王英軍，孫英蓮

（吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130012）

抑郁癥是一種情感性精神疾病，在臨床上主要表現(xiàn)為心境低落、思維遲緩、認(rèn)知功能損害、意志活動(dòng)減退以及軀體癥狀等[1-2]。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)告，目前抑郁癥是全球第四大疾病，中國(guó)抑郁癥患者高達(dá)7 000萬(wàn)，保守估計(jì)有2 億人在一生中需要接受專業(yè)的心理咨詢或心理治療[3]。預(yù)計(jì)2020 年抑郁癥將躍居僅次于心臟病為第二大疾病。目前，治療方法主要有電抽搐、心理療法及藥物治療。百合具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和糖代謝等藥理作用[4]，赤芍總苷具有改善異常血液流變、抗血小板聚集、抗血栓形成等作用，在神經(jīng)精神疾病研究中，芍藥苷也具有明顯的神經(jīng)保護(hù)作用，有廣闊的研究前景。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)于二者的聯(lián)合在抗抑郁方面的應(yīng)用尚未見報(bào)道。本研究通過對(duì)抑郁模型大鼠連續(xù)灌服赤芍總苷/百合總皂苷混合制劑（2∶1），觀察其對(duì)試驗(yàn)大鼠的糖水消耗率、單胺類遞質(zhì)及海馬中BDNF 蛋白表達(dá)量的影響，探討赤芍總苷/百合總皂苷混合制劑抗抑郁作用及其可能的作用機(jī)制，為今后臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 赤芍總苷為淺黃棕色粉末，以總皂苷計(jì)算純度為 58.02%，百合皂苷為棕黃色粉末，以總皂苷計(jì)算純度為59.37%，由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院化學(xué)室提供。經(jīng)前期篩選試驗(yàn)得知，赤芍總苷/百合總皂苷的最佳配比為 2∶1，臨用時(shí)以蒸餾水配成所需濃度。

1.1.2 動(dòng)物 健康SD 大鼠，雌雄各半，由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司提供〔許可證號(hào)：SCXK-（遼）2015-0001〕。

1.1.3 試劑 大鼠5-羥色胺（5-HT）Elisa 試劑盒（產(chǎn)品編號(hào)：MEXN-R1033，批號(hào)：20191103）、大鼠去甲腎上腺素（NE）Elisa 試劑盒（產(chǎn)品編號(hào)：MEXN-R0617，批號(hào)：20191103）（上海美軒生物科技有限公司）；鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子Elisa試劑盒（產(chǎn)品貨號(hào)：Ml302829-1，批號(hào)：20191110，上海酶聯(lián)生物科技有限公司）。

1.1.4 儀器 T-1000 型電子天平（常熟雙杰測(cè)試儀器廠）；D3024R高速低溫離心機(jī)（美國(guó)SCILOGEX公司）；ST-360 酶標(biāo)儀（上?？迫A實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 赤芍總苷/百合總皂苷對(duì)抑郁大鼠糖水消耗率的影響 選用 60 只健康SD 大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、百合總皂苷組、赤芍總苷組、赤芍總苷/百合總皂苷高劑量組及赤芍總苷/百合總皂苷低劑量組，每組10 只。除對(duì)照組外，其他5 組進(jìn)行慢性輕度不可預(yù)見應(yīng)激刺激造模，刺激內(nèi)容有單籠飼養(yǎng)大鼠，每天連續(xù)給予一種不同刺激：禁食（24 h）、禁水（24 h）、潮濕墊料（24 h）、照明（24 h）、夾尾（1 min，距尾根1 cm）、束縛（2 h）、冷水游泳（4 ℃，5 min）、高溫環(huán)境（40 ℃，5 min）及鼠籠傾斜（45 ℃，24 h）等，每天選取一種刺激，每個(gè)刺激使用不超過2次，連續(xù)進(jìn)行21d。造模同時(shí)每天灌胃給藥1次，對(duì)照組與模型組給予同體積蒸餾水10mL/kg，赤芍總苷組給予50 mg/kg 赤芍總苷、百合總皂苷組50 mg/kg 百合總皂苷、赤芍總苷/百合總皂苷高劑量和赤芍總苷/百合總皂苷低劑量組分別給予赤芍總苷/百合總皂苷混合制劑50、25mg/kg，給藥體積均為10mL/kg，每7 d 稱量1 次體重，在造模前1 d 和造模第21 天禁食禁水14 h 后，每籠添加同體積的飲用水和1%蔗糖水各 1 瓶，30 min 后，互換兩瓶水的位置，1 h 后取兩瓶水稱量。計(jì)算每組動(dòng)物的糖水消耗率（糖水消耗率=糖水消耗/總液體消耗 100）[5]。

