楊宇霞 韓建欣 李 慧 趙 欣

（山西省生物研究院有限公司，山西太原 030006）

吡蟲(chóng)啉（Imidacloprid） 又名海正吡蟲(chóng)啉，化學(xué)名稱為1-（6-氯吡啶-3-吡啶基甲基） -N-硝基亞咪唑烷-2-基胺，屬硝基亞甲基類內(nèi)吸殺蟲(chóng)劑，主要用于防治刺吸式口器害蟲(chóng)及其抗性品系。多菌靈（Carbendazim） 又名棉萎靈，化學(xué)名稱為N-（2-苯駢咪唑基） -氨基甲酸甲酯，是一種苯并咪唑類殺菌劑，主要用于防治由真菌引起的病害。吡蟲(chóng)啉和多菌靈均為新一代內(nèi)吸性殺菌劑，具有廣譜、高效、低毒的特點(diǎn)，被廣泛用于蔬菜、水果的病蟲(chóng)害防治上，其殘留會(huì)對(duì)人體造成一定的危害。因此，改進(jìn)吡蟲(chóng)啉和多菌靈殘留的檢測(cè)方法、提高檢測(cè)效率十分必要。

目前，我國(guó)已頒布了多項(xiàng)吡蟲(chóng)啉和多菌靈殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，主要檢測(cè)方法有高效液相色譜法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法。液質(zhì)聯(lián)用法雖然有較低的檢出限，但儀器價(jià)格昂貴、技術(shù)要求較高、普及度不夠；高效液相色譜法因其定性定量準(zhǔn)確可靠、儀器價(jià)格適中，成為現(xiàn)在普遍采用的方法，然而現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)都只是針對(duì)其中的某一種進(jìn)行測(cè)定，且前處理較繁瑣復(fù)雜。因此，本文通過(guò)對(duì)樣品前處理方法和HPLC 分析條件的優(yōu)化，建立了同時(shí)檢測(cè)果蔬中吡蟲(chóng)啉和多菌靈殘留量的高效液相色譜法，方法簡(jiǎn)便、高效，能滿足日常檢測(cè)的需求。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

吡蟲(chóng)啉、多菌靈標(biāo)準(zhǔn)品，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所；乙腈（色譜純），霍尼韋爾貿(mào)易（上海）有限公司；甲醇（色譜純），賽默飛世爾科技（中國(guó)） 有限公司；二氯甲烷（分析純），天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司；試驗(yàn)用水為超純水。

試樣材料購(gòu)于太原農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 1100 型高效液相色譜儀，美國(guó)安捷倫科技公司；T10 分散機(jī)，廣州儀科實(shí)驗(yàn)室技術(shù)有限公司；TG16-GS 高速離心機(jī)，長(zhǎng)沙湘智離心機(jī)儀器有限公司；AL204 電子天平，梅特勒-托利多儀器上海有限公司；MS3 digital 漩渦混合器，廣州儀科實(shí)驗(yàn)室技術(shù)有限公司；ASE-24 固相萃取裝置，天津奧特賽恩斯儀器有限公司；GM-1.0A 隔膜真空泵，天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；KD200 氮?dú)獯祾邇x，杭州奧盛儀器有限公司；Cleanert-NH2 固相萃取柱（500 mg/6 mL），天津博納艾杰爾科技有限公司；NW150V 型超純水系統(tǒng)，上?？道追治鰞x器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)中間液的配制：吸取一定量吡蟲(chóng)啉儲(chǔ)備液，用甲醇溶解并稀釋成10 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)中間液，密封，于4 ℃冰箱中貯存。

多菌靈標(biāo)準(zhǔn)中間液的配制：吸取一定量多菌靈儲(chǔ)備液，用甲醇溶解并稀釋成50 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)中間液，密封，于4 ℃冰箱中貯存。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確吸取吡蟲(chóng)啉中間液0.02 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、1.0 0mL，多菌靈中間液0.01 mL、0.02 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、1.00 mL 分別加入6 個(gè)10 mL 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，即配成吡蟲(chóng)啉質(zhì)量濃度分別為0.02 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.20 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL，多菌靈質(zhì)量濃度分別為0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL、2.50 μg/mL、5.00 μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液，密封，于4 ℃冰箱中貯存。

