魏 蕾

（山東省血液中心，山東 濟(jì)南 250014）

近年來，隨著我國醫(yī)學(xué)系統(tǒng)的不斷完善，我國血液中心的血液調(diào)配系統(tǒng)也得到了有效完善，但是由于最近幾年我國醫(yī)療用血量的不斷增加，導(dǎo)致在供血、調(diào)配血液時(shí)容易發(fā)生季節(jié)性、區(qū)域性等血荒情況，尤其是在存儲(chǔ)血液時(shí)，血液保存時(shí)間的改變可導(dǎo)致白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞的質(zhì)量發(fā)生變化[1]。為了提高血液的保存效率，在制備樣本過程中，應(yīng)盡可能將血液成分的庫存時(shí)間延長。懸浮紅細(xì)胞在臨床中屬于紅細(xì)胞制劑的范疇，目前懸浮紅細(xì)胞已經(jīng)在臨床中被廣泛應(yīng)用。庫存去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞制劑能夠?yàn)榕R床患者進(jìn)行紅細(xì)胞的有效補(bǔ)充，促進(jìn)患者循環(huán)血量的有效增加，并促進(jìn)患者血液攜氧能力的進(jìn)一步提高。但庫存去白懸浮紅細(xì)胞的質(zhì)量會(huì)因?yàn)楸４鏁r(shí)間的不同而發(fā)生變化[2]。為了探討保存時(shí)間與庫存去白懸浮紅細(xì)胞質(zhì)量的關(guān)系，本研究旨在分析庫存去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞在不同保存時(shí)間下，對其血液指標(biāo)變化的影響。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 在2020年2月至2020年4月這一時(shí)間段來實(shí)施研究，研究樣本從醫(yī)院庫存去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞制品中抽取，共抽取80袋。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①全部樣本均將CPDA-1作為保養(yǎng)液成分；②全部樣本在取樣過程中均運(yùn)用無菌接駁機(jī)；③全部樣本均檢測合格。排除標(biāo)準(zhǔn)：①樣本存在風(fēng)險(xiǎn)；②樣本未進(jìn)行相關(guān)檢測；③樣本取樣過程中存在不規(guī)范操作。

1.3 方法 ①借助一次性普通四聯(lián)血袋開展ACD-B抗凝全血的收集，共需收集80袋血樣，每袋血樣容量為200 mL，收集完成后，醫(yī)護(hù)人員將血袋放置在（4±2）℃冰箱中進(jìn)行過夜處理。②在第2天對血樣進(jìn)行離心處理，離心時(shí)間設(shè)置為10 min，離心速度為3000 r/min，將離心后的上層血漿完全去除，通過MAP的增加來進(jìn)行懸浮紅細(xì)胞的制備。③在（4±2）℃的條件下，根據(jù)去白細(xì)胞濾器血袋規(guī)程開展相關(guān)過濾操作，過濾完成后可獲得去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞。④去白懸浮紅細(xì)胞制作完成后，對其進(jìn)行保存。醫(yī)護(hù)人員選擇0、7、14、21、28、35 d這6個(gè)時(shí)間點(diǎn)，對血樣進(jìn)行有效的血細(xì)胞計(jì)數(shù)、2，3-二磷酸甘油酸（2，3-DPG）、電解質(zhì)、葡萄糖、游離血紅蛋白（FHb）、人紅細(xì)胞膜蛋白（EMP）與人三磷酸腺苷（ATP）等指標(biāo)的檢測。采用血細(xì)胞分析儀 （日本廣電，MEK-7222K型）進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)指標(biāo)的有效檢測，采用電解質(zhì)分析儀 （國產(chǎn)奧迪康A(chǔ)C9802型）進(jìn)行Cl-、pH、Na+、K+電解質(zhì)的有效檢測，采用全自動(dòng)生化分析儀 （日本Sysmex公司，Sysmex-800型）進(jìn)行葡萄糖的有效檢測，采用分光光度法對游離血紅蛋白進(jìn)行有效檢測，采用ELISA法對2，3-DPG、ATP及EMP等指標(biāo)的有效檢測。

