李興東, 高宏建, 趙虹

近年來,隨著人們飲食結(jié)構(gòu)及環(huán)境變化,結(jié)直腸癌發(fā)病率呈升高趨勢,且發(fā)病年齡趨于年輕化。臨床中,手術(shù)切除以及術(shù)后聯(lián)合放化療是治療結(jié)直腸癌的有效方案,尤其是對(duì)于早期患者,可明顯延長患者的生存期[1]。不過,由于早期無明顯癥狀,大多數(shù)結(jié)直腸癌患者確診時(shí)已經(jīng)處于中晚期,錯(cuò)過了最佳治療時(shí)機(jī)[2]。結(jié)直腸癌的發(fā)生及發(fā)展是一個(gè)多步驟、多階段及多因素參與的過程,術(shù)后轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)是患者死亡的重要原因,由于對(duì)結(jié)直腸癌發(fā)生及發(fā)展的機(jī)制尚未完全明確,目前仍然缺少有效的治療靶點(diǎn)及預(yù)測的分子標(biāo)志物[3-4]。白介素-17F(IL-17F)是IL-17細(xì)胞因子家族中的一個(gè)重要成員,主要是由Th17細(xì)胞分泌。IL-17F屬于促炎細(xì)胞因子,在炎癥反應(yīng)中起重要作用,可加劇炎性病理的發(fā)展。本研究分析了IL-17F在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平與患者臨床病理特征及其預(yù)后的關(guān)系,旨在尋找結(jié)直腸癌早期診斷的相關(guān)指標(biāo)。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2015年1月至2017年1月沈陽市肛腸醫(yī)院手術(shù)切除的86例結(jié)直腸癌組織標(biāo)本和癌旁組織標(biāo)本。入選標(biāo)準(zhǔn)：①均為初治；②手術(shù)前未接受放療、化療或免疫治療；③一般資料完整；④術(shù)后未失訪。排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前接受了相關(guān)抗腫瘤治療；②合并其他部位惡性腫瘤。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)研究同意，并與患者及家屬簽署知情同意書。86例患者中，男性54例，女性32例；年齡42～79歲，平均年齡(63.29±6.74)歲；TNM分期：Ⅰ、Ⅱ期33例，Ⅲ、Ⅳ期53例；浸潤至漿膜層47例，未浸潤至漿膜層39例；高分化35例，中、低分化51例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移52例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例。

1.2 方法 DAB顯色劑與枸櫞酸緩沖液購自上海柏根生物公司,VEGF鼠抗人多克隆抗體、IL-17F鼠抗人單克隆抗體均購自福州邁新生物制劑有限公司。86例患者的結(jié)直腸癌組織標(biāo)本和癌旁組織標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定及石蠟包埋,通過免疫組化法測定結(jié)直腸癌組織及癌旁組織中的VEGF、IL-17F的表達(dá)情況。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):細(xì)胞未染色計(jì)為0分,呈淡黃色計(jì)為1分,呈棕色計(jì)為2分,呈棕褐色計(jì)為3分。陽性細(xì)胞所占比例評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):所占比例≤5計(jì)為0分,所占比例在6%～25%之間計(jì)為1分,所占比例在26%～50%之間計(jì)為2分,所占比例在51%～75%之間計(jì)為3分,所占比例大于76%計(jì)為4分。免疫組化結(jié)果陽性判斷標(biāo)準(zhǔn):染色強(qiáng)度計(jì)分與陽性細(xì)胞所占比例計(jì)分相乘的結(jié)果,結(jié)果≤3分為陰性,3分以上為陽性[5]。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察結(jié)直腸癌組織中IL-17F表達(dá)水平與VEGF水平的相關(guān)性。隨訪至2019年1月,主要通過門診復(fù)查,比較不同臨床病理特征、預(yù)后患者IL-17F的表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料以率表示,采用χ2檢驗(yàn),相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析,生存分析采用Kaplan-Meier法,采用Log-rank檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IL-17F與VEGF表達(dá)情況 見圖1,IL-17F(圖1A)與VEGF(圖1B)均主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì),細(xì)胞核表達(dá)均較少,在結(jié)直腸癌細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞中均有表達(dá),經(jīng)DAB染色均呈棕黃色。

圖1 免疫組化檢測結(jié)直腸癌組織中IL-17F(1A)與VEGF(1B)的表達(dá)(DAB ×40)

2.2 結(jié)直腸癌與癌旁組織IL-17F、VEGF表達(dá)水平比較 結(jié)直腸癌組織中,IL-17F表達(dá)陽性率為43.02%,低于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);結(jié)直腸癌組織中,VEGF表達(dá)陽性率為82.56%,高于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示,IL-17F表達(dá)水平與VEGF表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.689,P<0.05)。

表1 結(jié)直腸癌與癌旁組織IL-17F、VEGF陽性表達(dá)率比較[例(%)]

2.3 不同臨床病理特征患者IL-17F表達(dá)水平比較

不同分化程度、浸潤深度以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者之間IL-17F陽性表達(dá)率比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而不同年齡、性別、TNM分期、發(fā)病部位患者之間IL-17F陽性表達(dá)率比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