快遞屬于技術(shù)含量較低、市場(chǎng)準(zhǔn)入門(mén)檻不高的行業(yè)，由于從業(yè)人員的素質(zhì)、經(jīng)營(yíng)管理方式等問(wèn)題，導(dǎo)致了目前快遞業(yè)很難給用戶提供穩(wěn)定而有效的服務(wù)。少數(shù)企業(yè)片面追求經(jīng)濟(jì)利益，服務(wù)內(nèi)容和方式過(guò)于簡(jiǎn)單，在解決消費(fèi)者糾紛時(shí)，態(tài)度較差，不管有沒(méi)有責(zé)任先推諉，這些都導(dǎo)致部分用戶對(duì)快遞企業(yè)不滿，甚至引發(fā)矛盾升級(jí)。規(guī)范快遞行業(yè)經(jīng)營(yíng)秩序，保障整個(gè)市場(chǎng)健康發(fā)展，已事在必行。同時(shí)，針對(duì)無(wú)照經(jīng)營(yíng)的”黑”快遞，執(zhí)法部門(mén)應(yīng)加大聯(lián)合監(jiān)管執(zhí)法力度，加強(qiáng)政府監(jiān)督，從而營(yíng)造合法有序的快遞市場(chǎng)環(huán)境，更加有效地保護(hù)消費(fèi)者的合法權(quán)利。

1.3.2 樣品制備

稱取蔬菜、水果樣品可食部分約300 g，將其切碎，用攪拌機(jī)粉碎，裝入容器，密封備用。

1.3.3 樣品提取

準(zhǔn)確稱取25.00 g 試樣，置于250 mL 高型燒杯中，加入50 mL 乙腈，4-5 檔高速勻漿2 min 后，于10 000 r/min 離心10 min，上清液轉(zhuǎn)移到裝有5 g氯化鈉的具塞量筒中，劇烈振蕩2 min，室溫下靜置分層。

1.3.4 樣品凈化

取10 mL 上清液于刻度試管中40 ℃氮?dú)獯抵两?。加?.0 mL 甲醇-二氯甲烷（1+99） 溶解殘?jiān)?，渦漩2 min，待凈化。將氨基柱用4.0 mL 甲醇-二氯甲烷（1+99） 預(yù)洗活化，當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即加入上述待凈化液，收集洗脫液于13 mL 刻度試管中，用2.0 mL 甲醇-二氯甲烷（1+99） 潤(rùn)洗刻度試管后過(guò)柱，重復(fù)2 次。將洗脫液于40 ℃氮?dú)獯抵两?，用流?dòng)相溶解定容至2.5 mL，渦漩2 min 后，用孔徑0.22μμm 有機(jī)濾膜過(guò)濾，上機(jī)檢測(cè)。

1.3.5 色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse Plus C18（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（32∶68）；流速：1.0 mL/min；柱溫：40 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

分別采用勻漿和勻漿加超聲2 種方法進(jìn)行提取試驗(yàn)，結(jié)果表明，2 種方法處理的結(jié)果無(wú)明顯差異，回收率均符合試驗(yàn)要求，故選擇操作簡(jiǎn)單、省時(shí)的勻漿作為最終提取方法。

2.1.2 凈化條件的選擇

選擇C18小柱和氨基小柱為固相萃取柱進(jìn)行凈化試驗(yàn)，經(jīng)試驗(yàn)表明，氨基柱處理除雜質(zhì)比較徹底、干擾少、重復(fù)性好，因此選擇氨基柱作為固相萃取小柱。

