王英華，方先珍，李 蛟，閆若潛

(河南省動物疫病預(yù)防控制中心，河南 鄭州 450008)

根據(jù)《河南省布魯氏菌病防治計劃》(2017-2020年)要求，在全省范圍內(nèi)除種畜和奶畜外，對牛羊?qū)嵭胁剪斒暇?俗稱“布病”)全面免疫，做到應(yīng)免盡免。如今，實施布魯氏菌病免疫已1年有余，為了解布魯氏菌病免疫政策實施后，牛羊免疫情況、牛羊布魯氏菌病陽性率、臨床發(fā)病率等，本試驗調(diào)查了20個縣(區(qū))，85個牛場、90個牛散養(yǎng)戶、96個養(yǎng)羊場、98個羊散養(yǎng)戶、192個養(yǎng)豬場(戶)。實施牛、羊布魯氏菌病疫苗免疫的有12個縣(區(qū))，所選取的場點末次免疫時間均在6個月以上，集中免疫的疫苗為布魯氏菌病S2株疫苗；其余8個縣(區(qū))未實施布魯氏菌病疫苗免疫。調(diào)查評估報告如下。

1 材料與方法

1.1 供試牛、羊 分布于河南全省18個地市，小地市抽查1個縣(區(qū))，大地市抽查2個縣(區(qū))，共抽查了20個縣區(qū)。涉及牛場85個，牛散養(yǎng)戶90個，采集牛血清樣品2 918份；羊場96個、羊散養(yǎng)戶98個，采集羊血清樣品3 213份；采集豬血清3 056份。

1.2 被檢血清 供試牛、羊頸靜脈采血，豬前腔靜脈采血，分離血清，于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 檢測試劑 布病陽性和陰性血清，購自中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院流行病學(xué)微生物學(xué)研究所；布病虎紅平板凝集抗原和試管凝集抗原，購自中國疾病預(yù)防控制中心傳染病研究所，批號為201802。

1.4 方法

1.4.1 虎紅平板凝集試驗 該試驗按GB/T18646-2002布病診斷技術(shù)中虎紅平板凝集試驗的操作步驟進行，在滅菌潔凈的玻璃板上，用移液器分別吸取被檢血清30 mL與虎紅平板凝集抗原30 mL混合均勻，同時設(shè)陰、陽性對照。結(jié)果判定：在陰、陽性血清對照成立的條件下，對被檢血清進行判定。被檢血清在室溫(20 ℃)4 min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象，判為陽性；無凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色者判為陰性。

1.4.2 試管凝集試驗 針對虎紅平板凝集試驗檢出的陽性血清，依據(jù)GB/T18646-2002布病診斷技術(shù)中試管凝集試驗的操作步驟進行復(fù)核。每份血清用4支凝集試管。編碼后，在第1管牛加入1.2 mL、羊加入1.15 mL稀釋液，在2～4管各加入0.5 mL稀釋液。然后向第1管加入0.05 mL牛被檢血清或0.1 mL羊被檢血清，混合均勻，棄去0.25 mL，取0.5 mL混合液加入第2管，混合均勻；再吸第2管混合液0.5 mL至第3管，如此倍比稀釋至第4管，從第4管棄去混合液0.5 mL；然后將0.5 mL稀釋好的試管凝集抗原加入已稀釋好的各血清管中，并振搖均勻。被檢血清稀釋度依次變?yōu)?∶50、1∶100、1∶200和1∶400，同時做陰、陽性對照及抗原對照，并配制比濁管。將全部試管、對照管及比濁管充分震蕩后置37 ℃溫箱中20～22 h，取出后放室溫2 h，然后判定結(jié)果。判定標準根據(jù)反應(yīng)的有無及其強度進行判定，以各管中上層液體的清亮度記錄凝集反應(yīng)的強度(凝集價)。如果牛凝集價在1∶100達50%以上凝集時、羊凝集價在1∶50達50%以上凝集時(參照比濁管清亮度)，則判定為陽性。

2 結(jié)果

2.1 抽查的20個縣(區(qū))中，實施羊布魯氏菌病免疫的有12個，占所抽查縣區(qū)的60%；實施肉牛布魯氏菌病免疫的有7個，占所抽查縣區(qū)的35%；未實施牛、羊布魯氏菌病免疫的有8個，占所抽查縣區(qū)的40%。

2.2 8個未實施牛、羊布魯氏菌病免疫的縣區(qū)(代號A～H)，共檢測牛血清樣品1 207份，檢出3份陽性樣品，陽性率0.24%(見表1)；共檢測羊血清樣品1 250份，檢出2份陽性樣品，陽性率0.16%(見表2)。陽性樣品試管復(fù)核效價見表3。

2.3 7個實施肉牛布魯氏菌病免疫的縣區(qū)(代號I～O)，共檢測牛血清樣品931份，檢出276份陽性樣品，陽性率29.65%(見表4)。53個牛場(戶)中，有16個檢出陽性樣品，場群陽性率為30.19%。

2.4 12個實施羊布魯氏菌病免疫的縣區(qū)(代號I～T)，共檢測羊血清樣品1 923份，檢出264份陽性樣品，陽性率13.73%(見表5)。在免疫的114個場(戶)中，有79個場(戶)未檢出陽性樣品，35個場(戶)有陽性樣品檢出，場群轉(zhuǎn)陽率僅為30.70%。

