□ 楊珍燕 曾丹丹 湛江市食品藥品檢驗(yàn)所

近年來，隨著人們對(duì)食品安全問題越來越重視，農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)殘的檢測任務(wù)也越來越重。有機(jī)磷農(nóng)藥作為一種高效、廣譜的殺蟲劑被廣泛運(yùn)用于農(nóng)產(chǎn)品的種植過程中，如何更高效且準(zhǔn)確的對(duì)大批量的農(nóng)產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)殘進(jìn)行檢測成為亟需解決的問題[1]。本文參考NY/T761-2008中第一部分方法二果蔬中有機(jī)磷農(nóng)殘檢測方法[2]，把花椰菜作為空白基底，采用改進(jìn)后的前處理方法，通過氣相色譜儀檢測[3]可同時(shí)測定花椰菜中敵敵畏等12種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留。該方法效率高、回收率高、有機(jī)試劑使用量小，適用于測定大批量樣品的有機(jī)磷農(nóng)殘項(xiàng)目。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

乙腈、乙酸乙酯（均為色譜純；無水硫酸鈉、氯化鈉（均為分析純，使用前用馬弗爐在650 ℃灼燒4 h）；濃度均是100 μg/mL的敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷等12種有機(jī)磷單一標(biāo)準(zhǔn)溶液，購自北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司。

配有FPD火焰光度檢測器的GC-2010PLUS氣相色譜儀（SHIMADZU公司）；DTF-A300電子天平（福州志華科學(xué)儀器有限公司）；Centrisartg-16C高速冷凍離心機(jī)（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；Auto EVA-20 plus氮吹儀（?？苾x器有限公司）；破壁料理機(jī)（美的）；全自動(dòng)漩渦振蕩器（德國heidolph公司）；QuEChERS分散試劑盒（美國Agilent公司）。

1.2 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

1.2.1 配制標(biāo)準(zhǔn)混合儲(chǔ)備液

規(guī)格為10 mL的玻璃容量瓶中先加入少量乙酸乙酯，再準(zhǔn)確移取12種有機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)溶液各0.50 mL加入其中，最后用乙酸乙酯定容到10.0 mL，配制成有機(jī)磷混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，濃度為5.0 μg/mL，于-18 ℃冰箱貯存，有效期為3個(gè)月。

1.2.2 配制純?nèi)軇?biāo)準(zhǔn)工作液

臨用時(shí)把有機(jī)磷混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 分 別 稀 釋 成 0.02、0.05、0.10、0.20 μg/mL和0.50 μg/mL 共 5 個(gè)濃度梯度的純?nèi)軇┗旌蠘?biāo)準(zhǔn)工作液，用乙酸乙酯定容。

1.2.3 配制基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作液

將陰性花椰菜樣品按照1.3的步驟進(jìn)行提取凈化后氮吹至近干，用1.2.2中的標(biāo)準(zhǔn)工作液復(fù)溶，配制成5個(gè)濃度梯度的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作液，濃度分別是0.02、0.05、0.10、0.20 μg/mL和 0.50 μg/mL。

1.3 樣品的前處理方法

用破壁機(jī)攪碎花椰菜樣品，稱取5 g（精確至0.01 g）花椰菜于50 mL塑料離心管中，準(zhǔn)確移取10.0 mL乙腈加入離心管中，用全自動(dòng)旋渦振蕩器提取5 min，然后加入2.0 g氯化鈉進(jìn)行鹽析分層，振蕩1 min，離心5 min（5 000 r/min），取出上層清液待凈化。

取約2 mL上述上清液至10 mL離心管中，此離心管已預(yù)先加入QuEChERS分散試劑盒吸附劑（含有150.0 mg無水硫酸鎂，50.0 mg乙二胺-N-丙基硅烷（PSA），50.0 mg C18，7.5 mg石墨炭黑（GCB）漩渦振蕩2 min，5 000 r/min離心 2 min，再精確移取1.0 mL上層清液于5 mL玻璃氮吹小管中，氮吹至近干，用乙酸乙酯定容至0.5 mL，移入進(jìn)樣小瓶中，按1.4條件上機(jī)檢測。

1.4 色譜條件

色譜柱：規(guī)格為30 m×0.32 mm×0.25 μm的DB-17毛細(xì)管色譜柱；汽化室溫度：230 ℃；色譜柱升溫程序：初始溫度60 ℃保持2 min，25 ℃/min升到200 ℃，再以5 ℃/min升到255 ℃保持5 min；FPD檢測器溫度：280 ℃；載氣是高純氮?dú)?，純度?9.999%；吹掃流量為5.0 mL/min；高純氫氣，純度≥99.999%，流量為60.0 mL/min；干燥空氣流量為90.0 mL/min；進(jìn)樣量：1.0 μL；進(jìn)樣模式：不分流。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取試劑的選擇