1.4 觀察指標(biāo) 本研究主要觀察樣本在保存了0、7、14、21、28、35 d后的血細(xì)胞計(jì)數(shù)、2，3-DPG、電解質(zhì)、葡萄糖、FHb、EMP與ATP等指標(biāo)的情況。其中血細(xì)胞計(jì)數(shù)指標(biāo)中包含有MCV、Hct、WBC、Hb與RBC，電解質(zhì)指標(biāo)包含有Cl-、Na+、K+、pH。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0軟件分析上述指標(biāo)，上述所有指標(biāo)采用t檢驗(yàn)，并以（）表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察血細(xì)胞計(jì)數(shù)指標(biāo)在不同保存時(shí)間的情況 MCV、Hct、WBC、Hb與RBC在保存7、14、21、28、35 d的數(shù)值，與保存0 d的數(shù)值比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 觀察電解質(zhì)指標(biāo)在不同保存時(shí)間的情況 樣本中Cl-、Na+、pH隨保存時(shí)間的延長而下降，K+隨保存時(shí)間的延長而上升。見表2。

2.3 觀察FHb、葡萄糖、ATP、EMP與2，3-DPG在不同保存時(shí)間的情況 FHb與EMP隨著保存時(shí)間延長而提高，葡萄糖與2，3-DPG隨著保存時(shí)間延長而降低，ATP無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。

表1 觀察血細(xì)胞計(jì)數(shù)指標(biāo)在不同保存時(shí)間的情況（）

表1 觀察血細(xì)胞計(jì)數(shù)指標(biāo)在不同保存時(shí)間的情況（）

表2 觀察電解質(zhì)指標(biāo)在不同保存時(shí)間的情況（）

表2 觀察電解質(zhì)指標(biāo)在不同保存時(shí)間的情況（）

表3 觀察FHb、葡萄糖、ATP、EMP與2，3-DPG在不同保存時(shí)間的情況（）

表3 觀察FHb、葡萄糖、ATP、EMP與2，3-DPG在不同保存時(shí)間的情況（）

3 討論

輸血是指將篩選合格的血液通過靜脈輸血的方式為患者及時(shí)補(bǔ)充血容量，確?；颊呱眢w各項(xiàng)器官供血正常，由此可見，輸血在臨床醫(yī)學(xué)中具有重要作用。但是，在臨床輸血過程中，如果對血液樣本處理不當(dāng)，會(huì)導(dǎo)致患者同種免疫性非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)及各種傳染病的發(fā)生，不僅起不到治療效果甚至還會(huì)危及患者生命[3]。王姣杰等[4]、史大川等[5]研究表明，血液中存在的白細(xì)胞是導(dǎo)致輸血失敗的根本原因之一，在處理血液制品時(shí)，需要對血液中的白細(xì)胞進(jìn)行有效處理，通過去除白細(xì)胞等操作確保輸血質(zhì)量。在研究中發(fā)現(xiàn)，血液存儲(chǔ)時(shí)間不同對白細(xì)胞有一定的影響，因此，通過對不同存儲(chǔ)時(shí)間的血液樣本進(jìn)行過濾、處理、檢測，并研究保存時(shí)間對庫存去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞血液指標(biāo)變化的影響，在臨床醫(yī)學(xué)中具有重要意義。近些年臨床血液成分分離機(jī)取得較好發(fā)展，成分制備技術(shù)也在持續(xù)發(fā)展中，血液成分制備逐漸往規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化與自動(dòng)化的方向發(fā)展[6-7]。同時(shí)成分輸血近些年在臨床中取得較好的推廣效果，因?yàn)槌煞州斞嬖诩兌雀摺⒅委熜Ч麅?yōu)、輸血不良癥狀較少、用血科學(xué)等優(yōu)勢，越來越多的臨床醫(yī)師開始接納疾病治療過程中運(yùn)用成分輸血[8-9]。懸浮紅細(xì)胞的臨床定義是：在一個(gè)全封閉的環(huán)境中，對全血中大多數(shù)血漿進(jìn)行有效分離，然后在紅細(xì)胞添加劑中增添分離后剩余的血漿，從而形成紅細(xì)胞成分血[10-12]。在制備過程中運(yùn)用合理的方式過濾掉血液中的白細(xì)胞，形成去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞，去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞能夠避免輸血后出現(xiàn)某些不良反應(yīng)[13-14]。

