李富周，賀春香，余婧萍，宋禎彥，李 平，成紹武*

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙410208；2.中西醫(yī)結(jié)合心腦疾病防治湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長沙410208）

阿爾茨海默病（Alzheimer's disease， AD）是一種致死率、致殘率很高的神經(jīng)退行性疾病，主要臨床特征表現(xiàn)為空間學(xué)習(xí)、記憶力障礙。 據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國已經(jīng)有超過500 萬AD 患者[1]。 AD 的發(fā)病機(jī)制尚未明確，目前尚無明確有效的干預(yù)治療藥物。隨著我國人口老齡化加劇，闡明AD 具體的發(fā)病機(jī)制及尋求新的治療靶點(diǎn)已成為亟待解決的焦點(diǎn)、難點(diǎn)問題。

細(xì)胞外β-淀粉樣蛋白（β-amyloid protein， Aβ）沉積是AD 的主要病理特征[2]。 研究認(rèn)為Aβ 的過量分泌和異常聚集都會(huì)影響神經(jīng)細(xì)胞的正常生理功能，進(jìn)而造成AD 的發(fā)生與發(fā)展[3]。特別是Aβ 寡聚體的大量聚集易引起突觸功能障礙，促使神經(jīng)元丟失，從而導(dǎo)致AD 的發(fā)生[4]。近年來發(fā)現(xiàn)Aβ 和APP 裂解產(chǎn)物（如AICD）能通過調(diào)節(jié)甲羥戊酸途徑相關(guān)酶的活性影響蛋白異戊二烯化修飾促進(jìn)AD 的發(fā)生與發(fā)展[5]。 蛋白質(zhì)的異戊二烯化修飾包括法尼基化（farnesylation， FPP）和香葉基化兩種，膽固醇從頭合成的甲羥戊酸途徑中非固醇類異戊二烯中間產(chǎn)物，包括法尼基焦磷酸（farnesyl pyrophosphate， FPP）和香葉基香葉基焦磷酸，分別經(jīng)過法尼基蛋白轉(zhuǎn)移酶（farnesyl transferase， FT）和香葉基蛋白轉(zhuǎn)移酶I 和II 的催化修飾相應(yīng)蛋白的C 末端。 最新研究表明，類異戊二烯化合物產(chǎn)生和蛋白異戊二烯化修飾改變與多種疾病有關(guān)，包括心血管和腦血管疾病、癌癥、骨骼疾病、早衰和AD 等疾病[6]。 其中蛋白FPP修飾與AD 發(fā)病密切相關(guān)，有報(bào)道稱，AD 患者大腦中FPP 的水平顯著升高[7]。且FPP 可通過刺激γ-分泌酶促進(jìn)Aβ 的產(chǎn)生[8]。 同時(shí)，通過基因沉默技術(shù)或藥物抑制FT 活性可降低AD 模型小鼠Aβ 水平，從而改善其認(rèn)知功能[9]。 因此，F(xiàn)T 可能是AD 防治藥物的靶點(diǎn)之一。

當(dāng)歸芍藥散（Danggui Shaoyao San， DSS）由當(dāng)歸、芍藥、茯苓、白術(shù)、澤瀉、川芎6 味藥組成[10]，出自張仲景的《金匱要略》。大量研究發(fā)現(xiàn)DSS 具有神經(jīng)保護(hù)作用，且在預(yù)防和治療老年癡呆上具有很好的臨床療效，但具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。 本研究以APPswe/PS1ΔE9雙轉(zhuǎn)基因(APP/PS1)小鼠 為模型，探討DSS 對(duì)學(xué)習(xí)記憶能力、Aβ 表達(dá)及FT 水平的影響，為其開發(fā)和臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)APP/PS1 雙轉(zhuǎn)基因小鼠30 只，6 月 齡，體質(zhì)量（20±5） g，由北京華阜康生物科技有限公司提供，許可證號(hào)為SCXK（京）2014-0004；同月齡的C57BL/6 野生型小鼠10 只，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)為SCXK(湘）2015-0010，小鼠飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室；室內(nèi)溫度20～24 ℃，相對(duì)濕度35%～45%，室內(nèi)光線12 h 明暗交替，所有實(shí)驗(yàn)過程對(duì)動(dòng)物處置符合動(dòng)物倫理學(xué)要求。

