蘇本玉 劉爽 朱海榮

摘要 [目的]通過比較不同提取溶劑對植物生長調(diào)節(jié)劑的提取效果，建立肥料中3種植物生長調(diào)節(jié)劑的氣相色譜分析方法。[方法]樣品經(jīng)丙酮超聲提取，用HP-5毛細(xì)管氣相色譜柱分離，F(xiàn)ID檢測器檢測。[結(jié)果]3種植物生長調(diào)節(jié)劑質(zhì)量濃度在5～100 mg/L范圍內(nèi)與相應(yīng)峰面積呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r>0.999，加標(biāo)回收率為80.6%～97.1%，精密度（RSD）為0.92%～5.67%;稱樣量為0.5 g時，方法檢出限為10 mg/kg。[結(jié)論]該方法樣品前處理簡單、快捷，重復(fù)性及回收率均能達(dá)到檢測分析要求，可以應(yīng)用于肥料及藥肥中植物生長調(diào)節(jié)劑的檢測。

關(guān)鍵詞 肥料;植物生長調(diào)節(jié)劑;氣相色譜法

中圖分類號 S482.8 ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A

文章編號 0517-6611（2020）18-0191-03

Abstract [Objective]By comparing the extraction effects of different extraction solvents on plant growth regulators，a gas chromatographic method for the analysis of three plant growth regulators in fertilizers was established.[Method]The samples were ultrasonically extracted by acetone ，separated by HP5 capillary gas chromatographic column and detected by FID detector.[Result]The mass concentration of the three plant growth regulators was linear with the corresponding peak area in the range of 5-100 mg/L，the correlation coefficient r>0.999.The ?recovery rate was 80.6%-97.1%，and the precision （RSD） was 0.92%-5.67%.When the sample amount is 0.5 g，the detection limit of the method is 10 mg/kg.[Conclusion]The method is simple，fast and reproducible，and can be applied to the detection of plant growth regulators in fertilizers and medicinal fertilizers.

Key words Fertilizer;Plant growth regulator;Gas chromatography

在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，植物生長調(diào)節(jié)劑的使用對提高種植效益、增加作物產(chǎn)量、增強(qiáng)作物抗性及改善產(chǎn)品品質(zhì)有顯著效果[1]。肥料是農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的物質(zhì)保證，是糧食增產(chǎn)的物質(zhì)基礎(chǔ)[2]，是一類重要的農(nóng)業(yè)投入品。我國對植物生長調(diào)節(jié)劑按照農(nóng)藥登記的要求進(jìn)行管理，若在肥料中添加植物生長調(diào)節(jié)劑，應(yīng)與藥肥的登記方式相同，即按照農(nóng)藥進(jìn)行登記，但由于農(nóng)藥登記時間長、費用高，一些不法廠商在肥料中違禁添加植物生長調(diào)節(jié)劑的現(xiàn)象屢見不鮮，阻礙了肥料行業(yè)的健康發(fā)展，影響了藥肥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展秩序。

胺鮮酯、多效唑、烯效唑為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上常用的植物生長調(diào)節(jié)劑。胺鮮酯（DA-6）是一種新型細(xì)胞分裂素類植物生長調(diào)節(jié)劑，對多種農(nóng)作物具有顯著的增產(chǎn)、抗逆、抗病，改善品質(zhì)、早熟等功效[3]，但使用濃度過高，會對一些農(nóng)作物生長產(chǎn)生抑制現(xiàn)象[4]。多效唑具有延緩縱向生長、促進(jìn)橫向生長、提高抗逆性、延緩衰老等作用[5]，烯效唑具有延緩植物生長、促進(jìn)分蘗、增加植物干物質(zhì)積累等作用[6]，兩者均屬于延緩生長類植物生長調(diào)節(jié)劑，若使用不當(dāng)，均可造成農(nóng)作物減產(chǎn)。若在肥料產(chǎn)品中隨意添加植物生長調(diào)節(jié)劑，極易造成與植物生長調(diào)節(jié)劑制劑產(chǎn)品重復(fù)使用的現(xiàn)象，對農(nóng)作物造成潛在危害。因此，建立同時檢測肥料產(chǎn)品中胺鮮酯、多效唑、烯效唑的方法非常必要。

