湯永蓉 陳 彬

（寶應(yīng)縣畜牧獸醫(yī)站，江蘇揚(yáng)州 225800）

0 引言

豬傳染性胃腸炎是由豬傳染性胃腸炎病毒引起的一種急性、高度接觸性腸道傳染病，臨床上以發(fā)熱、嚴(yán)重嘔吐、劇烈腹瀉和高度脫水為特征，各個(gè)年齡的豬都可感。冬春寒冷季節(jié)易多發(fā)，因其潛伏期很短，一般12～18h，有的為1～8d，多數(shù)病例2～4d，發(fā)病較為突然，傳播迅速，數(shù)日內(nèi)可蔓延至全群，是嚴(yán)重危害豬群的原發(fā)性疾病之一，嚴(yán)重制約了規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。目前，對(duì)該病還沒(méi)有特效的治療藥物，疫苗免疫是預(yù)防該病的最安全、最有效的手段，也能使豬群獲得很好的抗體免疫效果，并且無(wú)副作用。

為了驗(yàn)證豬傳染性胃腸炎疫苗對(duì)生豬的安全性和免疫效果，此次選擇了本地4家規(guī)模豬場(chǎng)，開(kāi)展豬傳染性胃腸炎疫苗抗體試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果證明，豬傳染性胃腸炎疫苗的免疫效果較好，隨后在基層范圍內(nèi)進(jìn)行推廣應(yīng)用，均取得了好評(píng)。

1 試驗(yàn)原理

試劑盒系由預(yù)包被豬傳染性胃腸炎病毒重組N蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)豬血清、血漿樣本中豬傳染性胃腸炎病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬傳染性胃腸炎病毒抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬傳染性胃腸炎病毒抗體。

2 試驗(yàn)材料與方法

2.1 材料

2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 用于試驗(yàn)觀察疫苗免疫安全性和免疫效果測(cè)定的4個(gè)豬群分別由寶應(yīng)縣欣宇禽畜產(chǎn)銷專業(yè)合作社、揚(yáng)州市瀛寶農(nóng)牧科技發(fā)展有限公司、寶應(yīng)縣華盛生態(tài)生豬養(yǎng)殖場(chǎng)、寶應(yīng)縣正旺畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)4個(gè)示范基地提供的母豬群50頭、100頭、50頭、80頭。所選擇的豬群均為豬傳染性胃腸炎疫苗非免疫豬群，健康、生長(zhǎng)良好，被檢血清樣品共314份。

2.1.2 檢測(cè)試劑 豬病毒性胃腸炎抗體Elisa試劑盒（規(guī)格480T/盒，西班牙Ingenasa，由南京華恩生物科技科技有限公司提供）。

2.1.3 主要儀器設(shè)備 酶標(biāo)分析儀、離心機(jī)、采血器、可調(diào)微量移液器、一次性吸頭、去離子水、恒溫箱。

2.1.4 試驗(yàn)用疫苗 豬傳染性胃腸炎疫苗（上海海利生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)），批準(zhǔn)文號(hào)：獸藥生字（2016）090201097。

2.2 試驗(yàn)方法

2.2.1 疫苗接種 將試驗(yàn)疫苗用生理鹽水稀釋為含1頭份/ml，后海穴注射1ml。

2.2.2 采血 第1、2、3、4豬群疫苗免疫前及免疫后7、14、30d各采血1次。豬前腔靜脈采血，3～4ml/頭，分離血清，冷藏或冷凍備用。

2.2.3 抗體效價(jià)測(cè)定 按照“豬傳染性胃腸炎診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)”（NYT548-2002）試驗(yàn)操作進(jìn)行，使用酶標(biāo)分析儀，當(dāng)樣品A450值大于臨界值，判為陽(yáng)性；當(dāng)樣品A450值小于臨界值，判為陰性。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 安全性試驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)注射疫苗后，對(duì)試驗(yàn)豬群進(jìn)行連續(xù)觀察2周（精神狀態(tài)、采食量、糞便、尿液以及豬群的發(fā)病死亡率），按照說(shuō)明注射劑量注射的4個(gè)試驗(yàn)豬群均無(wú)異常情況發(fā)生，表明疫苗對(duì)豬群免疫是安全的，而且疫苗引起的副反應(yīng)較小。

3.2 免疫效果測(cè)定結(jié)果

免疫前及免疫后抗體陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)表

通過(guò)免疫、監(jiān)測(cè)、消毒等防控措施的落實(shí)，根據(jù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，制作了抗體陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)表。由上表可見(jiàn)，免疫后抗體上升的較快，7d抗體平均合格率達(dá)80%以上，監(jiān)測(cè)到免疫后30d，抗體平均合格率達(dá)到90%以上。

4 小結(jié)與討論

（1）試驗(yàn)結(jié)果表明，在免疫7d后抗體上升的較快，維持的時(shí)間也長(zhǎng)，同時(shí)取得了很好的免疫效果，起到了有效的保護(hù)作用。

（2）豬場(chǎng)不能完全依賴疫苗，更加不能抱有僥幸心理不免疫，應(yīng)該結(jié)合實(shí)際情況，建立符合自身完善的免疫監(jiān)測(cè)制度，制定科學(xué)的免疫程序，合理的飼養(yǎng)管理模式。豬傳染性胃腸炎的免疫效果及發(fā)病情況與飼養(yǎng)管理的好壞密切相關(guān)，只有在良好的環(huán)境控制下，才能真正發(fā)揮疫苗的免疫保護(hù)作用。養(yǎng)殖密度小、飼養(yǎng)環(huán)境優(yōu)良、免疫措施到位、生物安全措施管控嚴(yán)格的豬場(chǎng)，豬傳染性胃腸炎的免疫效果相對(duì)較好，豬傳染性胃腸炎感染與流行的機(jī)率也相應(yīng)減小。

（3）本次免疫試驗(yàn)的4個(gè)豬群均未出現(xiàn)免疫副反應(yīng)，說(shuō)明豬傳染性胃腸炎疫苗安全性高、副反應(yīng)小，在我縣基層推廣具有可行性。