張志超，韓慧麗,蘇莎莎

0 引言

布洛芬混懸液為解熱鎮(zhèn)痛藥，通過減少前列腺素合成，使體溫調(diào)節(jié)中樞的調(diào)定點(diǎn)下降，產(chǎn)生周圍血管擴(kuò)張、出汗散熱而發(fā)揮解熱作用[1]，主要用于兒童普通感冒或流行性感冒引起的發(fā)熱。布洛芬混懸液為含2%布洛芬的多劑量包裝口服液體制劑，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X161)-2003Z[2]，輔料中所用防腐劑為苯甲酸鈉。

抑菌劑又稱防腐劑，是抑制微生物生長的化學(xué)物質(zhì)，多用于多劑量包裝的制劑，以防止在正常的貯藏或使用過程中，由于微生物污染和繁殖，使藥物變質(zhì)而對使用者造成傷害[3]。苯甲酸鈉具有較好的抑菌作用，是內(nèi)服液體制劑有效的防腐劑[4]。因具有一定毒性，過量服用會對身體造成不良影響。本文考察按說明書規(guī)定服用布洛芬混懸液時(shí)，其中的苯甲酸鈉是否會對兒童身體造成損害。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 U3000高效液相色譜儀，Thermo Fisher公司；BSA224S電子天平，北京賽多利斯公司。儀器均經(jīng)檢定合格，在檢定周期內(nèi)。

1.2 試劑和樣品 苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品(Dr.Ehrenstorfer GmbH，G167299，98.94%)，色譜甲醇，賽默飛世爾科技(中國)有限公司；乙酸銨，色譜級，Dikma Technologies Inc.，實(shí)驗(yàn)用水為超純水，電阻率18.2 MΩ.cm。

1.3 樣品 在國家藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)站“藥品查詢”下搜索“布洛芬混懸液”，共有11條記錄，分屬9個(gè)生產(chǎn)廠家[5]。購得7個(gè)廠家的藥品，說明書中[成分]項(xiàng)均注明用到苯甲酸鈉。為避免透露廠家信息，藥品分別用代號A、B、C、D、E、F、G替代。

2 方法

參考GB 5009.28-2016《國家食品安全標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》，對樣品中苯甲酸鈉(以苯甲酸計(jì))含量進(jìn)行測定[6]。美國FDA藥用輔料數(shù)據(jù)庫中，苯甲酸鈉用于口服混懸液時(shí)，最大使用濃度是37.88 mg/5 ml[7]，即7.58 mg/ml。以此為參考，判斷樣品中苯甲酸鈉含量是否超標(biāo)。WHO規(guī)定，苯甲酸鈉的ADI為5 mg/kg[8]。計(jì)算患兒按藥品說明書中[用法用量]最大用量服藥時(shí)，攝入的苯甲酸鈉是否超標(biāo)。

2.1 苯甲酸鈉測定方法

2.1.1 色譜條件 外標(biāo)法定量。C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相：甲醇-0.02 mol/L乙酸銨(5∶95)，流速1.0 ml/min，檢測波長230 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μl。

2.1.2 溶液的配制 對照品溶液的制備：精密稱取苯甲酸鈉0.119 6 g于100 ml容量瓶中，加水至刻度，定容，作為標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1 183 mg/L)。準(zhǔn)確吸取儲備液10 ml于50 ml容量瓶中，加水至刻度，定容，作為標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(236.6 mg/L)。標(biāo)準(zhǔn)儲備液和標(biāo)準(zhǔn)中間液4 ℃儲存。

樣品溶液的制備：準(zhǔn)確量取2 ml樣品于50 ml容量瓶中，加水約25 ml，于50 ℃水浴超聲20 min，加水至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.2 小兒服用布洛芬混懸液的用量 12歲以下小兒服用布洛芬混懸液的用量見表1。

表1 12歲以下小兒布洛芬混懸液用量

3 結(jié)果

3.1 苯甲酸鈉含量測定結(jié)果

3.1.1 線性關(guān)系考察 準(zhǔn)確吸取苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)中間液0.5、1、2.5、5、10 ml，用水定容至10 ml，配制成濃度分別為11.83、23.66、59.15、118.3、236.6 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。分別注入液相色譜儀中，測定相應(yīng)的峰面積，以混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液的質(zhì)量濃度X為橫坐標(biāo)，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得制標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=4.207 6 X+0.099 9(r2=0.999 8)。表明樣品中苯甲酸鈉濃度在11.83～236.6 mg/L范圍內(nèi)，峰面積與濃度線性關(guān)系較好。

3.1.2 精密度試驗(yàn) 取23.66 mg/L的對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積并計(jì)算RSD。結(jié)果苯甲酸鈉的RSD為0.18%，表明方法重復(fù)性良好。

