包文強(qiáng)，國(guó) 軍，包文林，依德力滾，王青虎

(內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，通遼 028000)

蒙古蒿[Artemisiamongolica(Fisch.ex Bess.)Nakai]系菊科蒿屬雙子葉植物蒙古蒿的地上部分，具有散瘀消腫、祛風(fēng)散寒等功效，主治皮膚濕瘡、疥癬、濕瘡瘙癢[1]。蒙古蒿主要分布于我國(guó)內(nèi)蒙古、東北等地區(qū)，朝鮮、日本、蒙古和俄羅斯也有分布[2]。目前，對(duì)于產(chǎn)于青海、山東、河南等地區(qū)的蒙古蒿揮發(fā)油化學(xué)成分[1,3,4]及其生物活性方面[2,5-9]有一些研究報(bào)道，但內(nèi)蒙古境內(nèi)蒙古蒿揮發(fā)油提取工藝尚未見到報(bào)道。課題組前期預(yù)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)蒙古蒿揮發(fā)油對(duì)青春痘的病因-痤瘡丙酸桿菌具有良好的抑菌作用。為了確保蒙古蒿揮發(fā)油后期相關(guān)研究的重現(xiàn)性及穩(wěn)定性，并將其應(yīng)用于化妝品中，本文采用單因素和多因素試驗(yàn)優(yōu)化蒙古蒿揮發(fā)油提取影響因素，建立其最佳提取工藝。

1 實(shí)驗(yàn)用品

KDM型調(diào)溫電熱套(山東鄄城華魯電熱儀器有限公司)；AE240電子天平(梅特勒-托利多儀器公司)；揮發(fā)油提取器(天津市德固特科技發(fā)展有限公司)。蒙古蒿[Artemisiamongolica(Fisch.ex Bess.)Nakai]于2018年7月25日采集于內(nèi)蒙古科左后旗，經(jīng)布和巴特爾教授鑒定為菊科蒿屬植物蒙古蒿的地上部分。

2 方法與結(jié)果

2.1 單因素試驗(yàn)

2.1.1粉末大小考察

將藥材處理成切段、粗粉、中粉、細(xì)粉等不同粉末大小，以揮發(fā)油取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，稱取各粉末500g，加水量為8倍，浸泡時(shí)間為2.0h。按照《中國(guó)藥典》揮發(fā)油提取項(xiàng)下操作，提取6h后記錄揮發(fā)油的得率，結(jié)果見圖1。

2.1.2浸泡時(shí)間考察

稱取蒙古蒿中粉500g，按浸泡時(shí)間1.0、2.0、3.0和4.0h為單因素考察水平，加水量為8倍，按照《中國(guó)藥典》揮發(fā)油提取項(xiàng)下操作，提取6h后記錄揮發(fā)油的得率，結(jié)果見圖2。

2.1.3溶劑量考察

稱取蒙古蒿中粉500g，按加水量為4、6、8和10倍為單因素考察水平，浸泡時(shí)間2h，按照《中國(guó)藥典》揮發(fā)油提取項(xiàng)下操作，提取6h后記錄揮發(fā)油的得率，結(jié)果見圖3。

2.1.4提取時(shí)間考察

稱取蒙古蒿中粉500g，加水量為8倍，浸泡時(shí)間2h，按照《中國(guó)藥典》揮發(fā)油提取項(xiàng)下，按2.0、4.0、6.0和8.0h等時(shí)間段提取，記錄揮發(fā)油的得率，結(jié)果見圖4。

2.2 多因素試驗(yàn)

2.2.1因素水平設(shè)計(jì)

按照單因素考察結(jié)果，選定浸泡時(shí)間、溶劑量和提取時(shí)間為3個(gè)因素，每因素設(shè)定3個(gè)水平，因素水平表見表1。

表1 因素水平表

2.2.2多因素試驗(yàn)結(jié)果

稱取蒙古蒿中粉500g，按照多因素設(shè)計(jì)表2中條件,加溶劑、浸泡、提取，記錄揮發(fā)油得率，試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 多因素正交試驗(yàn)結(jié)果

2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

為了證實(shí)蒙古蒿揮發(fā)油提取工藝的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，在多因素試驗(yàn)優(yōu)化的最佳提取工藝項(xiàng)下，對(duì)5批藥材中粉進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見圖5。

3 討論

本文首先對(duì)藥材粉末大小、浸泡時(shí)間、溶劑量及提取時(shí)間等揮發(fā)油提取影響因素進(jìn)行考察，然后用多因素試驗(yàn)優(yōu)化其提取工藝。從單因素試驗(yàn)結(jié)果(圖1-4)可知，藥材粉末大小對(duì)揮發(fā)油提取影響比較大。提取時(shí)間、浸泡時(shí)間和溶劑量等因素不變條件下，不同藥材粉末(切段、粗粉、中粉、細(xì)粉)的揮發(fā)油得率分別為0.30±0.02、0.34±0.02、1.20±0.06和0.86±0.04。從上面數(shù)據(jù)可以看出，中粉得率高于其它，其原因可能是粉末越大時(shí)，揮發(fā)油從植物細(xì)胞中不易提取；而粉末越細(xì)時(shí)，揮發(fā)油實(shí)驗(yàn)過程中揮發(fā)一部分?？紤]到藥材粉末大小對(duì)揮發(fā)油提取的不規(guī)律性影響，多因素試驗(yàn)中藥材粉末選定為中粉。其它因素對(duì)揮發(fā)油提取具有一定的規(guī)律性，如：浸泡時(shí)間為2h，溶劑量為8倍、提取時(shí)間為6h以后，揮發(fā)油得率基本不變。

從多因素試驗(yàn)結(jié)果(表2)可知，3個(gè)因素(A、B、C)的極差(R)分別為0.200、0.333和0.333。極差值大小說明因素B和C對(duì)揮發(fā)油提取影響相同，并大于因素A。對(duì)多因素試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析可知，3個(gè)因素對(duì)揮發(fā)油提取的影響無顯著性差異，與極差分析基本一致。對(duì)多因素試驗(yàn)結(jié)果的直觀分析得知，蒙古蒿揮發(fā)油提取的最佳工藝條件為A1B1C3，即浸泡時(shí)間為1h、溶劑量為6倍和提取為8h。從驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果(圖5)得知，5批樣品中揮發(fā)油得率變化為1.40-1.44ml，這說明本實(shí)驗(yàn)所建立的蒙古蒿揮發(fā)油提取工藝具備了一定的穩(wěn)定性好和重現(xiàn)性。

總之，本文通過單因素和多因素試驗(yàn)確定了蒙古蒿揮發(fā)油提取的最佳工藝，工藝簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、準(zhǔn)確，為蒙古蒿揮發(fā)油的后期研究及其在化妝品行業(yè)中開發(fā)利用奠定了可靠基礎(chǔ)。