段靜怡 王禎 杜紅慧

摘要 以灰樹花菌株Gr0001+3為供試菌株，將菌絲長(zhǎng)速、長(zhǎng)勢(shì)、原基分化速度等作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選優(yōu)良基質(zhì)配方和松緊度。結(jié)果表明，基質(zhì)配方為 75%棉籽殼、8% 麥麩、15% 玉米粉、1% 石膏、1% 白糖、含水量在 65%，且使用對(duì)折寬度 17 cm 的栽培袋在裝料量濕重 880 g /袋、裝料高度 16 cm 下菌絲的長(zhǎng)速、長(zhǎng)勢(shì)、原基分化效果最佳。在此條件下灰樹花菌絲生長(zhǎng)最好，可以在生產(chǎn)中推廣使用。

關(guān)鍵詞 灰樹花;基質(zhì)松緊度;基質(zhì)配方;菌絲生長(zhǎng)

中圖分類號(hào) S656 ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2020）18-0052-04

Abstract Grifola frondosa strain Gr0001+3 was used as the tested strain，and the mycelial growth rate，growth vigor，and primordium differentiation rate were used as evaluation indicators to screen good matrix formulations and tightness.The results showed that the substrate formula was ?75% cotton seed shellis，8% wheat bran，15% corn flour，1% gypsum，1% sugar，65% moisture content，and a cultivation bag with a folded width of 17 cm. The growth rate，vigor，and primordium differentiation effect of mycelium at 880 g/bag and a filling height of 16 cm is the best.Grifola frondosa mycelium grew ?best under these conditions and can be used in production.

Key words Grifola frondosa;Matrix tightness;Matrix formulation;Mycelia growth

灰樹花（Grifola frondosa）又名貝葉多孔菌、栗子蘑、云蕈、蓮花菌等，隸屬于擔(dān)子菌綱、多孔菌目、多孔菌科、多孔菌屬[1]。灰樹花子實(shí)體肉質(zhì)柔軟，脆如玉蘭，味如雞絲，口感鮮美，香味獨(dú)特，且營(yíng)養(yǎng)豐富，是高檔珍稀食用菌;同時(shí)，灰樹花還是十分珍貴的藥用真菌，其多糖成分是有效的免疫調(diào)節(jié)劑，可以同時(shí)提高機(jī)體的非特異性免疫和特異性免疫調(diào)節(jié)，具有廣闊的開發(fā)應(yīng)用前景[2-4]?；覙浠ㄟM(jìn)行工廠化栽培始于日本 20 世紀(jì) 80 年代，目前日本是灰樹花主要生產(chǎn)大國(guó)，且近年來灰樹花消費(fèi)量位居食用菌消費(fèi)量第三，僅次于金針菇和香菇，但仍供不應(yīng)求[5]。我國(guó)對(duì)灰樹花的研究起步較晚，由于在灰樹花工廠化栽培生產(chǎn)中，一直存在開片率低、開片不齊和朵型差等問題，灰樹花工廠化栽培研究規(guī)?；?、標(biāo)準(zhǔn)化水平依然較低[6]。

此外，栽培基質(zhì)是影響食用菌栽培過程產(chǎn)量和效益的主要因素之一[7]。目前，灰樹花栽培基質(zhì)主料主要是木屑及棉籽殼，但由于食用菌行業(yè)的快速發(fā)展，木屑及棉籽殼資源供不應(yīng)求，導(dǎo)致食用菌生產(chǎn)成本也不斷提高，造成食用菌從業(yè)者有一定經(jīng)濟(jì)壓力[8]。如何選擇新的合適的基質(zhì)及配比、降低生產(chǎn)成本、提高產(chǎn)量及經(jīng)濟(jì)效益的研究將對(duì)灰樹花工廠化栽培水平的提高起決定性作用[9]。為充分發(fā)揮其價(jià)值，更好地進(jìn)行灰樹花工廠化設(shè)施栽培，提高灰樹花的產(chǎn)量及質(zhì)量，筆者對(duì)其菌絲生長(zhǎng)階段的生物學(xué)特性進(jìn)行研究，旨在為灰樹花工廠化設(shè)施栽培提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 供試灰樹花菌株 Gr0001+3 來自福建省食用菌種質(zhì)資源保藏管理中心。母種培養(yǎng)基配方：馬鈴薯 200 g、葡萄糖 20 g、瓊脂 20 g、水 1 000 mL、pH自然?；A(chǔ)培養(yǎng)基配方：木屑 45%、棉籽殼 30%、麥麩 8%、玉米粉 15%、石膏 1%、糖 1%、含水量 65%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 針對(duì)基質(zhì)配方中主料配比和基質(zhì)松緊度，在含水量 65% 下設(shè)計(jì) 2 因素的完全隨機(jī)試驗(yàn)，具體因素與水平見表 1，共設(shè) 15 個(gè)處理，每個(gè)處理 12 袋。每個(gè)處理 3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù) 4 袋，共計(jì) 180 袋。