3.1.3 檢測限和定量限 采用信噪比法計(jì)算檢出限和定量限。取5.91 mg/L的對照品溶液進(jìn)樣，計(jì)算信噪比。換算出信噪比為3∶1時(shí)的相應(yīng)濃度為檢出限，信噪比為10∶1時(shí)相應(yīng)的濃度為定量限[9]。苯甲酸鈉檢出限為3.94 ng，定量限為12.46 ng。實(shí)驗(yàn)中測定苯甲酸鈉的濃度符合方法學(xué)要求。

3.1.4 樣品測定 7個(gè)樣品中均檢出苯甲酸鈉。苯甲酸鈉含量范圍為0.97～3.86 mg/ml，平均含量為2.05 mg/ml。E藥品添加最多，B藥品添加最低，E用量為B的近4倍。具體含量見表2。

表2 樣品中苯甲酸鈉(以苯甲酸計(jì))測定結(jié)果(mg/ml)

3.1.5 回收率試驗(yàn) 取樣品C，含苯甲酸鈉量為1.82 mg/ml。分別精密加入約相當(dāng)于其80%、100%、120%濃度的苯甲酸鈉對照品溶液，每個(gè)濃度制作3份。按“2.1.2”項(xiàng)樣品溶液的制備下“供試品溶液的制備”處理，同法測定。苯甲酸鈉平均回收率為102.7%，RSD為1.4%。

3.2 樣品中苯甲酸鈉含量與FDA最大使用濃度比較 由表2可知，7種藥品中苯甲酸鈉含量均<7.58 mg/ml。布洛芬混懸液中苯甲酸鈉的用量符合FDA規(guī)定的最大使用濃度。

3.3 苯甲酸鈉日攝入量計(jì)算結(jié)果 12歲以下兒童按體重分組，根據(jù)藥品說明書中規(guī)定的最大用量，計(jì)算每日所服用布洛芬混懸液中的苯甲酸鈉的含量。結(jié)果見表3。

表3 日最大用藥量時(shí)攝入的苯甲酸鈉計(jì)算結(jié)果

如表3所示，1～3歲、7～9歲、10～12歲的兒童在每日服用4次藥品E時(shí)，每日攝入的苯甲酸鈉均超過WHO規(guī)定的日最高攝入量。

4 討論

4.1 防腐劑的用量應(yīng)盡量控制在產(chǎn)生抑菌作用的最低有效濃度，此有效濃度以保證藥品在使用和有效期內(nèi)微生物限度合格為前提。防腐劑在規(guī)定的使用濃度范圍內(nèi)，一般不良反應(yīng)極少發(fā)生；但若增加用量，有可能發(fā)生原發(fā)性刺激和過敏等不良反應(yīng)[10-11]。《中國藥典》2015年版四部中，通則0123規(guī)定，口服混懸劑可根據(jù)需要，加入適宜的抑菌劑，其品種和用量應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)規(guī)定[9]。苯甲酸鈉是《中國藥典》2015年版收載的藥用輔料、抑菌劑，用于布洛芬混懸液并無不當(dāng)。但對于用量，盡管有資料提到應(yīng)為0.1%～0.3%，但在我國藥品標(biāo)準(zhǔn)中并未提及。同為口服液體制劑的合劑，在通則0181項(xiàng)下規(guī)定，使用苯甲酸鈉時(shí)，用量(以苯甲酸計(jì))不得超過0.3%[9]。為避免因藥用輔料帶來的安全性問題，建議在制劑通則中，結(jié)合給藥途徑、每日劑量、給藥人群等因素，確定苯甲酸用量的限度。

4.2 從臨床安全用藥角度，測定藥品中苯甲酸的含量具有實(shí)際意義。《中國藥典》2015年版四部通則1121抑菌效力檢查法，用于指導(dǎo)生產(chǎn)企業(yè)在研發(fā)階段制劑中抑菌劑濃度的確定[9]。通過測定制劑的抑菌活性，可確定藥品中防腐劑的最低有效殺菌或抑菌濃度是否合理，但對于藥品中使用防腐劑的上限卻無限制[12]。ICH也提出應(yīng)制定防腐劑含量測定方法。建議我國藥品標(biāo)準(zhǔn)中增加防腐劑含量測定的方法。

4.3 因藥品標(biāo)準(zhǔn)中對于苯甲酸鈉(以苯甲酸計(jì))的用量沒有明確規(guī)定，藥品中添加量由生產(chǎn)企業(yè)自主研發(fā)決定，不同廠家布洛芬混懸液中苯甲酸含量差別較大，同一廠家不同批次的布洛芬混懸液中苯甲酸含量也有一定差別[13]。鑒于布洛芬混懸液為兒童常用藥品，建議將其苯甲酸含量標(biāo)準(zhǔn)具體化，給出明確的限值，并列為布洛芬混懸液的檢驗(yàn)項(xiàng)目[14]。