1.2 藥品與試劑

1.2.1 實(shí)驗(yàn)藥品 DSS 根據(jù)《金匱要略》按當(dāng)歸（Angelica sinensis）、白芍（Cynanchum otophyllum）、茯苓（Wolfiporia cocos）、白術(shù)（Atractylodes macrocephala Koidz）、澤瀉（Alisma plantago-aquatica Linn）、川芎（Ligusticum chuanxiong Hort）6 味藥（3∶16∶4∶4∶8∶8）組方，所有藥材均購置于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科，并由藥劑科鑒定為正品；依據(jù)成人用量稱取當(dāng)歸芍藥散200 g，經(jīng)水煎法提取并濃縮冷凍備用[11]，調(diào)整至含生藥濃度2.0 g/mL。 通過高效液相色譜法檢查提取液中阿魏酸、芍藥苷和茯苓酸含量分別為127.6、6081.8、14.7 μg/g。

1.2.2 主要試劑 DNA 提取試劑盒（DP304，TIAN GEN 公司）；RNA 提取試劑盒（DP431，TIAN GEN公司）；引物由華大基因根據(jù)引物序列合成（見表1）；反轉(zhuǎn)錄cDNA 試劑盒（RR820L，日本TaKaRa 公司）；SYBR Premix Ex Taq II 染料（RR047A， 日本TaKaRa公司）；Aβ-6E10 鼠單克隆抗體（B247600）購自BioLegend 公 司；Alexa 488 標(biāo) 記 山 羊 抗 鼠IgG（H+L）（1562298，Molecular Probes）；通用二步法檢測試劑盒（PV9000，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；蛋白質(zhì)法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑FTI-277（F9803，Sigma-Aldrich 公司）。

1.3 主要儀器

多功能酶標(biāo)儀（美國BioTek 公司）；Real-time PCR系統(tǒng)（BIO-RAD 公司）；生物顯微鏡（Motic)；激光共聚焦顯微鏡（Nikon）；低溫高速離心機(jī)（Henle Labortechnik)；電腦生物包埋機(jī)（浙江金華科迪儀器設(shè)備有限公司）；石蠟切片機(jī)（HistoSTAT）。

1.4 方法

1.4.1 分組及給藥 將30 只APP/PS1 小鼠隨機(jī)分為藥物組、模型組和陽性藥物對(duì)照組，每組10 只；10只C57BL/6 野生型小鼠作為正常對(duì)照組。藥物組給予DSS 灌胃，給藥劑量依據(jù)成人臨床等效劑量，按以下公式計(jì)算：小鼠劑量（g/kg）=9.1×[成人劑量(g)/成人體質(zhì)量(70 kg)]，小鼠給藥量約為26 g/（kg·d），陽性藥物對(duì)照組給予腹腔注射法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑FTI-277，小鼠劑量為25 mg/（kg·d）[12]，每天中午11：00定時(shí)進(jìn)行灌胃給藥及陽性藥物腹腔注射，連續(xù)30 d；模型組和正常對(duì)照組小鼠均給予等量的生理鹽水灌胃。

1.4.2 水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測APP/PS1 小鼠學(xué)習(xí)記憶能力 給藥30 d 后，進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)，采用SMART 3.0 小鼠水迷宮視頻分析系統(tǒng)，水迷宮實(shí)驗(yàn)為6 d，前5 d 進(jìn)行定位航行實(shí)驗(yàn)，將小鼠頭朝池壁依次放入第一、二、三、四象限固定起始位置，其中第二象限為小鼠站臺(tái)所在的目標(biāo)象限，記錄小鼠60 s 內(nèi)找到隱蔽于水面下的站臺(tái)時(shí)間，此段時(shí)間稱為逃避潛伏期；第6 天除去站臺(tái)，選擇原站臺(tái)位置對(duì)角線象限將小鼠頭朝池壁放入水中，進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)。 空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)束2 h 后，將平臺(tái)露出水面以使小鼠能夠看見平臺(tái)，測試動(dòng)物的游泳能力和視力，校正前面兩部分的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，此為可視平臺(tái)實(shí)驗(yàn)。測試時(shí)室內(nèi)安靜，物品陳設(shè)、照明度一致。

