廖旖欣 廖欣鑫

（南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院，廣東 廣州 510515）

七氟烷是臨床常用的吸入性麻醉劑，具有誘導(dǎo)迅速、組織攝取少、患者術(shù)后蘇醒快等特點[1]。一項大鼠實驗指出，孕鼠長時間吸入七氟烷，可導(dǎo)致其子代小鼠出現(xiàn)社會交往行為的障礙，是小鼠子代表現(xiàn)出長時間探索同一區(qū)域，不與同伴展開互動的現(xiàn)象[2]。本文根據(jù)上述介紹的研究成果，按照其思路設(shè)計實驗，分析孕鼠七氟烷麻醉或手術(shù)對子代小鼠社會交往行為方面的影響。研究的具體方式及結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取30只由上海實驗動物中心提供近交系受孕C57BL/6小鼠，應(yīng)用計算機(jī)隨機(jī)排序方式將其分為A組、B組和C組，納入孕鼠年齡在87～113 d，平均年齡（96.17±6.43）d。

1.2 方法

1.2.1 飼養(yǎng)條件 將飼養(yǎng)環(huán)境調(diào)整至小鼠適宜存活與繁殖的條件，即環(huán)境溫度控制在20～23 ℃，濕度控制在50%～60%，模擬自然環(huán)境進(jìn)行晝夜交替照明，并在該環(huán)境中保證小鼠食物充足。以保證孕鼠能夠順利繁殖以及子代小鼠順利生長。

1.2.2 實驗準(zhǔn)備 實驗人員于清晨檢查小鼠陰道精栓，確保小鼠順利受孕。依照孕鼠分組分別對其進(jìn)行處理，其中A組孕鼠在正常通入氧氣的情況下吸入3%的七氟烷，連續(xù)吸入6 h；B組則是在完成上述氣體吸入后行腹腔探查手術(shù)。手術(shù)操作如下：從孕鼠劍突下方到恥骨聯(lián)合上方切開一長約2.0 cm的切口，依次剝離切口下方皮膚組織、筋膜組織、肌肉組織等，直至腹下器官顯露于術(shù)野，觀察孕鼠肝、脾、腸等器官后逐層縫合關(guān)閉切口；C組孕鼠僅持續(xù)為其提供足夠氧氣，不做其他處理，將上述30只孕鼠分別裝入單籠等待分娩，期間做好孕鼠的護(hù)理，以防產(chǎn)前突發(fā)死亡的情況。子代小鼠由孕鼠自行撫養(yǎng)，于生育后30 d選取與孕鼠數(shù)量相同、可進(jìn)行實驗的子代小鼠分別完成社會交往行為測試，并于出生后80 d在對子代小鼠實施完全一致的實驗。

1.2.3 實驗開展 社會交往行為測試：應(yīng)用小鼠三箱社交測試實驗，模型由透明有機(jī)玻璃制成，模型內(nèi)分為等大3個房間，并在中間房間設(shè)置2個等大鐵籠專門放置陌生小鼠，應(yīng)用搭載動物視頻跟蹤系統(tǒng)EthoVision（美國）的攝像設(shè)備持續(xù)性監(jiān)控小鼠放置模型后行為。測試一共分為3個階段，第1階段為小鼠適應(yīng)階段，將模型中所有通道全部開放，小鼠在模型中自行探索，記錄小鼠主動完成的時間；第2階段將陌生小鼠隨機(jī)放入任意一個鐵籠，暫時關(guān)閉左右兩房間通道，由小鼠自主嗅探籠中陌生小鼠，記錄嗅探時間，600 s后開放兩邊房間，記錄小鼠主動嗅探兩邊房間的時間；第3階段操作方式與第2階段一致，區(qū)別在于重新更換陌生小鼠，并將小鼠裝入與2階段相反的鐵籠。對不同組小鼠3個階段耗時情況進(jìn)行分析和統(tǒng)計。