目前，國內(nèi)外對植物生長調(diào)節(jié)劑的檢測研究從未間斷，且主要針對農(nóng)藥制劑、果蔬、水、土壤的檢測較為普遍，肥料中的檢測方法近年來陸續(xù)出現(xiàn)，主要有氣相色譜法[7-8]、液相色譜法[9-10]、氣-質(zhì)聯(lián)用法[11-12]、液-質(zhì)聯(lián)用法[13-15]等，但使用氣相色譜同時檢測肥料中多種植物生長調(diào)節(jié)劑的方法鮮有報道。氣相色譜儀相對于其他3種儀器而言，維護(hù)簡單、使用成本較低，更適合于肥料中植物生長調(diào)節(jié)劑的檢測。筆者采用氣相色譜法測定肥料中3種植物生長調(diào)節(jié)劑含量，旨在建立簡單、快捷、準(zhǔn)確的氣相色譜檢測方法，為肥料中植物生長調(diào)節(jié)劑的監(jiān)管提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要儀器 氣相色譜儀（Agilent 7890B，F(xiàn)ID檢測器，7693自動進(jìn)樣器，HP-5色譜柱）;氮吹儀;漩渦混合器;超聲波清洗器;高速離心機(jī)：最高轉(zhuǎn)速不低于6 000 r/min;電子天平。

1.2 主要試劑 多效唑、烯效唑標(biāo)準(zhǔn)品≥98.5%;胺鮮酯標(biāo)準(zhǔn)溶液1 000 mg/L（丙酮為溶劑）。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)生產(chǎn)廠商為德國Dr.Ehrenstorfer公司。丙酮為色譜純。

1.3 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制

1.3.1 多效唑、烯效唑標(biāo)準(zhǔn)儲備液。分別稱取0.01 g（精確到0.000 1 g）胺鮮酯、多效唑、烯效唑標(biāo)準(zhǔn)品置于10 mL容量瓶中，用丙酮定容至10 mL，分別配制成濃度為1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3.2 胺鮮酯、多效唑、烯效唑混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。分別移取胺鮮酯標(biāo)準(zhǔn)溶液和多效唑、烯效唑標(biāo)準(zhǔn)儲備液各0.05、0.25、0.50、0.75和1.00 mL至10 mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度，即為一系列濃度為5、25、50、75、100 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4 方法

1.4.1 試驗原理。試樣中胺鮮酯、多效唑、烯效唑經(jīng)丙酮超聲萃取后，注入氣相色譜儀，農(nóng)藥組分經(jīng)色譜柱分離，用氫火焰離子檢測器（FID）檢測。用色譜柱的保留時間定性，外標(biāo)法定量。

1.4.2 試驗步驟。

1.4.2.1 液體樣品。稱取0.1～0.5 g樣品于具塞離心管中，氮吹至近干，準(zhǔn)確加入10 mL丙酮，渦旋1 min，超聲15 min，以6 000 r/min高速離心5 min，取1 mL上清液過0.45 μm有機(jī)相濾膜，待測。

1.4.2.2 固體樣品。稱取粉碎后過0.5 mm篩的樣品0.1～0.5 g 樣品于具塞離心管中，準(zhǔn)確加入10 mL丙酮，后續(xù)提取步驟同“1.4.2.1”。

1.4.3 提取溶劑的選擇。

1.4.3.1 標(biāo)準(zhǔn)品在不同溶劑中的穩(wěn)定性。分別使用溶劑甲醇、丙酮為稀釋劑，將胺鮮酯、多效唑、烯效唑標(biāo)準(zhǔn)品溶解在2種不同溶劑中，在12 h內(nèi)以1.5 h為梯度進(jìn)行測試。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，多效唑、烯效唑在2種溶劑中均可以穩(wěn)定存在，在12 h內(nèi)未降解;胺鮮酯標(biāo)準(zhǔn)品在丙酮中較穩(wěn)定，12 h內(nèi)未出現(xiàn)降解現(xiàn)象，但在甲醇中降解較快，由圖1所示，在12 h內(nèi)，胺鮮酯約降解至原含量的2/5。因此，該方法選定標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋溶劑為丙酮。

1.4.3.2 不同溶劑對樣品的提取效果。分別使用甲醇、丙酮對不同肥料樣品進(jìn)行提取，經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)，當(dāng)樣品檢測量較少時，甲醇、丙酮2種提取溶劑對樣品的重復(fù)性、加標(biāo)回收率均可滿足要求;當(dāng)樣品量較多時（連續(xù)進(jìn)樣約5 h后），使用甲醇提取的樣品會出現(xiàn)重復(fù)性差、回收率降低、儀器進(jìn)樣針發(fā)生堵塞、儀器廢液瓶中出現(xiàn)結(jié)晶的現(xiàn)象，需更換儀器進(jìn)樣針、分流襯管后才能重新達(dá)到方法檢測要求。以丙酮提取的不同肥料樣品，經(jīng)連續(xù)48 h進(jìn)樣檢測后，重復(fù)性、回收率仍可滿足要求，而且儀器進(jìn)樣針、分流襯管仍可正常運行，廢液瓶中無結(jié)晶出現(xiàn)，可以達(dá)到批量檢測的目的。因此，最終選取提取溶劑為丙酮。