1.4.3 動(dòng)物取材 最后一次給藥后2 h，給予10%水合氯醛腹腔注射麻醉，給予常規(guī)消毒，開胸，用預(yù)冷的PBS 經(jīng)心臟灌注，待血液完全排除后進(jìn)行斷頭，在冰板上進(jìn)行開顱取材。 取小鼠大腦組織，用刀片將其分為左右腦，右腦固定在4%的多聚甲醛中備用，取左腦在冰上分離大腦皮質(zhì)、海馬及其余腦3部分，液氮速凍后，放-80 ℃冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.4 石蠟切片 小鼠右腦組織固定于4%的多聚甲醛靜置48 h，依次經(jīng)75%、85%、95%、100%乙醇脫水，二甲苯透明劑透明，浸蠟，石蠟包埋。 切片，攤片至載玻片上后烤箱烘干備用。

1.4.5 免疫組化檢測腦內(nèi)海馬區(qū)Aβ 的水平 選備用的石蠟切片，各組10 只小鼠，每只選3 張切片，60 ℃恒溫箱中烤片5 h，放入二甲苯Ⅰ15 min、二甲苯Ⅱ15 min、100%乙醇3 min、95%乙醇3 min、85%乙醇3 min、75%乙醇3 min、流水1 次。 內(nèi)源性過氧化物酶阻斷后，將切片放入90%蟻酸處理5 min，PBS 洗3 次，每次5 min。 5%馬血清封閉10 min 后滴加Aβ 源單抗6E10（1∶500），4 ℃冰箱孵育過夜。 次日PBS 洗3 次，每次5 min；滴加生物素標(biāo)記的山羊抗鼠二抗（1∶1 000）常溫孵育1 h，PBS 洗3 次，每次2 min；滴加ABC 液常溫孵育20 min。 PBS 洗3 次，每次5 min，加DAB 顯色，顯微鏡下觀察顯色結(jié)果，自來水終止反應(yīng)；蘇木素復(fù)染：3 min，水洗；鹽酸乙醇分色，自來水中促藍(lán)；放入75%、85%、95%、100%乙醇各2 min 梯度脫水；二甲苯透明5 min，中性樹膠封片，常溫晾干。每張切片隨機(jī)選取4 個(gè)視野，在10 倍物鏡下采集圖像，使用ImageJ 8.0 分析圖像，測量累計(jì)光密度值IOD 和圖像面積（Area），用IOD/Area 所得平均光密度MOD 進(jìn)行下一步統(tǒng)計(jì)分析。

1.4.6 免疫熒光檢測腦內(nèi)海馬區(qū)Aβ 斑塊沉積數(shù)量 免疫熒光方法操作步驟基本同免疫組化，一抗使用β-淀粉樣蛋白鼠源單抗6E10（1∶500）于4 ℃孵育過夜， 二抗使用Alexa 488 熒光標(biāo)記山羊抗小鼠IgG（H+L）（1∶600）常溫孵育1 h，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片。每只動(dòng)物取3 張切片，每張切片在熒光顯微鏡下隨機(jī)選取4 個(gè)視野，在40 倍物鏡下采集圖像，使用ImageJ 8.0 分析圖像，計(jì)數(shù)腦內(nèi)海馬區(qū)Aβ 斑塊沉積數(shù)目（個(gè)/視野）。 取4 個(gè)視野的算術(shù)平均數(shù)，并計(jì)算各組均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.4.7 qPCR 檢測海馬組織FT 基因表達(dá)水平 使用Trizol 法提取海馬區(qū)組織總RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄cDNA試劑盒說明書將總RNA 逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。 使用伯樂公司CFX96 Real-time PCR 系統(tǒng)采用SYBR 染料法進(jìn)行Real-time PCR 檢測，qPCR 條件：變性（95 ℃，5 min），變性（95 ℃，15 s）——退火（58 ℃，15 s）進(jìn)行40 次循環(huán)，每次退火完成讀取熒光值，溶解曲線：65～95 ℃，所用引物序列見表1。 擴(kuò)增完成后，以2-△△Ct計(jì)算實(shí)驗(yàn)組目的基因相對(duì)于對(duì)照組目的基因的變化倍數(shù)。