大部分有機(jī)磷農(nóng)藥具有中等極性或弱極性，依據(jù)相似相溶原理，可以選擇乙腈、丙酮、石油醚等作為提取溶劑[4]。由于丙酮毒性較高，沸點(diǎn)低易揮發(fā)，除雜能力較弱。石油醚具有麻醉效果，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作者存在一定的安全風(fēng)險(xiǎn)。而乙腈具有極性強(qiáng)、溶解能力強(qiáng)、提取雜質(zhì)較少的優(yōu)點(diǎn)，所以相比之下，選擇乙腈作為提取溶劑較為合適。

2.2 提取方式的選擇

本方法用破壁機(jī)攪碎樣品，加入乙腈提取液后電動(dòng)振蕩處理，代替NY/T761-2008中的勻漿機(jī)處理樣品。因?yàn)閯驖{法每次只能處理單個(gè)樣品，提取效率低。而采用可以同時(shí)振蕩20個(gè)樣品的電動(dòng)振蕩機(jī)則更適合處理大批量樣品。而且破壁機(jī)可以破除蔬菜樣品的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，使殘留的有機(jī)磷農(nóng)殘更充分的被乙腈提取出來[5]。

2.3 凈化條件的選擇

QuEChERS吸附劑凈化法[6-8]被越來越廣泛用于有機(jī)磷農(nóng)殘的前處理過程中，本試驗(yàn)選擇的QuEChERS分散試劑盒的吸附劑粉末由乙二胺-N-丙基硅烷（PSA），C18，石墨炭黑（GCB），無水硫酸鎂混合組成。PSA可去除碳水化合物、脂肪酸、有機(jī)酸、酚類等雜質(zhì)，C18可以有效去除脂類大分子物質(zhì)，GCB的作用是去除色素，無水硫酸鎂是除水劑。與傳統(tǒng)樣品凈化方法相比較，本方法消耗試劑少、污染少、操作簡便、分析速度快，乙腈加到離心管后立即密封，減少試驗(yàn)人員與有機(jī)試劑的接觸，適用于大批量樣品高效檢測。

2.4 方法的線性范圍及檢出限

為了更好地補(bǔ)償有機(jī)磷農(nóng)藥基質(zhì)效應(yīng)[9-10]，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液來建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。將空白陰性花椰菜作為基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的基質(zhì)，配制成1.2.3的5個(gè)濃度梯度的基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)液，按1.4條件進(jìn)行氣相色譜分析，以保留時(shí)間定性，峰面積定量，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中X軸為質(zhì)量濃度，Y軸為峰面積。12種有機(jī)磷農(nóng)藥的線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)R2見表1。

表1 12種有機(jī)磷農(nóng)藥的線性回歸方程

由表1知，12種有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)曲線曲相關(guān)系數(shù)（R2）都達(dá)到0.995 7以上，在0.02～0.50 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系較好。根據(jù)公式方法檢出限（LOD）=3倍信噪比（S/N=3），得到12種有機(jī)磷農(nóng)藥的LOD都是0.01 mg/kg，滿足GB/T 27404-2008的技術(shù)要求[11]?；ㄒ嘶|(zhì)匹配有機(jī)磷混標(biāo)色譜圖見圖1。

圖1 12種有機(jī)磷混標(biāo)色譜圖

2.5 方法精密度及加標(biāo)回收率

對(duì)花椰菜陰性樣品進(jìn)行低、中、高3個(gè)加標(biāo)，加標(biāo)濃度分別為0.02、0.10、0.20 mg/kg，每個(gè)濃度制備6個(gè)平行樣品，上機(jī)檢測后計(jì)算加標(biāo)回收率及精密度。12種有機(jī)磷農(nóng)藥的平均加標(biāo)回收率為80.7%～95.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為4.8%～9.3%（見表 2）。

表2 12種有機(jī)磷農(nóng)藥的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）

3 結(jié)論

本研究改進(jìn)了NY/T761-2008中第一部分方法二的前處理方法，縮減了稱樣量，節(jié)省了有機(jī)提取試劑的使用量。用破壁機(jī)代替普通攪拌機(jī)攪碎樣品，能使?jié)B入組織細(xì)胞內(nèi)的農(nóng)殘?jiān)谔崛r(shí)更充分地釋放出來，提高了提取率。改用電動(dòng)振蕩法替代勻漿法進(jìn)行提取，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)樣品的提取操作，提高了工作效率。QuEChERS吸附劑凈化法進(jìn)行凈化，凈化效果好，除雜能力強(qiáng)。綜上所述，該方法操作更簡單、快速、節(jié)省提取溶液、人力和時(shí)間，加標(biāo)回收率結(jié)果理想，對(duì)于大批量檢測具有較強(qiáng)的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。