表1 8個未實施布魯氏菌病免疫的縣區(qū)牛感染抗體檢測結(jié)果

表2 8個未實施布魯氏菌病免疫的縣區(qū)羊感染抗體檢測結(jié)果

表3 琥紅平板試驗陽性樣品試管凝集復(fù)核結(jié)果

2.5 12個實施布魯氏菌病免疫的縣區(qū)，免疫前3年(2014-2016年)牛羊陽性率見表6。

2.6 本次調(diào)查的20個縣(區(qū))，種畜、奶畜均為免疫。44個奶牛場，有2個場群檢出陽性樣品，奶牛場群陽性率為4.5%；7個種羊場，1個奶羊場，有1個種羊場檢出陽性樣品1份。

2.7 本次調(diào)查還抽查了20個縣(區(qū))的192個豬場(戶)，共采集了3 056份豬血清，未檢出布魯氏菌病陽性樣品。

表4 7個實施肉牛布魯氏菌病免疫的縣區(qū)牛感染抗體檢測結(jié)果

表5 12個實施羊布魯氏菌病免疫的縣區(qū)羊感染抗體檢測結(jié)果

表6 12個實施布魯氏菌病免疫的縣區(qū)免疫前3年抗體陽性率 (%)

3 討論

3.1 8個未實施牛、羊布魯氏菌病免疫的縣(區(qū))認為，日常工作中布魯氏菌病的檢測陽性率并不高，對牛羊布魯氏菌病的防控應(yīng)實施監(jiān)測、陽性撲殺、逐步凈化的策略。本次調(diào)查中，8個未實施免疫的縣(區(qū))，牛陽性率為0.24%，羊陽性率僅為0.16%。牛、羊群布魯氏菌病陽性率并不高，建議各縣(區(qū))先摸清本區(qū)域布魯氏菌病感染本底情況，對陽性率不高的區(qū)域?qū)嵤┍O(jiān)測、陽性撲殺、逐步凈化的防控策略，切記盲目跟風(fēng)免疫。

3.2 本次調(diào)查的12個對牛、羊?qū)嵤┝瞬剪斒暇∶庖叩目h(區(qū))，轉(zhuǎn)陽率并不高，牛陽性率只有29.65%，羊陽性率為13.73%。場群轉(zhuǎn)陽率也不高，牛、羊場群陽率均接近1/3。陽性樣品是自然感染還是疫苗免疫后轉(zhuǎn)陽，本試驗并不能區(qū)分。結(jié)合當(dāng)?shù)厝粘２剪斒暇z測情況發(fā)現(xiàn)，從實施布魯氏菌病免疫以來，布魯氏菌病臨床發(fā)病率降低，民間的病例也在減少。因此，建議對陽性率高的區(qū)域?qū)嵤┎剪斒暇∶庖?。布魯氏菌病?yīng)實施分區(qū)域凈化、免疫區(qū)域嚴格調(diào)運的防控措施。

3.3 種畜未實施免疫，且布魯氏菌病陽性率并不高，種畜可以實施監(jiān)測、撲殺、凈化的防控策略，保持種源長期處于無疫狀態(tài)。奶畜也未實施免疫，且布魯氏菌病陽性率也不高，發(fā)現(xiàn)的陽性畜及時撲殺，因此所調(diào)查縣區(qū)本地奶源是安全放心的。

3.4 本次調(diào)查的所有豬群中，未發(fā)現(xiàn)布魯氏菌病陽性樣品，也沒有臨床病例。

3.5 12個免疫羊布魯氏菌病的縣(區(qū))中，有5個縣(區(qū))雖然免疫了，但并未檢測到抗體，有1個縣(區(qū))虎紅平板初篩時檢出了16份陽性樣品，但試管凝集復(fù)核時全部為陰性。從場群來看，免疫的114個場(戶)中，有79個場(戶)未檢出陽性樣品。布魯氏菌病疫苗免疫后，并未產(chǎn)生能檢測到的抗體。提示布魯氏菌病感染動物是否與地域有關(guān)，有待進一步研究。

3.6 布魯氏菌病危害嚴重，要凈化和根除該病。其一，畜牧部門需完善并推廣群體監(jiān)測和摸底調(diào)查。通過群體抽樣監(jiān)測發(fā)現(xiàn)陽性畜群，再利用逐頭抽樣篩查并淘汰陽性動物。其二，要加強檢疫監(jiān)管與動物撲殺補貼力度。對跨區(qū)域調(diào)運的布魯氏菌病易感動物嚴格進行風(fēng)險評估并按規(guī)定程序申報、審批，經(jīng)檢疫合格后方可調(diào)運，同時加強監(jiān)管。合法調(diào)入的動物要按規(guī)定隔離期滿后方可混群飼養(yǎng)。加強牛羊交易市場和屠宰場所的監(jiān)管。國家和地方政府根據(jù)家畜市場價格，及時調(diào)整撲殺動物補貼標準，鼓勵養(yǎng)殖戶主動撲殺陽性動物，凈化畜群。其三，加強布魯氏菌病病原、致病機制、疫苗等的研發(fā)。