表1 引物序列

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用Prism Graphpad 6.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析，計(jì)量資料“±s”表示，若各組數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布和方差齊性，采用單因素方差分析法，若數(shù)據(jù)不滿足正態(tài)性和方差齊性，采用Kruskal-Wall 檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DSS 對(duì)APP/PS1 小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

采用Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測各組小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，如圖1 所示。在5 d 的定位航行實(shí)驗(yàn)中，第1 天各組小鼠的潛伏期無差異，但隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加，平均潛伏期時(shí)間總體呈下降趨勢；從第2 天到第5 天實(shí)驗(yàn)的潛伏時(shí)間，模型組小鼠較正常對(duì)照組尋找平臺(tái)時(shí)間明顯延長（P＜0.05）；與模型組比較，DSS 治療后能顯著縮短APP/PS1 小鼠逃避潛伏期（P＜0.05），且陽性藥物也能顯著縮短小鼠逃避潛伏期，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（圖1A）。第6 天空間探索實(shí)驗(yàn)中，模型組較正常對(duì)照組穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少（P＜0.05），DSS 藥物組和陽性對(duì)照組均比模型組小鼠穿越平臺(tái)次數(shù)多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（圖1B）。 而可視平臺(tái)實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)各組動(dòng)物表現(xiàn)出相似的行為，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1C）。

2.2 DSS 對(duì)APP/PS1 小鼠海馬區(qū)Aβ 水平的影響

APP/PS1 小鼠大腦海馬區(qū)Aβ 聚集明顯，染色后呈現(xiàn)褐色團(tuán)塊狀淀粉樣斑塊沉積，在海馬區(qū)相同視野下，采用IOD/Area 所得平均光密度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 陽性對(duì)照組和藥物組小鼠大腦海馬區(qū)Aβ 聚集較模型組明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。正常對(duì)照組小鼠未出現(xiàn)Aβ 聚集。 見表2 和圖2。

2.3 DSS 對(duì)APP/PS1 小鼠海馬區(qū)Aβ 斑塊沉積數(shù)量的影響

老年斑主要由Aβ 構(gòu)成，且具有神經(jīng)毒性，其形狀和大小不同。免疫熒光標(biāo)記Aβ 斑塊結(jié)果顯示，模型組小鼠海馬區(qū)出現(xiàn)大量的Aβ 斑塊聚集，且散在分布。 陽性對(duì)照組與藥物組老年斑形成數(shù)量顯著低于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3 和圖3。

圖1 Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 當(dāng)歸芍藥散對(duì)APP/PS1 小鼠腦內(nèi)海馬區(qū)Aβ 水平的影響（±s，n=10)

表2 當(dāng)歸芍藥散對(duì)APP/PS1 小鼠腦內(nèi)海馬區(qū)Aβ 水平的影響（±s，n=10)

注：與模型組比較，*P＜0.05

組別正常對(duì)照組模型組藥物組陽性對(duì)照組Aβ 水平（MOD）0 0.45±0.06 0.25±0.11*0.14±0.03*

圖2 各組小鼠腦內(nèi)海馬區(qū)Aβ 水平免疫組化檢測代表性圖（IHC，×40）

表3 當(dāng)歸芍藥散對(duì)APP/PS1 轉(zhuǎn)基因鼠腦內(nèi)海馬區(qū)老年斑形成的影響（±s，n=10)

