張 偉，孫 力，覃 杰

(1.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第二師27團(tuán)，新疆 鐵門關(guān) 841005;2.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第二師31團(tuán)畜牧獸醫(yī)站,新疆 尉犁 841500;3.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第二師畜牧獸醫(yī)工作站，新疆 鐵門關(guān) 841005)

犢牛腹瀉是犢牛飼養(yǎng)過程中的一種常見病，一年四季均可發(fā)生，尤其以冬季和早春多發(fā)。犢牛腹瀉時(shí)引起機(jī)體大量體液?jiǎn)适?，?dǎo)致脫水、酸中毒、電解質(zhì)失衡，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致死亡。引起犢牛腹瀉的病因很多，可由病原體、飼養(yǎng)管理、應(yīng)急等因素引起，常見的病原體為細(xì)菌、病毒和寄生蟲[1]。本試驗(yàn)取腹瀉病(死)犢牛的臟器、血樣和糞便進(jìn)行細(xì)菌、病毒、寄生蟲的檢測(cè)，以期為犢牛腹瀉的防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 被檢樣品 2017-2018年間，分別在鐵門關(guān)地區(qū)12家規(guī)模牛場(chǎng)和21家散養(yǎng)戶采集腹瀉犢牛臟器(肝、肺、心、脾和腎)、深部直腸糞便以及相應(yīng)的血清樣品(采集前不對(duì)腹瀉犢牛進(jìn)行任何針對(duì)性治療和免疫)，各114份。其中肉牛品種為本地雜交黃牛、奶牛為黑白花奶牛。

1.2 主要試劑 主要培養(yǎng)基:普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、血瓊脂培養(yǎng)基、脫纖維羊血。輪狀病毒ELISA抗原檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自武漢純度生物技術(shù)有限公司。冠狀病毒抗原、病毒性腹瀉-黏膜病抗原和副結(jié)核抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自北京愛德士元享生物科技有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 細(xì)菌分離鑒定 將采集的臟器樣品按照常規(guī)劃線分離細(xì)菌的方法接種于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂、血平板培養(yǎng)基上，于37 ℃細(xì)菌恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24 h，挑取單個(gè)菌落純化培養(yǎng)后進(jìn)行生化鑒定[2]。

1.3.2 血清抗體和糞便抗原檢測(cè) 副結(jié)核、冠狀病毒、輪狀病毒、病毒腹瀉-黏膜病ELISA檢測(cè)試劑盒分別檢測(cè)副結(jié)核抗體、冠狀病毒抗原、輪狀病毒抗原、病毒腹瀉-黏膜病抗原，具體操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.3 寄生蟲檢測(cè) 隱孢子蟲的檢測(cè)[3]：糞樣置于燒杯中，加水，攪勻。經(jīng)糞篩過濾于錐形量杯中，加水稀釋近滿。自然沉淀60 min后棄上清液，留糞渣(內(nèi)含少量水份)加入離心管中，1 000 g離心10 min。棄去上清，留下管底糞渣。加飽和白糖液于離心管中，攪動(dòng)管底沉渣，1 000 g再離心10 min，糞渣下沉，卵囊即漂浮于表面用自制的鐵絲環(huán)(r=0.7 cm)醮取液膜，置400倍光學(xué)顯微鏡下觀察，并測(cè)量卵囊大小。球蟲檢測(cè)[4]：取4 ℃保存的糞樣2 g,放入50 mL燒杯中,加入30 mL飽和食鹽水,充分?jǐn)嚢?用糞篩和漏斗將溶液篩入青霉素瓶中,漂浮約20 min。將清潔的載玻片在凸起后的液面上輕輕觸一下,迅速翻轉(zhuǎn),蓋上蓋玻片,置顯微鏡下觀察。