2.2 色譜條件的優(yōu)化

2.2.1 色譜柱的選擇

分別考察了Agilent TC-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）和Agilent Eclipse Plus C18柱對(duì)吡蟲(chóng)啉和多菌靈的分離效果。結(jié)果顯示，在相同色譜條件下，Eclipse Plus 柱的分離效果較好，且柱壓較低、保留時(shí)間較短，故選擇Eclipse Plus 柱作為試驗(yàn)用色譜柱。吡蟲(chóng)啉和多菌靈混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2.2 流動(dòng)相組成及比例的選擇

分別以甲醇、水和乙腈、水為流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果表明，乙腈水為流動(dòng)相時(shí)，吡蟲(chóng)啉的保留時(shí)間短，很難與其他雜質(zhì)干擾峰徹底分離，故選擇甲醇水作為流動(dòng)相組成。

固定甲醇水作為流動(dòng)相組成，分別考察了比例為30∶70、32∶68、35∶65、40∶60 的條件下，對(duì)分離效果的影響。結(jié)果表明，比例為40∶60 時(shí)，吡蟲(chóng)啉由于保留時(shí)間太短，易受其他雜質(zhì)峰的干擾，分離度較差。隨著甲醇比例的減少，保留時(shí)間延長(zhǎng)，分離度增大，當(dāng)達(dá)到32∶68 時(shí)，吡蟲(chóng)啉與多菌靈的保留時(shí)間和分離效果均達(dá)到理想狀態(tài)。隨著甲醇比例的繼續(xù)減少，保留時(shí)間繼續(xù)延長(zhǎng)，靈敏度降低，因此最終選擇甲醇和水比例為32∶68 作為試驗(yàn)條件。

2.3 方法的線性關(guān)系與檢出限

分別對(duì)各系列濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行測(cè)定，以色譜峰面積Y 對(duì)其質(zhì)量濃度X（μg/mL） 進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以3 倍信噪比對(duì)應(yīng)的含量計(jì)算吡蟲(chóng)啉、多菌靈檢出限（S/N=3），線性方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限見(jiàn)表1。結(jié)果表明，吡蟲(chóng)啉在0.02 μg/mL～1.00 μg/mL、多菌靈在0.05 μg/mL～5.00 μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R≥0.999 9。

表1 線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限

2.4 準(zhǔn)確度與精密度試驗(yàn)

采用在樣品中加標(biāo)的方法進(jìn)行回收率與精密度的測(cè)定。分別添加0.05 μg/g、0.10 μg/g、0.20 μg/g 3個(gè)水平的標(biāo)準(zhǔn)品，按照本研究?jī)?yōu)化的方法進(jìn)行加標(biāo)回收率試驗(yàn)，每個(gè)加標(biāo)水平平行測(cè)定6 次，精密度和回收率結(jié)果見(jiàn)下頁(yè)表2。由表2 可以看出，蔬菜、水果樣品中吡蟲(chóng)啉、多菌靈在0.05 μg/g～0.20 μg/g添加水平下，回收率為85.1%～100.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.6%～6.6%之間，該方法測(cè)定吡蟲(chóng)啉、多菌靈殘留量準(zhǔn)確度和精密度良好。

圖1 吡蟲(chóng)啉和多菌靈混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

表2 精密度和回收率結(jié)果（n=6）

3 結(jié)論

建立了固相萃取-高效液相色譜同時(shí)測(cè)定水果、蔬菜中吡蟲(chóng)啉和多菌靈殘留量的方法。通過(guò)對(duì)前處理過(guò)程和色譜條件的優(yōu)化，確定了最佳提取、凈化條件和色譜條件。在設(shè)定的色譜條件下，吡蟲(chóng)啉和多菌靈的檢出限為0.005 μg/g 和0.019 μg/g，相關(guān)系數(shù)達(dá)0.999 9 以上，回收率為85.1%～100.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.6%～6.6%之間，該方法簡(jiǎn)便、高效，適用于果蔬中吡蟲(chóng)啉和多菌靈殘留量的同時(shí)測(cè)定。