趙雯，袁銘銘，許妍，吳燕紅，任琦，萬(wàn)林春

江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，南昌 330029

柏子養(yǎng)心丸由柏子仁、黨參、炙黃芪、川芎等十三味藥經(jīng)粉碎后加煉蜜制成，具有補(bǔ)氣、養(yǎng)血、安神的功效［1］。煉蜜是蜜丸的重要輔料［2,3］，是蜂蜜經(jīng)高溫?zé)捴贫桑?］。近年來(lái)，蜂蜜產(chǎn)量供不應(yīng)求，摻假現(xiàn)象較為嚴(yán)重［5-10］，如使用轉(zhuǎn)化糖漿、麥芽糖漿、果葡萄糖漿等代替蜂蜜［11,12］。為進(jìn)一步控制柏子養(yǎng)心丸輔料煉蜜質(zhì)量，本課題照《中國(guó)藥典》（2015 年版）一部“蜂蜜”［13］，對(duì)柏子養(yǎng)心丸輔料煉蜜的質(zhì)量進(jìn)行了研究［14］，對(duì)煉蜜中的果糖、葡萄糖和麥芽糖指標(biāo)成分進(jìn)行了控制，經(jīng)方法學(xué)考察，認(rèn)為本法簡(jiǎn)單方便，可作為柏子養(yǎng)心丸中輔料煉蜜的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1260 系列（全自動(dòng)）高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；Alltech3300 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（美國(guó)奧泰公司）；Sartorius BT 25S 型十萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）；KQ-500E 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

D-果糖對(duì)照品（批號(hào)：100231-201305，含量：99.4%）、D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品（批號(hào)：110833-201205，含量：99.5%）、麥芽糖對(duì)照品（批號(hào)：100287-201102，含量：94.4%）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙腈為SIGMA-ALDRICH 公司色譜純，水為娃哈哈飲用純凈水，其他試劑均為分析純；柏子養(yǎng)心丸（2015 年國(guó)家評(píng)價(jià)性抽驗(yàn)樣品，企業(yè)A～Z）。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取D-果糖、D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品適量，加40%乙腈分別制成含D-果 糖2.694 0 mg/mL、D-無(wú)水葡萄糖2.681 0 mg/mL 的對(duì)照品溶液。精密稱(chēng)取麥芽糖對(duì)照品適量，加40%乙腈制成含麥芽糖0.231 2 mg/mL 的對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備取柏子養(yǎng)心丸樣品約0.50 g（水蜜丸研碎；小蜜丸或大蜜丸剪碎），精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加入水25 mL，密塞，稱(chēng)定重量，加熱超聲處理（功率：500 W，頻率：40 kHz，溫度：55 ℃）1 h，放冷，再稱(chēng)定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，再加入乙腈15 mL，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率：500 W，頻率：40 kHz）30 min，再稱(chēng)定重量，用40%乙腈補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 色譜條件Prevail Carbohydrate ES 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（75∶25）；流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器漂移管溫度60 ℃；載氣N2流速：1.8 L/min。對(duì)照品及樣品色譜圖見(jiàn)圖1。

2.4 線(xiàn)性關(guān)系考察取“2.1”項(xiàng)下果糖、葡萄糖混合對(duì)照品溶液0.5、1、2、5、10 μL，麥芽糖對(duì)照品溶液1、2、5、10、30 μL，按“2.3”所述色譜條件進(jìn)樣分析，橫坐標(biāo)是對(duì)照品進(jìn)樣量的對(duì)數(shù)，縱坐標(biāo)是峰面積積分值的對(duì)數(shù)，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制。所得到的線(xiàn)性回歸方程及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表1。

表1 3種糖類(lèi)成分的線(xiàn)性關(guān)系結(jié)果

2.5 精密度試驗(yàn)精密吸取按“2.2”項(xiàng)下方法制備的供試品溶液5 μL，在“2.3”所述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6 次，結(jié)果測(cè)得D-果糖、D-無(wú)水葡萄糖、麥芽糖峰面積均值分別為551.4、866.4、1 194.2，RSD 分別為1.2 %、1.1 %和1.0 %，表明方法精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)精密稱(chēng)取同一批柏子養(yǎng)心丸樣品6份，分別按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.3”所述色譜條件下進(jìn)行分析測(cè)定，D-果糖、D-無(wú)水葡萄糖和麥芽糖含量的平均值分別為30.143 0 mg/g、54.400 4 mg/g 和75.489 4 mg/g。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液5 μL，分別于0、6、12、18、24 h 進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果D-果糖、D-無(wú)水葡萄糖、麥芽糖峰面積均值分別為555.0、869.4、1 204.6，RSD 分別為1.0%、0.9%和0.7%，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)取上述已測(cè)含量的柏子養(yǎng)心丸樣品約0.25 g，共6份，精密稱(chēng)定，分別精密加入果糖、葡萄糖、麥芽糖對(duì)照品適量，分別按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取5 μL 注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算平均加樣回收率，果糖、葡萄糖、麥芽糖的回收率分別為94.4%、95.9%、92.3%，RSD 分別為1.1%、1.3%、0.8%，表明方法準(zhǔn)確度符合要求。

