT）報(bào)告基因質(zhì)粒。參照“1.8”步驟，將MALAT1-WT 和MALAT1-MUT（或SATB2-WT 和SATB2-MUT）分別與miR-NC 和miR-34c共同轉(zhuǎn)染至HEK-293T 細(xì)胞中，48 h 后檢測(cè)熒光素酶活性。

1.10 茜素紅S（ARS）染色檢測(cè)細(xì)胞鈣鹽沉積棄去ADSCs 成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基，PBS 緩沖液清洗后，4% 多聚甲醛固定。PBS 緩沖液清洗細(xì)胞后，0.1%ARS 染色液室溫孵育20 min。棄去染液，蒸餾水洗滌。為了定量鈣鹽沉積，向細(xì)胞中加入含有10 mmol·L－1磷酸鈉的10%氯化十六烷基吡啶，并用酶標(biāo)儀檢測(cè)各樣品在562 nm 處的A 值。ARS 水平＝［（樣品組A 值－空白組A 值）－（對(duì)照組A 值－空白組A 值）］/（對(duì)照組值－空白組A 值）。

1.11 Western blotting 法檢測(cè)細(xì)胞中Runx2、OPN 和OCN 蛋白表達(dá)水平收集轉(zhuǎn)染后的ADSCs 或293T 細(xì)胞，BCA 法測(cè)定蛋白濃度，取30 μg 蛋白進(jìn)行SDS-PAGE 凝膠電泳分離蛋白，并將其轉(zhuǎn)至PVDF 膜上。10%脫脂奶粉室溫封閉3 h，加入Runx2（1∶1 500）、OPN（1∶1 000）、OCN（1 ∶2 000）和GAPDH（1 ∶2 000），4℃孵育過(guò)夜。HRP 標(biāo)記二抗（1∶2 500）室溫孵育1 h 后，ECL 發(fā)光、曝光。Image J 分析條帶灰度值，以目的蛋白條帶灰度值與GAPDH 條帶灰度值比值表示目的蛋白表達(dá)水平。

1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組細(xì)胞中熒光素酶活性，LncRNA MALAT1、miR-34、SATB2、Runx2、OPN 和OCN 表達(dá)水平，ALP 和ARS 水平均以表示，2 組間樣本均數(shù)比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ADSCs 的特征和多能分化潛能的鑒定ADSCs 中間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記物CD29、CD90、CD44 和CD105 呈陽(yáng)性表達(dá)，而內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物vWF 呈陰性表達(dá)（圖1A～F）；同時(shí)細(xì)胞具有長(zhǎng)絲狀結(jié)構(gòu)（圖2A），表明該細(xì)胞是ADSCs。油紅O 染色法和ALP 染色檢測(cè)結(jié)果顯示：在成脂或成骨誘導(dǎo)條件下，ADSCs 中有紅色脂滴形成（圖2B）和橘紅色鈣鹽沉積（圖2C）。

2.2 ADSCs 成骨分化過(guò)程中LncRNA MALAT1、miR-34c、SATB2、Runx2、OPN 及OCN mRNA 表達(dá)水平與第0 天比較，ADSCs 成骨誘導(dǎo)第3、7、14 和21 天后細(xì)胞中LncRNA MALAT1 和SATB2及成骨標(biāo)記物Runx2、OPN 和OCN mRNA 表達(dá)水平均明顯升高（P＜0.05），miR-34c mRNA 表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05）。見(jiàn)圖3。

2.3 各組細(xì)胞中LncRNA MALAT1、Runx2、OPN 和OCN蛋白表達(dá)水平及ALP 和ARS 水平與Lenti-NC 組比較，Lenti-MALAT1 組ADSCs 中Runx2、OPN 和OCN 蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01），見(jiàn)圖4A，LncRNA MALAT1 蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01），見(jiàn)圖4B，ALP 和ARS 活水平明顯升高（P＜0.01），見(jiàn)圖5和圖6；與sh-NC 組比較，sh-MALAT1 組ADSCs 中Runx2、OPN 和OCN 蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.01），見(jiàn)圖4A，MALAT1 蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.01），見(jiàn)圖4B，ALP 和ARS 水平明顯降低（P＜0.01），見(jiàn)圖5和圖6。