2.4 不同IL-17F表達(dá)情況患者預(yù)后比較 截至2019年10月,37例IL-17F陽性表達(dá)者中,死亡4例,生存率為89.19%(33/37),中位生存時(shí)間為26個(gè)月;49例IL-17F陰性表達(dá)患者中,死亡15例,生存率為69.39%(34/49),中位生存時(shí)間為21個(gè)月。IL-17F陽性表達(dá)患者生存率高于IL-17F陰性表達(dá)者(P=0.027),中位生存時(shí)間亦高于IL-17F陰性表達(dá)者(P<0.001),見圖1。

圖1 不同IL-17F表達(dá)水平患者術(shù)后生存曲線

3 討論

臨床相關(guān)研究顯示[5-6],炎性反應(yīng)存在于惡性腫瘤的微環(huán)境中,促進(jìn)了惡性腫瘤遷徙以及增殖,與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系。在惡性腫瘤微環(huán)境中的促炎因子比較多,包括腫瘤壞死因子-α、IL-1β、IL-8以及IL-6等,均可以誘發(fā)炎性反應(yīng),而巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞等趨化炎性細(xì)胞分泌細(xì)胞因子,對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞增殖起到促進(jìn)作用,誘導(dǎo)免疫耐受,同時(shí)分泌VEGF等促血管生成因子,對(duì)新生血管形成起到了調(diào)控作用[7-8]。Th17細(xì)胞為惡性腫瘤免疫調(diào)節(jié)的重要細(xì)胞,所分泌的IL-17是介導(dǎo)惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要炎性因子[9]。IL-17F為IL-17家族主要成員之一,其與IL-17A的同源性最高,在炎性反應(yīng)以及促進(jìn)炎性細(xì)胞因子分泌等方面具有類似的功能[10]。

本研究中,通過對(duì)86例結(jié)直腸癌患者手術(shù)切除石蠟標(biāo)本切片進(jìn)行免疫組化檢測發(fā)現(xiàn),結(jié)直腸癌組織標(biāo)本中IL-17F陽性表達(dá)率低于癌旁組織,VEGF陽性表達(dá)率高于癌旁組織,且在不同臨床病理特征患者之間比較發(fā)現(xiàn),不同分化程度、浸潤深度以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者之間IL-17F陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其中中低分化腫瘤患者IL-17F陽性表達(dá)率低于高分化者,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,浸潤至漿膜層者低于未至漿膜層者。研究結(jié)果提示,IL-17F表達(dá)水平與結(jié)直腸癌的發(fā)生及發(fā)展可能有一定關(guān)系。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)[11-12],在毛細(xì)血管的生成實(shí)驗(yàn)當(dāng)中,IL-17F能夠?qū)ρ軆?nèi)皮細(xì)胞的增殖產(chǎn)生明顯抑制作用,可以誘導(dǎo)靶細(xì)胞分泌IL-2、轉(zhuǎn)化生長因子-β以及單核細(xì)胞趨化蛋白1等細(xì)胞因子,進(jìn)而抑制血管生成。盛偉華等[13]的研究發(fā)現(xiàn),IL-17F具有抑制VEGF及血管生成素-1表達(dá)的作用。相關(guān)結(jié)腸癌以及肝癌動(dòng)物模型的研究亦發(fā)現(xiàn),IL-17F可以下調(diào)VEGF、IL-8等促血管生長因子水平,進(jìn)而發(fā)揮抑制惡性腫瘤新生血管形成的作用[14-15]。本研究中發(fā)現(xiàn),在結(jié)直腸癌組織中IL-17F表達(dá)水平與VEGF呈負(fù)相關(guān)性。因此,IL-17F可能是通過下調(diào)VEGF水平抑制新生血管形成,進(jìn)而抑制結(jié)直腸癌的發(fā)生及發(fā)展。

近年來,雖然結(jié)直腸癌的治療手段已經(jīng)比較成熟,多以根治性切除聯(lián)合放化療或靶向治療等綜合治療為主,不過患者長期生存率依然不高,部分患者在術(shù)后仍然可能出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移[16]。因此,應(yīng)結(jié)合相關(guān)因素對(duì)結(jié)直腸癌患者預(yù)后進(jìn)行早期判斷,以改善患者預(yù)后。通過術(shù)后隨訪發(fā)現(xiàn),存活結(jié)直腸癌患者IL-17F陽性表達(dá)率高于死亡患者,IL-17F陽性表達(dá)患者生存率、中位生存時(shí)間均高于IL-17F陰性表達(dá)患者,提示IL-17F表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者預(yù)后有密切關(guān)系,IL-17F低表達(dá)患者預(yù)后相對(duì)較差。

綜上所述, IL-17F與結(jié)直腸癌預(yù)后密切相關(guān),可抑制結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展。本研究的不足之處在于樣本量不夠大,且為回顧性研究,仍需要大樣本、多中心的臨床研究,以進(jìn)一步闡明IL-17F在結(jié)直腸癌發(fā)生及發(fā)展中的作用機(jī)制。