梁俊超，王輝之，劉曉東，劉紅祥，李 坤，孔憲好，馬振乾，胡繼明，劉 東，于 錄

（1.吉林大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院人獸共患病研究所，人獸共患病研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林長(zhǎng)春 130062；2.動(dòng)物基因工程疫苗國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，青島易邦生物工程有限公司，山東青島 266000）

豬瘟（classical swine fever，CSF）是由豬瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）引起的一種烈性傳染病，臨床上主要導(dǎo)致母豬繁殖障礙，商品豬實(shí)質(zhì)器官出血、壞死和死亡率高等[1]。CSFV毒力的強(qiáng)弱導(dǎo)致感染豬群的臨床病變、發(fā)病周期及死亡率均存在差異[2-3]。豬繁殖與呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）可導(dǎo)致豬繁殖與呼吸綜合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）[4]。PRRS臨床上主要引發(fā)種豬繁殖障礙，商品豬呼吸道癥狀和高死亡率[5]。PRRSV能逃避機(jī)體的免疫清除，侵害豬肺泡巨噬細(xì)胞系統(tǒng)，導(dǎo)致機(jī)體免疫抑制從而繼發(fā)其他病原感染。此外，PRRSV可在豬體中形成持續(xù)性感染[6]。偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）可導(dǎo)致偽狂犬?。╬seudorabies，PR），臨床上主要引發(fā)母豬繁殖障礙，商品豬呼吸道癥狀、神經(jīng)癥狀和高死亡率[7-8]。自2011年以來(lái)，我國(guó)多個(gè)省份陸續(xù)報(bào)道豬場(chǎng)出現(xiàn)PRV變異毒株[9-11]。但目前發(fā)現(xiàn)，PRV變異毒株主要是基因型的改變，血清型仍只有1個(gè)[12-13]。據(jù)楊漢春等[14]報(bào)道，2018年我國(guó)PRRS呈現(xiàn)散發(fā)和常發(fā)態(tài)勢(shì)，CSF以零星散發(fā)為主，PR仍有散發(fā)。為了解目前我國(guó)這幾種常見疫病的流行情況，對(duì)2019年不同?。ㄗ灾螀^(qū)）的送檢樣本進(jìn)行血清學(xué)和病原學(xué)檢測(cè)，分析其流行特點(diǎn)，以期為豬場(chǎng)相關(guān)疫病防控提供參考。

1 材料和方法

1.1 送檢樣品

2019年我國(guó)11個(gè)?。ㄗ灾螀^(qū)）172個(gè)豬場(chǎng)送檢的3 550份豬血清樣品，9個(gè)?。ㄗ灾螀^(qū)）72個(gè)豬場(chǎng)送檢的371份豬肺臟、脾臟、腎臟、肝臟、淋巴結(jié)及腦等組織病料（表1）。送檢樣品豬場(chǎng)均免疫了CSF和PR疫苗，部分豬場(chǎng)免疫了PRRS疫苗（不同省份占比為13%～33%）。

1.2 主要試劑與儀器

CSFV、PRRSV、PRV-gE ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自美國(guó)愛德士公司；一步法RT-PCR試劑盒，購(gòu)自Vazyme公司；DNA提取試劑盒，購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；RNA提取試劑盒，購(gòu)自北京天恩澤生物技術(shù)有限公司。PCR儀（型號(hào)T100），購(gòu)自Bio-Rad公司；酶標(biāo)儀（型號(hào)TECAN），購(gòu)自瑞士帝肯公司；離心機(jī)（型號(hào)TGL-16），購(gòu)自湘儀離心機(jī)有限公司。

1.3 血清抗體檢測(cè)

按照3種病毒相應(yīng)的ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行操作，檢測(cè)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)見表2。

表1 不同?。ㄗ灾螀^(qū)）送檢血清樣本和病料樣本信息統(tǒng)計(jì)

表2 3種病原抗體檢測(cè)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

1.4 病料病原檢測(cè)

CSFV與PRRSV，采用RNA試劑盒提取并進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)；PRV，采用DNA提取試劑盒提取并進(jìn)行PCR檢測(cè)，然后用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，如出現(xiàn)目的條帶判定為陽(yáng)性，反之為陰性。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

檢測(cè)結(jié)果應(yīng)用Excel 2013軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 血清抗體檢測(cè)

2.1.1 總體情況 血清抗體檢測(cè)結(jié)果（圖1）顯示：CSFV、PRRSV抗體陽(yáng)性率分別為82.75%、84.08%，均超過了國(guó)家要求的70%的最低標(biāo)準(zhǔn)，但因免疫了疫苗，所以無(wú)法區(qū)分是免疫抗體還是感染抗體；PRV-gE抗體陽(yáng)性率為31.86%，表明PRV野毒感染率較高。