2.4 熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)中各組 ADSCs 中miR-34c、Runx2、OPN 和OCN 表達(dá)水平及ALP 和ARS 水平LncrRNA MALAT1 與miR-34c 結(jié)合位點(diǎn)見(jiàn)圖7A。熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與miRNC 組比較，miR-34c 轉(zhuǎn)染后MALAT1-WT 組熒光素酶活性明顯降低（P＜0.01），MALAT1-MUT組熒光素酶活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，見(jiàn)圖7B）。與miR-NC+Lenti-NC 組比較，miR-34c+Lenti-NC 組ADSCs 中miR-34c 表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01，見(jiàn)圖7C），LncRNA MALAT1 表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05，見(jiàn)圖7C），Runx2、OPN和OCN 蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.01），見(jiàn)圖8，ALP 和ARS 水平明顯降低（P＜0.01，見(jiàn)圖9和圖10，miR-34c+Lenti-MALAT1 組ADSCs 中miR-34c、MALAT1 表達(dá)水平及Runx2、OPN 和OCN 表達(dá)水平，ALP 和ARS 水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

圖3 成骨分化過(guò)程中ADSCs 中LncRNA MALAT1（A）、miR-34c（B）、SATB2（C）、OPN（D）、OCN（E）和Runx2（F）mRNA表達(dá)水平Fig.3 Expression levels of LncRNA MALAT1（A），miR-34c（B），SATB2（C），OPN（D），OCN（E），and Runx2（F）mRNA in ADSCs during osteogenie differentiation

圖4 各組ADSCs 中LncRNA MALAT1、Runx2、OPN 和OCN 蛋白表達(dá)電泳圖（A）和直條圖（B,C）Fig.4 Electrophoregram（A）and histogram（B，C）of expressions of MALAT1，Runx2，OPN and OCN proteins in ADSCs in various groups

2.5 miR-34c 與SATB2 結(jié)合位點(diǎn)和靶向結(jié)合及LncRNA MALAT1、miR-34c 和SATB2 表達(dá)水平miR-34c 與SATB2 結(jié)合位點(diǎn)見(jiàn)圖11A。熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與miR-NC 組比較，miR-34c 轉(zhuǎn)染后SATB2-WT 組熒光素酶活性明顯降低（P＜0.01），SATB2-MUT 組熒光素酶活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)圖11B；與miR-NC+Lenti-NC 組比較，miR-NC+Lenti-SATB2 組ADSCs 中SATB2 mRNA 表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01），見(jiàn)圖11C；Runx2、OPN 和OCN 蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01），見(jiàn)圖12；ALP 和ARS水平明顯升高（P＜0.01），見(jiàn)圖13和圖14；miR-34c+Lenti-SATB2組LncRNAMALAT1表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05），miR-34c 表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01），見(jiàn)圖 11C；SATB2、Runx2、OPN 和OCN 蛋白表達(dá)水平及ALP 和ARS水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

圖6 各組ADSCs 中ALP 和ARS 水平Fig.6 Levels of ALP and ARS in ADSCs in various groups

3 討論

ADSCs 是位于脂肪組織中的再生細(xì)胞，具有多向分化潛能［11］。ADSCs 可通過(guò)脂肪細(xì)胞置換促進(jìn)組織新陳代謝和血管生成［12］。BMSCs 是骨再生的細(xì)胞來(lái)源，最近研究［13］表明： BMSCs 的增殖能力和成骨分化能力隨年齡和骨質(zhì)疏松程度的增加而降低，而ADSCs 在老年和骨質(zhì)疏松情況下成骨分化能力不變。因此，ADSCs 成骨分化機(jī)制受到越來(lái)越多的關(guān)注。LncRNAs 是一種轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度超過(guò)200nt 的非編碼RNA，參與多種生物學(xué)過(guò)程，包括表觀遺傳調(diào)控、RNA衰變、細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)錄［14］。研究［15］表明：LncRNA 在調(diào)節(jié)骨骼系統(tǒng)相關(guān)的生物學(xué)活性方面（骨質(zhì)疏松癥和骨關(guān)節(jié)炎）具有重要作用。LncRNA MALAT1 通過(guò)調(diào)節(jié)miR-214/ATF4 軸促進(jìn)成骨分化［16］。

圖7 miRcode、熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)和RT-PCR 法檢測(cè)各組細(xì)胞中miR-34c 和LncRNA MALAT1 的靶向結(jié)合（A）及各組細(xì)胞中熒光素酶活性、miR-34c 和MALAT1 mRNA 表達(dá)水平（B，C）Fig.7 Targeted binding of miR-34c and MALAT1（A）and activities of luciferase expression levels of miR-34c and LncRNA MALAT1 in cells in various groups（B，C）detected by miRcode，luciferase report experiment and RT-PCR methods