表3 當(dāng)歸芍藥散對(duì)APP/PS1 轉(zhuǎn)基因鼠腦內(nèi)海馬區(qū)老年斑形成的影響（±s，n=10)

注：與模型組比較，*P＜0.05

組別正常對(duì)照組模型組藥物組陽性對(duì)照組老年斑數(shù)量/個(gè)0 25.16±1.87 14.42±1.35*6.13±0.76*

圖3 各組小鼠腦內(nèi)海馬區(qū)Aβ 斑塊沉積免疫熒光檢測代表性圖

2.4 DSS 對(duì)APP/PS1 小鼠海馬區(qū)FT mRNA 水平的影響

qPCR 檢測海馬組織FT mRNA 表達(dá)結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組海馬組織的FT mRNA水平明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，藥物組與陽性對(duì)照組海馬組織的FT mRNA水平明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見圖4。

圖4 qPCR 檢測各組小鼠海馬組織FT mRNA表達(dá)水平

3 討論

AD 是癡呆性疾病中最常見的一大類，是一種隱性起病、進(jìn)行性發(fā)展的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，表現(xiàn)為智力、記憶和人格的全面損害。 AD 的病理特征包括細(xì)胞外Aβ 沉積形成老年斑、細(xì)胞內(nèi)tau 蛋白過度磷酸化引發(fā)神經(jīng)原纖維纏結(jié)（neurofibrillary tangles， NTF）及突觸丟失、神經(jīng)炎癥、神經(jīng)細(xì)胞死亡[13]。AD 的發(fā)病機(jī)制尚未明確，而Aβ 的級(jí)聯(lián)反應(yīng)假說是對(duì)AD 發(fā)病機(jī)理的重要詮釋[14]。 但目前尚未研發(fā)出明確有效的干預(yù)治療藥物，因此，有效藥物的開發(fā)對(duì)AD的防治具有重大臨床意義。

AD 屬中醫(yī)學(xué)“老年呆證”“文癡”“善忘”“癲證”“郁證”等范疇[15]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，老年癡呆的病位在腦，且與心肝脾腎諸臟虛損有密切聯(lián)系，但與肝聯(lián)系尤為密切[16]。古人認(rèn)為肝為五臟之賊，若肝血不足，母病及子則易致心血虧虛；若肝陰不足，子病及母則易致腎陰虧損，肝主疏泄能調(diào)暢脾胃氣機(jī)，與血和津液的運(yùn)行密切相關(guān)。水液代謝與血液運(yùn)行失調(diào)所產(chǎn)生的痰飲瘀血是老年癡呆常見的致病因素[17]。因此，我們認(rèn)為治肝為防治老年癡呆的第一要?jiǎng)?wù)。DSS 載于漢代張仲景《金匱要略》，由當(dāng)歸、白芍、茯苓、白術(shù)、澤瀉、川芎6 味藥組成，全方補(bǔ)瀉兼施，瀉中寓補(bǔ)，肝脾同調(diào)，血水并治。歷代醫(yī)家認(rèn)為該方具有養(yǎng)血柔肝、健脾利濕等功效。 中醫(yī)主治肝脾失調(diào)、氣血郁阻證[18]。該方的特點(diǎn)為“調(diào)和肝脾，血水同治”，除了用于婦人腹痛外，臨床上廣泛應(yīng)用于其它疾病治療，如神經(jīng)系統(tǒng)疾病、消化系統(tǒng)疾病、心血管疾病、皮膚病等，且療效顯著[19]。近年來，隨著學(xué)者們對(duì)DSS的研究不斷深入，發(fā)現(xiàn)DSS 具有很好的神經(jīng)保護(hù)作用，能有效減少Aβ 的沉積[20]、突觸損傷[21]，且在預(yù)防和治療老年癡呆上取得了較好的臨床療效，被認(rèn)為是最適合用于防治AD 的經(jīng)方之一[22]。 前期研究表明，DSS 能通過抗神經(jīng)元細(xì)胞凋亡、抗炎來改善AD 的作用[23]。 同時(shí)DSS 能改善AD 模型鼠的學(xué)習(xí)記憶能力[24]。