1.2.2 赤芍總苷/百合總皂苷對(duì)抑郁大鼠5-HT、NE 和BDNF 含量的影響 造模給藥同“1.2.1”。末次給藥后，用10%的水合氯醛腹腔麻醉，打開腹腔腹主動(dòng)脈采血，采用 ELISA 法測(cè)定大鼠血清5-HT 及NE 含量，嚴(yán)格按照試劑盒說明操作。取血后處死大鼠，稱量大鼠海馬組織20 mg，加預(yù)冷的生理鹽水制成10%的組織勻漿，4 ℃3 000 r/min 離心10 min，取上清液嚴(yán)格按照試劑盒說明操作，在450 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定BDNF 的OD 值，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出樣本中的BDNF 濃度[6-8]。

2 結(jié)果與分析

2.1 赤芍總苷/百合總皂苷對(duì)抑郁模型大鼠體重變化的影響

由表1 可知，造模前至第7 天，各組間大鼠體重?zé)o顯著差異（P ＞ 0.05）；第 14 天，MX 組較 CK 組體重顯著降低（P ＜ 0.05），第21 天，大鼠體重各組間有顯著差異（P ＜ 0.05），其中模型組與對(duì)照組比較大鼠體重顯著降低（P ＜0.01），接受藥物治療21 d 后，給藥組大鼠受到削弱的體重增長(zhǎng)得到恢復(fù)，說明各給藥組能夠迅速恢復(fù)由于刺激引起的體重增長(zhǎng)的停滯。

2.2 赤芍總苷/百合總皂苷對(duì)抑郁大鼠糖水偏好的影響

由表2 可知，模型組糖水偏好均明顯低于對(duì)照組（P ＜0.01），表明抑郁模型成立。接受赤芍總苷、百合總皂苷和赤芍總苷/百合總皂苷聯(lián)合應(yīng)用治療的大鼠其糖水?dāng)z入量與模型組比較具有顯著差異（P ＜0. 01）。說明單獨(dú)用藥和聯(lián)合應(yīng)用組能夠恢復(fù)CMS 引起的大鼠糖水?dāng)z入量的減少，緩解抑郁大鼠的快感缺乏癥狀，從而產(chǎn)生抗抑郁作用。

表1 赤芍總苷/百合總皂苷對(duì)抑郁大鼠體重變化的影響Table 1 Effect of total saponins of Paeonia /total saponin of Lilium on weight change of depression rats

表2 赤芍總苷/百合總皂苷對(duì)抑郁大鼠糖水消耗率的影響Table 2 Effect of total saponins of Paeonia / total saponin of Lilium on sugar water preference in depressed rats

2.3 赤芍總苷/百合總皂苷對(duì)抑郁大鼠 5-HT、NE 和BDNF 的影響

由表3 可知，模型組5-HT、NE 和BDNF 含量明顯降低，通過藥物干預(yù)后，赤芍總苷組能夠增加5-HT和NE 含量，百合總皂苷組能夠增加5-HT 含量，二組單獨(dú)用藥雖然均能增加BDNF 含量但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而赤芍總苷/百合總皂苷聯(lián)合應(yīng)用組較單獨(dú)用藥組能夠顯著增加 5-HT、NE 和 BDNF 含量（P ＜ 0.01）。

表3 赤芍總苷/百合總皂苷對(duì)大鼠血清中 5-HT、NE 和腦中 BDNF 的影響Table 3 Effect of total saponins of Paeonia / total saponin of Lilium on serum 5-HT, NE and brain BDNF in rats