2.9 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn)取缺煉蜜的陰性樣品，按“2.2”項(xiàng)下方法制得陰性樣品溶液，按“2.3”條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示處方中蔗糖含量較高，故未將蔗糖結(jié)果納入考察范圍，另外結(jié)果顯示陰性樣品中含有少量的果糖、葡萄糖，這是因?yàn)榘刈羽B(yǎng)心丸處方中炙黃芪、制甘草采用了蜂蜜進(jìn)行炮制，但由于其結(jié)果僅占0.1%，含量相對(duì)較小，故可以忽略。

2.10 樣品測(cè)定按所擬訂的含量測(cè)定方法，測(cè)定26 家生產(chǎn)企業(yè)的26 批柏子養(yǎng)心丸樣品中3 種糖類(lèi)成分的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品測(cè)定的結(jié)果

3 討論

3.1 提取方式的選擇考察了加熱超聲提取法、加熱回流法兩種方法對(duì)果糖、葡萄糖和麥芽糖含量測(cè)定的影響，結(jié)果含量相似，故選擇加熱超聲提取法；加熱超聲溫度考察了35 ℃、45 ℃、55 ℃、65 ℃，結(jié)果表明55 ℃時(shí)超聲提取效果最好，故加熱超聲溫度定為55 ℃；第二步提取溶劑考察了水、甲醇和乙腈，結(jié)果表明，乙腈提取效率最高，故選擇乙腈作為提取溶劑；提取時(shí)間考察了15、30、60、90 min，結(jié)果表明60 min 可提取完全，故提取時(shí)間定為60 min。

3.2 限度的確定《中國(guó)藥典》（2015 年版）一部“蜂蜜”標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，蜂蜜中果糖與葡萄糖的總量不得少于60%，蔗糖、麥芽糖不得過(guò)5%，蜂蜜中果糖與葡萄糖含量比值不得小于1.0［13,15］。按照柏子養(yǎng)心丸處方量（水蜜丸：煉蜜比例20%；小蜜丸、大蜜丸：煉蜜比例為50%）折算，水蜜丸中果糖與葡萄糖含量之和應(yīng)大于12%，麥芽糖不得過(guò)1%，二者比值大于12；小蜜丸、大蜜丸中果糖與葡萄糖含量之和應(yīng)大于30%，麥芽糖不得過(guò)2.5%，二者比值大于12?？紤]到蜂蜜在煉制過(guò)程中，水分發(fā)生變化，因而在限度制定時(shí)規(guī)定了果糖與葡萄糖含量的同時(shí)，果糖、葡萄糖與麥芽糖比值也進(jìn)行了規(guī)定。因此將柏子養(yǎng)心丸限度暫定為果糖、葡糖糖的總量與麥芽糖含量比值應(yīng)大于12.0（用于檢查蜂蜜蜂中是否摻有轉(zhuǎn)化糖漿、麥芽糖漿等）；每1 g 水蜜丸中果糖和葡糖糖的總量不得少于120 mg；每1 g小蜜丸、大蜜丸中果糖和葡糖糖的總量不得少于300 mg（用于檢查制丸用煉蜜而不是采用糖漿等其他黏合劑）。通過(guò)上述限度規(guī)定，較好地控制了煉蜜摻假行為。

3.3 測(cè)定結(jié)果分析對(duì)結(jié)果進(jìn)行綜合分析發(fā)現(xiàn)：1 批柏子養(yǎng)心丸果糖、葡糖糖的總量未達(dá)到限度，表明其未按規(guī)定量進(jìn)行投料，另外4 批柏子養(yǎng)心丸中果糖、葡糖糖的總量與麥芽糖的量比值小于12，表明這些樣品中煉蜜中摻有其他糖漿，存在摻偽現(xiàn)象，見(jiàn)表3。

表3 柏子養(yǎng)心丸不合格的批次

3.4 小結(jié)本研究建立了柏子養(yǎng)心丸輔料煉蜜中果糖、葡萄糖、麥芽糖的含量測(cè)定方法，操作簡(jiǎn)單方便，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，可以作為柏子養(yǎng)心丸中輔料煉蜜的質(zhì)量控制方法。