上述研究表明，在血液制品中的白細(xì)胞可能會(huì)引起非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)、炎性并發(fā)癥等情況發(fā)生，為有效提高臨床用血率和醫(yī)療質(zhì)量，在對血液制品進(jìn)行制備和保存時(shí)，一般可采用血站型濾器將血液制品中的白細(xì)胞和血小板基本去除后，通過保存紅細(xì)胞的方式進(jìn)行存儲(chǔ)[15]。本文相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，血細(xì)胞計(jì)數(shù)指標(biāo)在不同保存時(shí)間的情況基本沒有差異，雖然隨著保存時(shí)間的延長，紅細(xì)胞會(huì)存在不同程度的破壞現(xiàn)象，但是，MCV、Hct、WBC、Hb與RBC在保存7、14、21、28、35 d的數(shù)值，與保存0 d的數(shù)值無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本文結(jié)果顯示，電解質(zhì)指標(biāo)在不同保存時(shí)間下會(huì)發(fā)生一定的變化，樣本的Cl-、Na+、pH隨著保存時(shí)間的延長而下降，K+隨著保存時(shí)間的延長而上升，其原因可能與儲(chǔ)存的溫度、紅細(xì)胞逐漸衰老等因素有關(guān)。FHb、葡萄糖、ATP、EMP與2，3-DPG在不同保存時(shí)間下，發(fā)現(xiàn)FHb與EMP隨保存時(shí)間的延長而提高，葡萄糖與2，3-DPG隨保存時(shí)間的延長而降低，ATP無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其原因可能是紅細(xì)胞在存儲(chǔ)過程中受到溫度、時(shí)間的影響，導(dǎo)致其濃度有所變化。本次研究的結(jié)果與張春榮等[16]的研究成果一致。

血液在完成離體反應(yīng)后，雖然會(huì)在血液中增加抗凝保養(yǎng)液等成分，但血液在完成收集、離心、分離、成分制備與儲(chǔ)存等操作后，血液紅細(xì)胞會(huì)受到一定的機(jī)械性損傷。同時(shí)血液外環(huán)境也會(huì)出現(xiàn)一定的變化，紅細(xì)胞在4 ℃環(huán)境下進(jìn)行儲(chǔ)存，紅細(xì)胞的代謝水平會(huì)出現(xiàn)明顯下降，但紅細(xì)胞不會(huì)停止代謝。在長時(shí)間儲(chǔ)存中，紅細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能均會(huì)出現(xiàn)較大變化，這就會(huì)對紅細(xì)胞的攜氧能力造成比較大的影響。臨床能夠應(yīng)用2，3-DPG含量對紅細(xì)胞釋放氧的能力進(jìn)行評估，紅細(xì)胞中增多的2，3-DPG和Hb發(fā)生有效結(jié)合，能夠明顯有助于Hb的空間構(gòu)象保持穩(wěn)定，使Hb對氧氣的親和力顯著下降，Hb與氧氣盡快發(fā)生解離。當(dāng)人體中的血液流經(jīng)組織的時(shí)候，紅細(xì)胞中2，3-DPG增多可以使氧氣的釋放量得到進(jìn)一步增多。EMP與FHb指標(biāo)能夠?qū)t細(xì)胞膜損傷以及溶血情況進(jìn)行合理評估，ATP、葡萄糖、K+、Na+指標(biāo)能夠?qū)t細(xì)胞的能量代謝情況進(jìn)行合理評估[17-18]。