3 討論

據(jù)統(tǒng)計(jì)抑郁癥在我國(guó)近30 年發(fā)病率急劇上升，具有高發(fā)病率、高自殺率及低治療率等特點(diǎn)。研究者對(duì)抑郁患者進(jìn)行了10 年追蹤研究發(fā)現(xiàn)，醫(yī)院對(duì)抑郁癥的識(shí)別率不足20%，只有不到10%的患者接受了相關(guān)的藥物治療，可見其病因和機(jī)制較為復(fù)雜[9]，目前認(rèn)為慢性、長(zhǎng)期的應(yīng)激源是促進(jìn)抑郁發(fā)生、加重病情的主要原因。因此采用與人類抑郁癥發(fā)病特征相似、更為接近發(fā)病機(jī)理[10]的動(dòng)物模型尤為重要。

慢性輕度不可預(yù)見應(yīng)激抑郁模型就是模擬抑郁癥發(fā)生的環(huán)境誘因，其特點(diǎn)是應(yīng)激因子的多變性和不可預(yù)見性，已成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者探討抑郁癥的發(fā)病機(jī)制而廣泛應(yīng)用的動(dòng)物模型。由于體重異常同樣是抑郁癥的一個(gè)重要診斷指標(biāo)，研究發(fā)現(xiàn) CMS 能夠引起大鼠體重增長(zhǎng)變緩，而體重增速的減緩可能進(jìn)一步加劇糖水?dāng)z入量的減少，因此該試驗(yàn)采用連續(xù)21 d 給予大鼠各種刺激造成慢性輕度不可預(yù)見應(yīng)激抑郁模型，結(jié)果表明，模型組糖水?dāng)z入量減少、體重增速減緩，通過藥物干預(yù)治療后，赤芍總苷、百合總皂苷組對(duì)大鼠體重、糖水消耗方面得到了改善，均具有一定的緩解快感缺失的作用，而赤芍總苷/百合總皂苷聯(lián)合應(yīng)用效果明顯優(yōu)于單獨(dú)應(yīng)用組，提示兩藥的聯(lián)合運(yùn)用可以互相協(xié)同從而更好地發(fā)揮抗抑郁作用。

有關(guān)抑郁癥的生物學(xué)病因早在30 多年前就已被認(rèn)識(shí)。研究指出抑郁癥的發(fā)生是由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中5-羥色胺（5-HT）、去甲腎上腺素（NE）等多巴胺受體釋放減少，突觸間隙含量下降所致[11]，5-HT不足時(shí)，不能刺激脈絡(luò)膜叢生成神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子濃度下降可降低神經(jīng)元功能[12-13]，而BDNF 是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子重要組成之一，也是治療抑郁癥的重要靶點(diǎn)[14-15]。該試驗(yàn)通過構(gòu)建慢性輕度不可預(yù)見應(yīng)激抑郁模型來(lái)評(píng)價(jià)聯(lián)合應(yīng)用的抗抑郁作用，結(jié)果表明，赤芍總苷能夠增加血清中NE 含量，百合總皂苷能夠增加血清中5-HT含量，而赤芍總苷/百合總皂苷聯(lián)合應(yīng)用組能明顯增加5-HT、NE 的含量，調(diào)節(jié)大鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)（P ＜0.01）。表明赤芍總苷/百合總皂苷聯(lián)合應(yīng)用發(fā)揮了藥物的協(xié)同作用，通過多靶點(diǎn)提高了療效起到抗抑郁的作用[16]。

綜上所述，該研究采用赤芍總苷/百合總皂苷聯(lián)合應(yīng)用為研究對(duì)象，通過對(duì)慢性輕度不可預(yù)見應(yīng)激抑郁模型大鼠的治療，驗(yàn)證了聯(lián)合應(yīng)用效果更優(yōu)于二者單獨(dú)應(yīng)用，其協(xié)同作用尚需進(jìn)一步探討。提示赤芍總苷/百合總皂苷聯(lián)合應(yīng)用在抗抑郁方面具有重要的理論意義，為進(jìn)一步研究和開發(fā)利用提供了新思路。