A因素：采用對(duì)折寬度17 cm的栽培袋，裝料量統(tǒng)一控制在濕重880 g/袋，按試驗(yàn)設(shè)計(jì)分別控制3個(gè)裝料高度14、15、16 cm，形成3個(gè)水平的裝料濕重松緊度。

B因素：用常規(guī)的栽培料基礎(chǔ)配方，即木屑45%、棉籽殼30%、麥麩8%、玉米粉15%、石膏1%、糖1%、含水量65%，在不改變木屑和棉籽殼總干重占比75%的前提下，按試驗(yàn)設(shè)計(jì)設(shè)定木屑和棉籽殼的干重比例分別為4∶0、3∶1、2∶2、1∶3、0∶4共5個(gè)水平，其他材料配比不變。

1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法 菌絲長(zhǎng)滿時(shí)間：全袋的基質(zhì)均出現(xiàn)白色菌絲所需要的天數(shù)。菌絲全白時(shí)間：菌絲長(zhǎng)滿全袋后到菌絲全面發(fā)白所需要的天數(shù)。菌絲墊出現(xiàn)時(shí)間：菌絲轉(zhuǎn)白后到袋口菌絲變成平整光滑，出現(xiàn)組織化現(xiàn)象所需要的天數(shù)。菌絲墊皺縮時(shí)間：菌絲墊形成后到袋口菌絲墊表面出現(xiàn)明顯的褶皺，并伴有分泌出細(xì)小的淡黃色水珠所需要的天數(shù)。形成珊瑚狀時(shí)間：菌絲墊形成后到袋口處菌絲墊皺縮到凹凸分明，且袋口有大量的水珠所需要的天數(shù)。

1.4 數(shù)據(jù)分析及統(tǒng)計(jì)方法 利用SPSS 19.0軟件、DPS及Microsoft Excel工作表對(duì)數(shù)據(jù)及圖表進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析[10]。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌絲滿袋時(shí)間

由圖1可知，A3B4處理菌絲長(zhǎng)滿時(shí)間最短，僅19.3 d，與A3B1（19.5 d）、A2B3（20.0 d）和A2B4（20.0 d）、A1B3（20.1 d）、A1B4（20.2 d）、A2B1（20.4 d）差異不顯著。

進(jìn)行F測(cè)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)B因素配方對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響最大。根據(jù)試驗(yàn)設(shè)定木屑和棉籽殼的干重比例進(jìn)行比較，結(jié)果見圖2，由圖2可知，B因素中B4處理滿袋時(shí)間最短，為19.8 d，其次是B3處理（20.2 d），兩者差異不顯著;但B4處理菌絲滿袋時(shí)間顯著短于B1處理，與B2處理、B5處理的滿袋時(shí)間有顯著差異;說明B4處理即在木屑與棉籽殼1∶3 等量干重混合配料下最有利于灰樹花菌絲生長(zhǎng)，滿袋所需時(shí)間也最短。

2.2 菌絲全白時(shí)間

由圖3可知，A2B5處理時(shí)間最短，達(dá)1.7 d/袋，極顯著短于用時(shí)第二短的A3B3（2.9 d）和第三的A3B2（3.0 d）。

進(jìn)行F測(cè)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)B因素配方對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響最大。由圖4可知，B1、B2、B3處理菌絲全白時(shí)間無(wú)顯著差異，約3.24 d;但B4處理菌絲生長(zhǎng)到全白時(shí)間最長(zhǎng)，達(dá)3.78 d，B5處理菌絲全白時(shí)間僅2.56 d，與其他處理差異顯著，表明這2種主料配比對(duì)菌絲全白有顯著影響，其中B5處理菌絲全白用時(shí)最短。說明在菌絲全白時(shí)期，在主料全為棉籽殼條件下菌絲生長(zhǎng)最快最好。

2.3 菌絲墊形成時(shí)間

由圖5可知，A1B2處理形成菌絲墊時(shí)間最短，僅1.6d，但與A1B5（1.8d）、A3B5和A2B2（2.0d）、A1B1（2.0 d）3個(gè)處理并無(wú)顯著差異。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行F檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)A因素和B因素皆對(duì)形成菌絲墊有影響。由圖6和圖7可知，A1B2處理形成菌絲墊時(shí)間最短，平均時(shí)間為1.6 d，雖然與A1B5（1.8 d）、A3B5（1.8 d）和A2B2（2.0 d）、A1B1（2.0 d）無(wú)極顯著差異，但其中有一組重復(fù)的平均時(shí)間為1.2 d，顯著高于其他處理，說明A1B2的配方有利于菌絲墊的提前形成;考察不同處理對(duì)菌絲皺縮達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)所需時(shí)間的影響，并進(jìn)行顯著性分析，結(jié)果見圖7。由圖7可知，各處理菌絲皺縮達(dá)標(biāo)準(zhǔn)所需時(shí)間差異達(dá)顯著水平，其中A1B5、A3B5差異極顯著且該條件下所需生長(zhǎng)時(shí)間最短，說明B5處理即在主料全為棉籽殼時(shí)，更有利于灰樹花的菌絲墊生長(zhǎng)，菌絲墊形成所需時(shí)間也最短，有利于菌絲皺縮達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，因此推測(cè)可能是棉籽殼顆粒大小和徑度對(duì)菌絲皺縮影響較為顯著。