1.4.4 色譜條件選擇。通過對起始溫度、進(jìn)樣口溫度、升溫速率、分流比等色譜條件的篩選、測試，根據(jù)在最短時間內(nèi)獲得最佳分離效果的原則，得色譜分析條件如下。色譜柱：30 m×0.32 mm（i.d.）石英毛細(xì)管，內(nèi)壁涂HP-5（5%二苯基+95%二甲基聚硅氧烷），膜厚0.25 μm;柱室溫度（程序升溫）：初始溫度60 ℃，保持1 min，以20 ℃/min升到300 ℃，保持3 min;氣化室溫度：250 ℃;檢測器溫度：300 ℃;氣體流量（mL/min）：載氣 （N2） 1.5、氫氣30、空氣300、補(bǔ)償氣（N2）25;分流比：2∶1;進(jìn)樣量：1 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 系統(tǒng)適用性 按照上述色譜條件，對胺鮮酯、多效唑、烯效唑3種植物生長調(diào)節(jié)劑的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行上機(jī)測試，待測植物生長調(diào)節(jié)劑的分離情況見圖2。由圖2所示，胺鮮酯、多效唑、烯效唑3種植物生長調(diào)節(jié)劑的保留時間分別為7.481、11.220、11.493 min，其色譜峰與相鄰色譜峰分離度較好，符合氣相色譜法定量分析要求。

2.2 線性范圍、相關(guān)系數(shù)和檢出限 配制5～100 mg/L一系列不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按照“1.4”方法和條件進(jìn)行測定，以色譜峰峰面積為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的溶液濃度為橫坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得待測植物生長調(diào)節(jié)劑的線性方程及相關(guān)系數(shù);檢出限基于實際空白樣品中添加胺鮮酯、多效唑、烯效唑標(biāo)準(zhǔn)品分析結(jié)果，以3倍信噪比計算對應(yīng)的濃度為方法檢出限，結(jié)果見表1。由表1可知，3種植物生長調(diào)節(jié)劑在5～100 mg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，能夠達(dá)到試驗室檢測分析要求。

2.3 方法重復(fù)性 分別稱取含有胺鮮酯、多效唑、烯效唑的3批次樣品，每批次樣品稱取6份，按該方法進(jìn)行樣品前處理，采用同樣的色譜條件，對6份樣品連續(xù)進(jìn)樣，結(jié)果見表2。由表2可知，方法重復(fù)性符合一般色譜方法驗證的要求。

2.4 方法的加標(biāo)回收率 稱取肥料樣品（約0.2 g），分別設(shè)高、中、低3個添加水平，每個水平6個重復(fù)。按該方法進(jìn)行樣品前處理，采用同樣的色譜條件依次對樣品進(jìn)行檢測，分別計算高、中、低3個濃度的加標(biāo)回收率，結(jié)果見表3。由表3可知，3種植物生長調(diào)節(jié)劑在不同添加水平的平均回收率在80.6%～97.1%，精密度（RSD）為0.92%～5.67%，回收率及精密度均符合檢測分析要求，能夠滿足肥料產(chǎn)品中植物生長調(diào)節(jié)劑的檢測需求。

2.5 肥料樣品檢測 應(yīng)用該試驗建立的處理方法和條件，對市場上100批次肥料樣品進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示，3種植物生長調(diào)節(jié)劑均有檢出，其中胺鮮酯的檢出率最高，為11%，說明在肥料中違禁添加植物生長調(diào)節(jié)劑的現(xiàn)象普遍存在。

3 結(jié)論利用該試驗建立的方法檢測水溶肥料、有機(jī)肥料等多種肥料產(chǎn)品中植物生長調(diào)節(jié)劑含量，操作簡單快捷、結(jié)果準(zhǔn)確，可以推廣到藥肥產(chǎn)品中植物生長調(diào)節(jié)劑的檢測，能夠為促進(jìn)肥料行業(yè)健康發(fā)展和政府的肥料監(jiān)管工作提供技術(shù)依據(jù)。

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