圖1 3種疫病病原血清抗體檢測(cè)結(jié)果

2.1.2 CSFV抗體水平 從圖2和圖3中可知：保育豬群的CSFV抗體平均阻斷率最低，為44.62%，且抗體整齊度差，CV為58.26%；陽(yáng)性個(gè)體中，阻斷率＞40%的占54.39%，＞70%的僅占20.46%，表明保育豬群CSFV抗體水平整體不理想。公豬和母豬的平均CSFV抗體阻斷率較高，分別為78.66%和75.47%，且抗體整齊度較好，CV分別為24.47%和26.79%；陽(yáng)性個(gè)體中，阻斷率＞40%的分別占93.91%和92.04%，＞70%的分別占80%和74.16%，表明種豬群CSFV抗體水平整體較好。后備豬群的平均CSFV抗體阻斷率為68.07%，CV為33.97%；陽(yáng)性個(gè)體中，阻斷率＞40%的占86.55%，＞70%的占59.23%，表明后備豬群CSFV抗體水平好于保育豬群和育肥豬群。

圖2 2019年不同階段豬群CSFV抗體陽(yáng)性率

圖3 2019年不同階段豬群CSFV抗體分布

2.1.3 PRRSV抗體水平 從圖4和圖5中可知：育肥豬群PRRSV抗體S/P平均值最高，為2.32，且抗體較整齊，CV為35.65%；育肥豬群S/P＞2.5的占比最高，為46.3%，S/P＞3.0占比也最高，為3.24%。而其他各階段豬群S/P平均值為1.0～2.0，且抗體整齊度較差。公豬CV最高，為88.66%；哺乳仔豬、保育及后備豬群次之，在65.00%～75.00%之間；母豬相對(duì)最低，為57.14%。

圖4 2019年不同階段豬群PRRSV抗體陽(yáng)性率

圖5 2019年不同階段豬群PRRSV抗體分布

2.1.4 PRV-gE抗體水平 從圖6中可知：育肥豬群PRV-gE抗體陽(yáng)性占比最高，為36.82%；母豬群次之，為35.31%；公豬陽(yáng)性比例最低，為15.65%。

圖6 2019年不同階段豬群PRV-gE抗體分布

2.2 病料病原檢測(cè)

從表2可知：PRRSV抗原陽(yáng)性率最高，為26.15%；CSFV次之，為2.62%；PRV最低，為1.67%。CSFV+PRRSV混合感染檢出率為2.03%，CSFV+PRV及PRRSV+PRV均未檢出。

從表3可知：保育階段豬群病料的PRRSV檢出率最高，為37.68%；CSFV主要在哺乳仔豬和保育豬群病料中被檢出，檢出率分別為3.57%和3.00%；PRV主要從死胎/木乃伊胎及哺乳仔豬病料中檢測(cè)到，檢出率分別為8.70%和2.99%。CSFV+PRRSV混合感染主要集中在哺乳仔豬及保育豬，檢出率分別為5.00%和4.35%。

表3 2019年3種抗原單一及混合感染檢測(cè)結(jié)果

表4 2019年3種抗原在不同階段豬群病料中的分布

3 討論

近年來(lái)，環(huán)保、疫病等因素導(dǎo)致我國(guó)養(yǎng)豬存欄大幅下降[15]。豬場(chǎng)密度降低雖對(duì)豬病防控有積極作用，但從2019年3種常見豬病抗原及抗體檢測(cè)結(jié)果可知，3種疫病對(duì)豬群仍有不同程度的威脅，尤其是PRRS，仍舊是豬場(chǎng)防控的重要對(duì)象。

從PRRSV檢測(cè)結(jié)果可知，PRRSV抗體及抗原陽(yáng)性率總體較高，相比CSFV和PRV，其對(duì)豬場(chǎng)威脅更大。母豬PRRSV抗體S/P＞2.5的樣品占比較高，且死胎/木乃伊胎及哺乳仔豬病料抗原檢出率較高，表明母豬群仍存在較高比例的PRRSV感染。保育豬PRRSV抗體S/P＞2.5的樣品占比也較高，且病料PRRSV抗原檢出率最高，表明保育階段豬群仍是PRRS高發(fā)群體。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，仔豬體內(nèi)PRRSV母源抗體在3周齡時(shí)下降加劇[16]，至5周齡時(shí)下降顯著[17]，而仔豬免疫系統(tǒng)發(fā)育較晚，4～5周齡時(shí)才開始發(fā)揮作用[18]。此外，保育前期豬群應(yīng)激因素較多，如斷奶、換料、轉(zhuǎn)群及打針等，導(dǎo)致抵抗力下降，從而使豬群保育前期成為PRRSV感染高風(fēng)險(xiǎn)時(shí)期。育肥豬PRRSV抗體S/P＞2.5的樣品占比最高，且病料抗原檢出率也較高，表明育肥豬群PRRSV感染也較重，但由于育肥豬抗病力較強(qiáng)，所以臨床發(fā)病程度輕于保育豬。由上述結(jié)果可知，2019年國(guó)內(nèi)豬群PRRSV感染壓力并未因外界環(huán)境因素改變而得到較大改善。我國(guó)PRRS流行比較復(fù)雜，除高致病性PRRSV毒株外，類NADC30毒株近年來(lái)流行也在加劇[19-20]，而用于防疫的弱毒活疫苗毒株繁多（如TJM-F92、JXA1、VR2332、CH-1R等），導(dǎo)致疫苗毒株選擇混亂，此外豬場(chǎng)間生物安全及飼養(yǎng)管理水平差距較大，因而增加了我國(guó)PRRS防控難度。豬場(chǎng)PRRS綜合防控，首先要重視后備豬隔離馴化，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提升豬場(chǎng)生物安全水平；其次要根據(jù)豬場(chǎng)自身PRRSV感染狀態(tài)，選用合適的疫苗種類及免疫方案。