2.4 菌絲皺縮時(shí)間

由圖8可知，各處理間菌絲皺縮達(dá)標(biāo)準(zhǔn)所需時(shí)間差異達(dá)顯著水平，其中A1B5、A3B5差異極顯著，且該條件下所需生長(zhǎng)時(shí)間最短。進(jìn)一步進(jìn)行F測(cè)驗(yàn)，結(jié)果表明，B因素對(duì)菌絲皺縮生長(zhǎng)時(shí)間影響較大。由圖9可知，B因素中B5處理后菌絲皺縮時(shí)間最短為3.9 d，其次是B4（7.2 d），兩者差異顯著;B5的菌絲皺縮時(shí)間顯著短于B1、B2、B3、B4，與B1、B2、B3呈極顯著差異;說明B5處理即在主料全為棉籽殼下最有利于灰樹花的菌絲皺縮生長(zhǎng)，菌絲皺縮所需時(shí)間也最短。

2.5 珊瑚狀形成時(shí)間

由圖10可知，各處理間形成珊瑚狀的時(shí)間差異達(dá)顯著水平，A1B1與A3B5差異極顯著，其中A1B1處理形成珊瑚狀所需時(shí)間最短，達(dá)0.66 d/袋。對(duì)其進(jìn)行F檢驗(yàn)，結(jié)果見圖11。由圖11可知，A因素中A1菌絲形成珊瑚狀時(shí)間最短為3.2 d，其次是A2和A3，兩者差異顯著;說明A1即在裝料高度為14 cm時(shí)最有利于灰樹花菌絲形成珊瑚狀，形成珊瑚狀所需時(shí)間也最短。由于A×B互作差異顯著，即基質(zhì)主料配比（B因素）和基質(zhì)含水量（A因素）的組合，可能將有利于進(jìn)一步縮短形成珊瑚狀的時(shí)間。由圖10可知，A1B1形成珊瑚狀時(shí)間僅0.7 d，證實(shí)了這互作的效應(yīng)。

3 討論

在灰樹花的5個(gè)生長(zhǎng)時(shí)間節(jié)點(diǎn)中[11]，每個(gè)階段皆有一個(gè)最佳處理最利于菌絲生長(zhǎng)：A3B4處理后菌絲滿袋用時(shí)最短;A2B5處理后，菌絲全白用時(shí)最短;菌絲墊生長(zhǎng)階段，A1B2是最佳處理;且菌絲皺縮期間，基質(zhì)主料配比單因素影響最顯著;A1B1處理后，形成珊瑚狀時(shí)期該階段菌絲長(zhǎng)速、長(zhǎng)勢(shì)最佳。綜合全程菌絲生長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行對(duì)比，A2B5處理菌絲生長(zhǎng)時(shí)間最短，最利于菌絲生長(zhǎng)。而從松緊度對(duì)灰樹花Gr0001+3品種的菌絲生長(zhǎng)速度及長(zhǎng)勢(shì)分析，菌絲滿袋時(shí)，裝袋16 cm的松緊度最佳;在菌絲全白和菌絲墊生長(zhǎng)時(shí)期，裝袋15 cm 高度的松緊度最利于菌絲生長(zhǎng);而在菌絲皺縮期間對(duì)于松緊度無(wú)特殊要求，但在形成珊瑚狀時(shí)期14 cm高度的松緊度利于其生長(zhǎng)。綜合分析，松緊度對(duì)菌絲生長(zhǎng)完整過程的影響是隨著菌絲的生長(zhǎng)決定的，松緊度越緊越好;這與王明才等[12]的松緊度結(jié)果是相符合的，但考慮在菌絲生長(zhǎng)前期，栽培料疏松更有利于菌絲生長(zhǎng)，所以需要在15～16 cm驗(yàn)證最佳菌絲生長(zhǎng)高度，需要進(jìn)一步試驗(yàn)檢測(cè)。

從基質(zhì)主料配比對(duì)灰樹花5個(gè)生長(zhǎng)時(shí)間節(jié)點(diǎn)分析，在菌絲滿袋時(shí)期，栽培料基質(zhì)主料配比（木屑∶棉籽=1∶3）最有利于該時(shí)期菌絲生長(zhǎng);菌絲全白時(shí)期若基質(zhì)主料配比為木屑∶棉籽=0∶4，在這個(gè)時(shí)期菌絲生長(zhǎng)更加迅速;在菌絲墊生長(zhǎng)、形成珊瑚狀階段與菌絲全白時(shí)期的基質(zhì)主料配比為B5處理，即在主料全為棉籽殼時(shí)菌絲生長(zhǎng)狀態(tài)更佳，生長(zhǎng)速度最快。綜合分析，在整個(gè)菌絲生長(zhǎng)階段，棉籽殼所占基質(zhì)主料比例越高，越利于菌絲生長(zhǎng)，能更快更好地促進(jìn)菌絲的生長(zhǎng)。

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