1.3 實驗指標(biāo) 分別對比出生30 d后與出生80 d后的子代小鼠社會交往行為情況。其中社會交往行為統(tǒng)計3組小鼠第1階段探索所需時間，2、3階段探索陌生小鼠+兩邊房間合計時間。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0軟件分析以上指標(biāo)，子代小鼠社會交往行為情況采用F檢驗，并以（）表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)記錄后可知，在第1階段時3組小鼠不同年齡段比較均無明顯差異，無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），第2、3階段小鼠不同時段出現(xiàn)顯著差異，即探索時間B組＞A組＞C組，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 各組子代小鼠社會交往行為對比（s，）

表1 各組子代小鼠社會交往行為對比（s，）

3 討論

七氟烷因其具有誘導(dǎo)迅速，組織攝取少，蘇醒快，嗅味好，操作便利特點，如今被廣泛應(yīng)用于孕婦、兒童等特殊患者的外科手術(shù)中，其麻醉效果已得到眾多專家的認(rèn)可[3]。但近年來宋紹永等[4]研究發(fā)現(xiàn)，采用剖宮產(chǎn)分娩出的新生兒患上自閉癥的概率較自然分娩的新生兒更高，該研究者推斷導(dǎo)致剖宮產(chǎn)新生兒自閉癥發(fā)病率高的主要原因是由于部分化學(xué)物質(zhì)對新生兒未成熟的大腦產(chǎn)生神經(jīng)毒性所致，因此推斷新生兒自閉癥的發(fā)生可能受七氟烷影響大腦所致，同時張運(yùn)宏等[5]強(qiáng)調(diào)，手術(shù)過程中形成的創(chuàng)傷也是有一定概率造成中樞神經(jīng)炎性變和促使大腦神經(jīng)元凋亡，但當(dāng)前沒有任何結(jié)論和案例對該推論進(jìn)行佐證，若將人體作為開展該類研究的對象將不符合赫爾辛基宣言。因此可選擇應(yīng)用哺乳類模型對本次研究進(jìn)行探討。

哺乳類模型中最常應(yīng)用C57BL/6小鼠作為實驗對象，該類小鼠作為生理學(xué)與病理學(xué)的實驗動物模型，可構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動物模型，百奧賽圖多采用背景純凈的C57BL/6小鼠進(jìn)行基因敲除，保證遺傳背景上的高度穩(wěn)定性和實驗數(shù)據(jù)的一致性，作為產(chǎn)生自發(fā)突變和誘發(fā)突變的同基因型小鼠的背景品系[6]。通過選取該哺乳類模型進(jìn)行實驗，能在保證人道主義的條件下獲得較為準(zhǔn)確的結(jié)論[7]。本次實驗通過選取處于妊娠期的孕鼠作為研究對象，將納入孕鼠分為3組，其中兩組進(jìn)行七氟烷吸入和手術(shù)干預(yù)，應(yīng)用小鼠模型中最常用的小鼠三箱社交測試實驗系統(tǒng)對其子代的幼年期（產(chǎn)后30 d）和成年期（產(chǎn)后80 d）進(jìn)行測試，并最終分析其子代的社會交往行為情況。本次研究結(jié)果參照宋歌[8]和李思慧[9]的成果進(jìn)行討論。通過分別將3組子代小鼠應(yīng)用小鼠三箱社交測試實驗系統(tǒng)進(jìn)行社會交往行為的研究，測試第1階段3組小鼠探索模型耗時差異不大，無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），但在第2階段和第3階段的測試時，3組小鼠探索開始出現(xiàn)明顯差異，3組小鼠在第2階段和低3階段探索所耗時間均為B組＞A組＞C組，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。通過本次研究我們發(fā)現(xiàn)，七氟烷或手術(shù)治療可會使子代小鼠的社會交往能力降低，其原因與該藥物特征有關(guān)[10-12]，該藥物作為吸入性麻醉劑具有顯著藥性，但過量或長時間使用可能導(dǎo)致子代小鼠海馬體各個腦區(qū)神經(jīng)元凋亡速度增加，抑制大腦皮質(zhì)活動，造成使用者后代的空間學(xué)習(xí)能力產(chǎn)生持續(xù)長期的影響。

綜上所述，七氟烷可會使子代小鼠的社會交往能力降低。