從CSFV檢測(cè)結(jié)果可知，公豬和母豬抗體水平相對(duì)更好，后備豬次之，而保育豬最差，與之前相關(guān)報(bào)道[21]結(jié)果一致。這主要是因?yàn)楸Ｓi群CSFV抗體易受母源抗體、應(yīng)激及PRRS引起的免疫抑制等不利因素影響。CSFV抗原主要從保育豬及哺乳仔豬病料中被檢出，檢出率較往年有明顯下降[22]。CSFV陽(yáng)性病料共9份，其中7份是CSFV+PRRSV混合感染，且主要集中于保育豬，這可能與PRRSV感染導(dǎo)致機(jī)體免疫抑制密切相關(guān)。CSF防控是豬場(chǎng)的基礎(chǔ)防疫，其防控效果與疫苗質(zhì)量、免疫程序及免疫抑制性疾病控制存在較大關(guān)聯(lián)。此外，豬場(chǎng)務(wù)必重視母豬群CSF防控，定期進(jìn)行抗原及抗體監(jiān)測(cè)，并結(jié)合臨床及時(shí)調(diào)整免疫程序，母豬群的CSF防控對(duì)豬場(chǎng)生產(chǎn)及CSFV凈化均具有重要意義。

從PRV檢測(cè)結(jié)果可知，公豬、母豬及育肥豬群體仍存在較高的感染率。據(jù)相關(guān)報(bào)道，PRV野毒感染在我國(guó)多個(gè)地區(qū)仍較嚴(yán)重，PRV-gE抗體陽(yáng)性率＞30%[23-24]，場(chǎng)陽(yáng)性率達(dá)30%～70%[25-26]。近年我國(guó)豬群PRV野毒感染率一直維持在較高水平，這與PR疫苗質(zhì)量、免疫程序、免疫抑制病流行、生物安全及流行毒株變異等有較大關(guān)聯(lián)[27]。至今為止，疫苗免疫仍是當(dāng)下PR防控的重要手段。后備豬群應(yīng)做好隔離監(jiān)測(cè)，種豬定期進(jìn)行抗體檢測(cè)，確保留種的后備豬為PRV陰性；對(duì)于已轉(zhuǎn)陽(yáng)的豬場(chǎng)，可通過陰性后備豬逐漸更新、提升豬場(chǎng)生物安全水平等措施，有效降低PRV感染風(fēng)險(xiǎn)，這也有助于PRV陽(yáng)性豬場(chǎng)逐漸轉(zhuǎn)陰及陰性豬場(chǎng)保持。

本次抗原檢測(cè)的樣品主要由發(fā)病豬場(chǎng)提供，抗體檢測(cè)樣品多為豬場(chǎng)常規(guī)抗體檢測(cè)時(shí)采集。受非洲豬瘟影響，2019年的樣品送檢量雖然較往年大幅下降，但在一定程度上也能反映當(dāng)下豬場(chǎng)3種疫病的免疫水平及感染狀態(tài)，可對(duì)豬場(chǎng)疾病防控提供參考。國(guó)內(nèi)豬病種類多，流行情況相對(duì)復(fù)雜，豬場(chǎng)需根據(jù)豬群疾病實(shí)際感染壓力，科學(xué)免疫，同時(shí)提升豬場(chǎng)生物安全及飼養(yǎng)管理水平，保證豬群安全穩(wěn)定生產(chǎn)。

4 結(jié)論

檢測(cè)表明，PRRS對(duì)我國(guó)不同階段豬群威脅較大，是豬場(chǎng)防控的重要對(duì)象；保育豬群CSF免疫保護(hù)效果不理想，暴發(fā)疫情風(fēng)險(xiǎn)較高；公豬、母豬及育肥豬群體普遍存在PR流行，尤其是母豬群。因此，各豬場(chǎng)應(yīng)采取免疫、監(jiān)測(cè)、凈化等綜合措施，加強(qiáng)這3類常見疫病的控制。