蔡路兵 翟梅娟 陳曉丹

[摘要] 目的 研究多腫瘤抑制基因P16、細胞增殖核抗原Ki-67表達與直腸癌患者預后的關系。 方法 選擇2016年8月—2018年12月浙江省杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院60例直腸癌患者術后的腫瘤及癌旁正常組織，以免疫組織法檢測P16、Ki-67的表達情況，觀察P16、Ki-67在不同年齡、病理類型、TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移中的陽性率，比較P16、Ki-67陽性患者與陰性患者術后1年的生存情況，通過Spearman系數(shù)分析P16和Ki-67的相關性。 結(jié)果 直腸癌癌組織中P16及Ki-67的陽性率顯著高于癌旁正常組織（P < 0.05）。TNM分期Ⅲ期、高分化程度患者P16、Ki-67陽性率顯著高于TNM分期Ⅱ期、低-中分化患者（P < 0.05）;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Ki-67陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者P16陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（均P < 0.05）。P16陰性患者生存率顯著高于陽性患者（P < 0.05）。Ki-67陽性患者1年生存率顯著低于Ki-67陰性患者（P < 0.05）。經(jīng)相關性分析P16和Ki-67直腸癌組織中的表達無相關性（r = 0.157，P = 0.461）。 結(jié)論 直腸癌癌組織內(nèi)P16和Ki-67水平表達與直腸癌臨床病理特征密切相關，可能為直腸癌的臨床治療及預后評估提供參照。

[關鍵詞] 多腫瘤抑制基因;細胞增殖核抗原;直腸癌;預后;預測

[中圖分類號] R735.34 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-7210（2020）08（b）-0024-04

[Abstract] Objective To investigate the relationship between the expression of multipletumor-suppressor gene1 P16 and proliferating cellnuclear antigen Ki-67 and the prognosis of rectal cancer patients. Methods From August 2016 to December 2018， postoperative tumors and adjacent normal tissues of 60 patients with rectal cancer were selected from the First People′s Hospital of Xiaoshan District of Hangzhou， Zhejiang Province. Immunohistochemical method was used to detect the expression of P16 and Ki-67. The positive rates of P16 and Ki-67 in different ages， pathological types， TNM stages， degree of differentiation and lymph node metastasis were observed. The survival of P16 and Ki-67 positive patients and negative patients one year after surgery was compared. Finally， the correlation between P16 and Ki-67 was analyzed by Spearman coefficient. Results The positive rates of P16 and Ki-67 in colorectal cancer tissues were significantly higher than that in paracancer normal tissues （P < 0.05）. TNM staging in patients with stage Ⅲ， high degree of differentiation P16 and Ki-67 were significantly higher than that of TNM stage Ⅱ， low-differentiation in patients （P < 0.05）; the Ki-67 positive rate of patients with lymph node metastasis was significantly higher than that of patients without lymph node metastasis， and the P16 positive rate of patients with lymph node metastasis was significantly higher than that of patients without lymph node metastasis（all P < 0.05）. The survival rate of P16 negative patients was significantly higher than that of positive patients （P < 0.05）. The one-year survival rate of Ki-67 positive patients was significantly lower than that of negative patients （P < 0.05）. There was no correlation between the expression of P16 and Ki-67 in rectal cancer tissues （r = 0.157， P = 0.461）. Conclusion The expression levels of P16 and Ki-67 in rectal cancer tissues are closely related to the clinicopathological features of rectal cancer， which may provide reference for the clinical treatment and prognosis evaluation of rectal cancer.

[Key words] Multiple tumor suppressor gene; Cell proliferating nuclear antigen; Rectal cancer; Prognosis; Predict

直腸癌是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，近年來我國生活水平的不斷提高以及人口老齡化加劇，直腸癌發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢[1-2]。目前直腸癌治療多以外科手術為主，但因為直腸癌位置低深入盆腔，解剖關系較復雜，導致術后復發(fā)率高，預后情況不容樂觀[3]。過去有關直腸癌預后的研究多集中在臨床、病理指標方面，隨著分子生物學的發(fā)展，越來越多的分子生物學標志物與腫瘤預后關系研究已成為趨勢[4]。多腫瘤抑制基因P16是一種蛋白標志物，細胞增殖核抗原Ki-67是一種被發(fā)現(xiàn)于增殖細胞的核抗原。本研究選擇浙江省杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院（以下簡稱“我院”）60例直腸癌患者為研究對象，探討活檢組織內(nèi)P16、Ki-67表達與直腸癌患者預后的關系，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2016年8月—2018年12月60例直腸癌患者為研究對象，其中男39例，女21例;年齡34～79歲，平均（46.23±3.34）歲;腫瘤直徑2～5 cm，平均（3.42±1.21）cm;TNM分期：Ⅱ期26例，Ⅲ期34例;分化程度：高分化43例，中分化5例，低分化12例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例。

1.2 納入標準

①經(jīng)《結(jié)直腸癌診療規(guī)范（2010年版）》[5]確診為直腸癌;②18～65歲;③患者及其家屬知情并簽署知情同意書。

1.3 排除標準

①妊娠期或哺乳期婦女;②心、肝、腎等器官存在嚴重器質(zhì)性障礙或其他惡性腫瘤者;③合并其他疾病同期需行其他手術治療者;④患有精神方面疾病不能配合治療者。

1.4 治療方法

60例患者均在手術結(jié)束后取腫瘤及癌旁正常組織檢測P16及Ki-67，其中癌旁組織于大于腫瘤2 cm處取材，P16及Ki-67均行免疫組化SP法檢測，試劑盒均由上海心語生物科技有限公司提供，檢測儀器：意大利BT 3000 plus全自動生化分析儀。