本研究采用APP/PS1 小鼠為模型，該模型是AD病理改變比較成熟的模型之一[25]。 目前，AD 病因?qū)W的主要假設(shè)，診斷AD 的神經(jīng)病理學(xué)指南以及大多數(shù)引人注目的治療方法均是圍繞Aβ 建立的[26]。 Aβ導(dǎo)致老年斑形成、NFT、神經(jīng)細(xì)胞凋亡，且對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)具有毒性，損傷患者記憶力，從而導(dǎo)致AD 的發(fā)生。本研究采用Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測APP/PS1 模型小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力，結(jié)果顯示該模型鼠學(xué)習(xí)記憶能力受損。DSS 藥物干預(yù)能縮短APP/PS1 小鼠逃避潛伏期和增加站臺(tái)穿越次數(shù)，提示DSS 能改善AD 小鼠的認(rèn)知功能。 同時(shí)，通過可視平臺(tái)實(shí)驗(yàn)校正實(shí)驗(yàn)各組小鼠的游泳能力與視力差異，證實(shí)了DSS 改善AD 模型鼠認(rèn)知功能結(jié)果的可靠性。而Aβ 是AD 發(fā)病的中心環(huán)節(jié)[27]，減少Aβ 的產(chǎn)生和增強(qiáng)Aβ 的清除是防治AD 的重要靶點(diǎn)。 免疫組化檢測結(jié)果顯示DSS 干預(yù)能降低APP/PS1 小鼠腦內(nèi)海馬區(qū)Aβ 水平；免疫熒光也進(jìn)一步表明它能減少腦內(nèi)海馬區(qū)老年斑的形成，提示DSS 能通過降低Aβ 水平有效改善AD 的認(rèn)知功能，與其他學(xué)者研究結(jié)果一致[19-23]。

最新研究表明，異戊二烯化過程和APP/Aβ 代謝之間的聯(lián)系存在相互性。異戊二烯化修飾蛋白在AD 的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要的作用，調(diào)節(jié)蛋白異戊二烯化水平能影響APP/Aβ 代謝[28]、tau 蛋白磷酸化[29]、神經(jīng)炎癥[30]、氧化應(yīng)激[31]以及突觸認(rèn)知功能[32]等方面。 AD 患者腦內(nèi)異戊二烯化修飾蛋白含量明顯升高，而且蛋白法尼基化水平影響APP 的加工以及Aβ 的產(chǎn)生和分泌[33]。 同時(shí)，AD 病理產(chǎn)物Aβ 和其他APP 裂解產(chǎn)物（如AICD）能直接調(diào)節(jié)甲羥戊酸途徑相關(guān)酶的活性，導(dǎo)致類異戊二烯化合物水平的改變影響異戊二烯化過程[6]。 最新研究表明，AD 患者腦內(nèi)類異戊二烯中間產(chǎn)物FPP 水平顯著升高，提示AD 患者腦內(nèi)整體法尼基修飾水平已發(fā)生改變[34]。本課題組前期研究結(jié)果表明，AD 模型小鼠中FT 的基因雜合缺失，可以減輕其神經(jīng)病理損害和改善其空間學(xué)習(xí)與記憶功能[9]。 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用FT 特異性抑制劑干預(yù)，也能改善APP/PS1 小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能和降低海馬區(qū)域Aβ 水平，與前期結(jié)果一致。同時(shí)，DSS干預(yù)能降低APP/PS1 模型小鼠海馬組織FT 的基因表達(dá)水平，提示DSS 可能通過影響蛋白法尼基修飾水平，降低Aβ 生成，改善認(rèn)知功能。

綜上所述，DSS 能改善APP/PS1 模型小鼠的認(rèn)知功能和減輕其病理損傷，可能與調(diào)節(jié)蛋白FPP 修飾水平有關(guān)，但其具體作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。