圖8 Western blotting 法檢測(cè)共轉(zhuǎn)染組ADSCs 中Runx2、OPN 和OCN 蛋白表達(dá)電泳圖（A）和直條圖（B）Fig.8 Electrophoregram（A）and histogram（B）of expressions of Runx2，OPN and OCN proteins in ADSCs in co-transfection groups detected by Western blotting method

圖10 共轉(zhuǎn)染組ADSCs 中ALP 和ARS 水平Fig.10 Levels of ALP and ARS in ADSCs in cotransfection groups

研究［17］表明：LncRNA 在成骨-成脂譜系中起表觀遺傳調(diào)控作用。LncRNA MIAT1 促進(jìn)ADSCs的成骨分化并逆轉(zhuǎn)炎癥的不良反應(yīng)［18］。本研究結(jié)果顯示：在ADSCs 成骨分化過(guò)程中，MALAT1 的表達(dá)水平升高，MALAT1 正向調(diào)控ADSCs 成骨分化，這與之前的研究結(jié)果一致。研究［19］表明：miRNA 參與調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞分化過(guò)程，如miR-221-5p 通過(guò)靶向smad3 抑制BMSCs 成骨分化；miRNA-429 通過(guò)靶向SCD-1 抑制氧化應(yīng)激下人BMSCs的成骨分化［20］。lncRNA 和miRNA 間 的相互作用參與成骨分化過(guò)程，GAO等［21］研究表明：骨質(zhì)疏松患者的BMSCs 中MALAT1 表達(dá)水平明顯降低，成骨誘導(dǎo)BMSCs 后MALAT1 表達(dá)水平升高。敲除MALAT1 則抑制BMSCs 的成骨分化，MALAT1 通過(guò)靶向miR-143 促進(jìn)BMSCs 的成骨分化；lncRNA TUG1 通過(guò)使miR-204-5p 海綿化而促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化，從而導(dǎo)致Runx2 表達(dá)上調(diào)［22］。LncRNA MEG3 通過(guò)靶向miR-133a-3p 抑制BMSCs 的成骨分化［23］。本研究結(jié)果顯示：在ADSCs 成骨分化過(guò)程中，miR-34c 與MALAT1 間存在相互調(diào)控作用，MALAT1 通過(guò)靶向抑制miR-34c 的表達(dá)促進(jìn)ADSCs 成骨分化。

SATB2 是成骨細(xì)胞分化的特異性免疫組織化學(xué)生物標(biāo)記物，對(duì)骨和軟組織腫瘤發(fā)揮重要作用［24］。研究［25］表明：許多特異性miRNAs 通過(guò)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）/骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）信號(hào)途徑參與SATB2 誘導(dǎo)的早期成骨分化。miR-34b/c 靶向調(diào)控SATB2［26-27］。miR-383 通過(guò)靶向SATB2 負(fù)調(diào)控大鼠BMSCs 的成骨細(xì)胞分化［28］。本研究結(jié)果顯示：SATB2 可促進(jìn)ADSCs 成骨分化，miR-34c 通過(guò)靶向SATB2 負(fù)調(diào)控ADSCs 成骨分化。

綜上所述，LncRNA MALAT1 通過(guò)microRNA-34c/SATB2 軸促進(jìn)ADSCs 的成骨分化。本研究結(jié)果為探究lncRNA 調(diào)控ADSCs 成骨分化的機(jī)制和骨損傷的治療提供了新的科學(xué)依據(jù)。

圖11 miR-34c 與SATB2 結(jié)合位點(diǎn)和靶向結(jié)合(A)及各組細(xì)胞中LncRNA MALAT1、miR-34c和SATB2 mRNA表達(dá)水平(B,C)Fig.11 Binding sites of miR-34c and SATB2 and targeted binding（A）and expression levels of LncRNA MALAT1，miR-34c and SATB2 mRNA in cells in various groups（B，C）

圖12 Western blotting 法檢測(cè)各組ADSCs 中Runx2、OPN 和OCN 蛋白表達(dá)電泳圖（A）和直條圖（B）Fig.12 Electrophoregram（A）and histogram（B）of expressions of Runx2，OPN and OCN proteins in ADSCs in various groups detected by Western blotting method

圖14 各組ADSCs 中ALP 和ARS 水平Fig.14 Levels of ALP and ARS in ADSCs in various groups