1.3.4 數(shù)據(jù)處理：運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 主要病原的檢出率 沙門菌檢出率最高達(dá)到42.1%，其次為大腸桿菌檢出率達(dá)到38.6%，再次為病毒性腹瀉-黏膜病檢出率為24.6%。其中沙門菌和大腸桿菌的檢出率顯著高于病毒性腹瀉-黏膜病病毒、輪狀病毒、冠狀病毒、隱孢子蟲和球蟲的檢出率。輪狀病毒、冠狀病毒、隱孢子蟲、球蟲檢出率差異不顯著。肉牛和牦牛的大腸桿菌、沙門菌檢出率顯著高于輪狀病毒、冠狀病毒、病毒性腹瀉-黏膜病病毒、隱孢子蟲和球蟲檢出率。奶牛病毒性腹瀉-黏膜病病毒和輪狀病毒檢出率顯著高于冠狀病毒、隱孢子蟲和球蟲檢出率。結(jié)果見表1。

表1 主要病原的檢出率 (%)

2.2 細(xì)菌的分離鑒定 引起犢牛腹瀉的細(xì)菌主要為沙門菌和大腸桿菌，檢出率分別為42.1%和38.6%，彎曲桿菌和副結(jié)核檢出率較低，分別為2.6%和4.4%。其中肉牛、牦牛的沙門菌、大腸桿菌檢出率顯著高于奶牛的檢出率。結(jié)果見表2。

表2 細(xì)菌檢測(cè)結(jié)果

2.3 病毒的檢測(cè) 輪狀病毒檢出率21.9%，冠狀病毒檢出率14.0%，病毒性腹瀉-黏膜病檢出率24.6%。奶牛病毒性腹瀉-黏膜病、冠狀病毒和輪狀病毒檢出率均顯著高于肉牛和牦牛的檢出率。結(jié)果見表3。

表3 病毒檢測(cè)結(jié)果

2.4 寄生蟲的檢測(cè) 隱孢子蟲檢出率14.0%，球蟲檢出率13.2%。肉牛和牦牛隱孢子蟲檢出率顯著高于奶牛的檢出率，牦牛球蟲檢出率顯著高于肉牛和奶牛的檢出率。結(jié)果見表4。

表4 寄生蟲檢測(cè)結(jié)果

3 討論

3.1 牛腹瀉病因復(fù)雜，但主要有兩個(gè)方面:一是病原性腹瀉，由病毒、細(xì)菌或寄生蟲引起；二是非傳染性腹瀉，由營(yíng)養(yǎng)因素及飼養(yǎng)管理引起。本試驗(yàn)中，有3頭牛樣品未檢測(cè)到任何病原，可能為非傳染性腹瀉。奶牛病毒性腹瀉-黏膜病檢出率與郭芙莉等[5]檢測(cè)結(jié)果基本一致。牛球蟲檢測(cè)結(jié)果與庫(kù)爾班·吾甫爾檢測(cè)結(jié)果[6]差異較大，可能因?yàn)楸驹囼?yàn)抽檢的牛場(chǎng)近期驅(qū)過蟲有關(guān)。本文對(duì)鐵門關(guān)地區(qū)11個(gè)縣市腹瀉的奶牛、肉牛和牦牛進(jìn)行采樣檢測(cè)，均發(fā)現(xiàn)病毒、細(xì)菌和寄生蟲感染。說明犢牛腹瀉病情復(fù)雜，給臨床診斷與防治帶來了一定的困難。

3.2 奶牛主要以病毒感染為主，肉牛和牦牛主要以細(xì)菌感染為主。這可能與奶牛場(chǎng)大量使用抗生素，導(dǎo)致細(xì)菌減少，而牦牛、肉牛主要以放牧為主，抗生素使用較少有關(guān)。

3.3 犢牛腹瀉發(fā)生在6月齡以內(nèi),某些腹瀉甚至發(fā)生在7日齡以內(nèi)。新生畜會(huì)有一定的母源抗體殘留，采用檢測(cè)抗體的方法不能排除母源抗體的干擾，故本試驗(yàn)通過檢測(cè)糞便中的病毒抗原方法(副結(jié)核除外)檢測(cè)病毒。因廠家原因只購(gòu)買到副結(jié)核抗體檢測(cè)試劑盒，所以對(duì)檢測(cè)出副結(jié)核抗體的犢牛的母牛進(jìn)行副結(jié)核抗體的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)都為陰性，排除了母源抗體干擾。