1.5 觀察指標

①直腸癌癌組織與癌旁組織P16及Ki-67免疫組化SP法檢查結(jié)果比較，對染色結(jié)果進行判定：P16以細胞核或細胞漿中棕黃色為陽性，Ki-67以細胞核褐色為陽性。②觀察P16及Ki-67在不同年齡、病理類型、腫瘤直徑、TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移中的陽性率。③對患者進行1年的隨訪（返院復查或電話隨訪），比較P16、Ki-67陽性和陰性患者生存情況。

1.6 統(tǒng)計學方法

選用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行處理，計量資料采用均數(shù)±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用例數(shù)和百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。采取Kaplan-Meier法繪制生存曲線，采取Log-Rank檢驗，通過Spearman系數(shù)對P16和Ki-67進行相關性分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 直腸癌癌組織與癌旁組織P16、Ki-67檢查結(jié)果比較

直腸癌癌組織中P16、Ki-67的陽性率顯著高于癌旁正常組織（P < 0.05）。見表1、圖1（封三）。

2.2 P16、Ki-67在直腸癌癌組織中的表達與臨床病理特征的關系

TNM分期Ⅲ期、高分化程度患者P16、Ki-67陽性率顯著高于TNM分期Ⅱ期、低-中分化患者（P < 0.05）;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Ki-67陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者P16陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（均P < 0.05）。見表2。

2.3 P16陽性和陰性患者生存情況比較

患者均無失訪，其中P16陽性患者1年死亡25例，生存率為48.98%（24/49）;P16陰性患者1年死亡1例，生存率為90.91%（10/11）。兩組患者生存情況采取Log-Rank檢驗，P16陰性患者生存率顯著高于陽性患者，Log-Rank = 5.022，P = 0.025。見圖2。

2.4 ?Ki-67陽性和陰性患者生存情況比較

患者均無失訪，其中Ki-67陽性患者1年死亡26例，生存率為49.02%（25/51）;Ki-67陰性患者1年死亡1例，生存率為88.89%（8/9）。兩組患者生存情況采取Log-Rank檢驗，Ki-67陽性患者生存率顯著低于陰性患者，Log-Rank = 3.763，P = 0.042。見圖3。

2.5 P16與Ki-67表達的關系

Spearman等級相關分析示，P16和Ki-67直腸癌中的表達無相關性（r = 0.157，P = 0.461）。

3 討論

結(jié)腸癌是發(fā)生在齒狀線至直腸乙狀結(jié)腸交界處的癌，是消化道常見的惡性腫瘤之一，其病因仍不明確，可能與社會環(huán)境、飲食習慣、遺傳因素等有關[6-9]。早期直腸癌多數(shù)無癥狀，少數(shù)可能會出現(xiàn)血便、膿血便、腹瀉便秘等，而晚期則會排便梗阻，危及生命健康[10-11]。目前直腸癌治療主要以外科手術為主，但在預后評估中卻缺乏相應的指標為臨床提供指導。

本研究結(jié)果顯示，直腸癌癌組織中P16和Ki-67的陽性率高于癌旁正常組織，提示兩指標對直腸癌有較明顯的標志性作用。P16調(diào)控細胞周期，能阻止細胞由G1期進入S期，其陽性率隨直腸癌惡性程度增高呈上升趨勢[12]。Ki-67抗原表達越高，其腫瘤細胞增殖活性也會升高，它最初表達于G1期，并會逐漸增加至S期和G2期，并于M期實現(xiàn)最高值，在分裂晚期逐漸消失，因此能將細胞增殖活性進行特異性展示[13-14]。與孫旭凌等[15]研究結(jié)果基本相符。

TNM分期Ⅲ期、高分化程度患者P16、Ki-67陽性率顯著高于TNM分期Ⅱ期、低-中分化患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Ki-67陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，P16陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，提示P16和Ki-67可能與TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關系密切，Ki-67可能會使同質(zhì)性細胞間的黏附力降低，使腫瘤血管生成加快，從而促進直腸癌轉(zhuǎn)移，細胞周期紊亂導致細胞持續(xù)增殖[16-17]。P16表達與直腸癌惡性程度密切相關，提示越高程度的直腸癌其預后也越差。與王曉平等[18]研究結(jié)果基本相符。在預后觀察中Ki-67陽性患者生存情況不容樂觀，可能是細胞遷移和體外侵襲影響上皮細胞黏蛋白合成，刺激癌細胞增長，侵襲性增加，導致病情復發(fā)和轉(zhuǎn)移發(fā)生較快，生存率下降[19-22]。

經(jīng)相關性分析，直腸癌癌組織的P16和Ki-67表達無相關性，直腸癌生物學特性及其預后與直腸癌有所不同，但二者在腫瘤細胞增殖中有著重要作用，都與直腸癌病情程度密切相關[23-25]。

綜上，P16、Ki-67可能對直腸癌預后評估具有一定的指導意義，值得臨床重視。

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（收稿日期：2020-01-07）