葡萄糖在血液保存液中具有十分重要的作用，其在紅細(xì)胞中能夠發(fā)揮營養(yǎng)保護(hù)作用。紅細(xì)胞在進(jìn)行代謝的時(shí)候，其ATP會(huì)持續(xù)減少，為了確保紅細(xì)胞在儲(chǔ)存環(huán)節(jié)中能夠有足夠的能量供應(yīng)，可以借助無氧酵解葡萄糖來獲得足夠的ATP能量，使患者機(jī)體生理功能能夠得到良好維持。無氧酵解消耗了一部分葡萄糖，導(dǎo)致血液中的葡萄糖濃度會(huì)明顯降低，同時(shí)無氧酵解反應(yīng)還會(huì)形成乳酸，在一定程度上促進(jìn)了血液酸性的增加，使得血液pH值發(fā)生明顯降低。紅細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)、胞外酸堿度、細(xì)胞膜流動(dòng)特性、細(xì)胞膜變形能力與血紅蛋白攜氧能力之間存在著較為緊密的聯(lián)系，紅細(xì)胞流變學(xué)特性在出現(xiàn)變化時(shí)，會(huì)對其體內(nèi)攜氧功能造成一定影響[19-20]。如果紅細(xì)胞的胞外pH值達(dá)不到6.3時(shí)，則會(huì)導(dǎo)致紅細(xì)胞膜曲率為負(fù)數(shù)，導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)與細(xì)胞膜流變學(xué)特性均會(huì)受到一定影響。如果保養(yǎng)液的pH值能夠達(dá)到6.8或超過6.8，則能夠說明紅細(xì)胞存在著良好的微黏度與偏振度，同時(shí)還存在著良好的流動(dòng)性。若紅細(xì)胞外pH值達(dá)不到6.8，則會(huì)使紅細(xì)胞膜形態(tài)出現(xiàn)一定的變化，同時(shí)還會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞聚集的情況。本次研究中的pH值隨著保存時(shí)間的延長而不斷下降，保存35 d后的pH值處在6.3～6.8，這表明保存時(shí)間會(huì)對紅細(xì)胞的攜氧功能造成影響。Hb對氧親和力發(fā)生一定變化，能夠幫助2，3-DPG進(jìn)行Hb氧釋放的調(diào)節(jié)，紅細(xì)胞中的2，3-DPG含量出現(xiàn)持續(xù)降低，這說明紅細(xì)胞釋放氧的能力在不斷下降[21]。

紅細(xì)胞膜與膜蛋白發(fā)生損傷后，且葡萄糖在細(xì)胞中不斷被消耗后，ATP供能會(huì)發(fā)生明顯減少。ATP的減少會(huì)對K+、Na+濃度產(chǎn)生一定影響，且ATP酶功能還不能夠取得正常發(fā)揮，使得細(xì)胞內(nèi)K+會(huì)出現(xiàn)逸出的情況，導(dǎo)致細(xì)胞外K+濃度出現(xiàn)持續(xù)上升的情況。隨著保存時(shí)間的延長，紅細(xì)胞膜的脆性會(huì)不斷下降，此時(shí)紅細(xì)胞膜會(huì)出現(xiàn)程度不一的損傷，F(xiàn)Hb與EMP會(huì)在紅細(xì)胞外懸浮液中進(jìn)行有效釋放，所以FHb與EMP的濃度會(huì)出現(xiàn)升高。本研究結(jié)果數(shù)據(jù)表明，ATP濃度初始呈現(xiàn)為上升趨勢，但14 d后，ATP濃度又開始發(fā)生下降，這主要是因?yàn)槌墒旒t細(xì)胞通過無氧酵解作用生成ATP，生成的ATP能夠幫助保持離子平衡 。與王紅蘋和夏培元[22]報(bào)道相一致。

綜上所述，庫存去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞的血細(xì)胞指數(shù)不會(huì)隨保存時(shí)間的變化而發(fā)生變化，在不同保存時(shí)間下，血液中的血細(xì)胞計(jì)數(shù)不會(huì)發(fā)生明顯變化，Cl-、Na+、pH、葡萄糖與2，3-DPG隨著保存時(shí)間的延長而下降，K+、FHb與EMP隨著保存時(shí)間的延長而上升[22-23]。因此，臨床可借助血液指標(biāo)的變化來合理評估保存時(shí)間。