姜芳寧 劉光斌

酒鋼醫(yī)院，甘肅 嘉峪關(guān)735100

補血催乳口服液主治氣血兩虧，產(chǎn)后無乳或少乳癥。由黃芪、當(dāng)歸、丹參、漏蘆、路路通等組成，其中黃芪、丹參配伍可以補氣補血，加上路路通、漏蘆通經(jīng)下乳，全方具有氣血雙補、溫經(jīng)通乳的作用。由于黃芪、丹參占全方57.69%，所以分別選取黃芪甲苷、丹參酮ⅡA含量為本口服液提取工藝的評價指標(biāo)，以制備的料液比、煎煮時間及次數(shù)為影響因素，用L9（34）正交試驗優(yōu)選各因素，篩選出最佳的制備工藝。

1 儀器與試藥

Agilent 1260 Series型高效液相色譜儀為美國的安捷倫公司生產(chǎn)，電子分析天平AUW220D為日本的島津公司生產(chǎn)，超聲清洗儀（KMH1-1100U型）。

黃芪甲苷（110781-201717）、丹參酮ⅡA（110766-201520）來自中國食品藥品檢定研究院。甲醇、乙腈用液相色譜試劑，其余試劑用分析純，水用超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 丹參酮ⅡA含量測定［1-2］

2.1.1 色譜條件。Agilent Extend C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱；檢測波長為270nm；流動相：甲醇-水（75∶25），柱溫35℃；流速為1.0mL/min；進(jìn)樣10μL。丹參酮ⅡA的理論塔板數(shù)5000以上。

2.1.2 溶液的制備。制備丹參酮ⅡA對照液：精密稱定供含量測定用2.27mg丹參酮ⅡA，以甲醇溶解配制成9.08μg/mL丹參酮ⅡA對照液。

供試品液的制備：精吸正交試驗得到的補血催乳口服液2mL置于25mL量瓶中，添甲醇至定容，超聲15min，放冷再添甲醇至25mL，搖勻濾過可得。

2.1.3 測定方法。取對照品液與供試品液各10μL，測得各自峰面積用外標(biāo)兩點法計算而得含量。見圖1。

2.2 黃芪甲苷含量測定［3］

2.2.1 色譜條件。Agilent Extend C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱；柱溫30℃；流動相：乙腈-水（36∶64）；流速1.0mL/min；ELSD檢測器為Alltech Model 3300；氮氣流速1.7L/min；漂移管溫度90℃，進(jìn)樣10μL。黃芪甲苷的理論塔板數(shù)3000以上。

2.2.2 溶液的制備。制備對照品液：精密稱定供含量測定用5.357mg黃芪甲苷，用甲醇溶解制成黃芪甲苷儲備液0.5357mg/mL。抽取1mL添甲醇至5mL，則得含0.1071mg/mL黃芪甲苷對照液。

圖1 丹參酮ⅡA含量測定HPLC色譜圖

供試品液的制備［4-5］：精吸補血催乳口服液（正交試驗制得）10mL，以每次20mL正丁醇（水飽和）提4次，將正丁醇提取液合并，以20mL氨試液洗2次，回收正丁醇液并蒸干，用5mL水溶解殘渣，用內(nèi)徑1.5cm、柱高12cm大孔吸附樹脂柱（D101型），以50mL純水洗脫棄掉水液，加30mL乙醇（40%）洗脫并棄掉洗脫液，加80mL乙醇（70%）洗脫，留取洗脫液蒸干，以甲醇溶解到5mL量瓶并定容可得。

2.2.3 測定方法。取對照品液、供試品液各10μL，測得各自峰面積用外標(biāo)兩點法計算而得含量。見圖2。

圖2 黃芪甲苷含量測定HPLC色譜圖

表1 因素水平表

2.3 提取工藝試驗

2.3.1 正交試驗與分析。結(jié)合實際生產(chǎn)和預(yù)試驗結(jié)果，以L9（34）正交試驗對影響補血催乳口服液提取效果的料液比（A）、提取時間（B）、提取次數(shù)（C）進(jìn)行優(yōu)選，以黃芪甲苷與丹參酮ⅡA含量為指標(biāo)評價。按照補血催乳方藥材的組成比，賦予黃芪甲苷、丹參酮ⅡA含量的權(quán)重系數(shù)分別為0.6、0.4，計算公式為：綜合評分=黃芪甲苷含量指標(biāo)／最大指標(biāo)×0.60×100+丹參酮ⅡA含量指標(biāo)／最大指標(biāo)×0.40×100。由方差分析結(jié)果及直觀分析綜合得知，補血催乳口服液提取工藝對丹參酮ⅡA含量的影響主次順序為A＞C＞B，各因素對其影響無統(tǒng)計學(xué)的差異（P＞0.05）；對黃芪甲苷影響順序是C＞A＞B，料液比及提取次數(shù)的影響有統(tǒng)計學(xué)的差異（P＞0.05）。經(jīng)綜合評價，各因素對綜合得分影響排序C＞B＞A，提取時間和提取次數(shù)的影響有統(tǒng)計學(xué)的差異（均為P<0.05），料液比對其影響無統(tǒng)計學(xué)的差異（P＞0.05），綜合節(jié)約資源，確定最佳條件是A1B3C2，即料液比1∶8，提取2次，每次2h。因素水平表（表1），正交試驗結(jié)果（表2），方差分析（表3）。

表2 水提工藝優(yōu)選正交試驗結(jié)果表

表3 方差分析表

表4 水提取工藝驗證結(jié)果表（mg/mL）

2.3.2 工藝驗證試驗。按處方比例稱各飲片，以上述最佳工藝提取，做驗證試驗，試驗結(jié)果見表4。篩選得到的工藝條件A1B3C2即料液比1∶8，提取2次，每次2h，確定為補血催乳口服液最佳水提工藝。

3 討論

根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)查詢，結(jié)合該方各藥的理化性質(zhì)，且為了盡量保留傳統(tǒng)湯劑有效成分，補血催乳口服液采用水提法提取。以黃芪甲苷、丹參酮ⅡA提取量為考察指標(biāo)，二者含量用HPLC法測定，以L9（34）正交試驗對影響補血催乳口服液提取效果的料液比（A）、提取時間（B）、提取次數(shù)（C）進(jìn)行正交試驗，優(yōu)選而得的工藝為：料液比1∶8，提取2次，每次2h。經(jīng)驗證優(yōu)選的提取工藝穩(wěn)定、合理、可行。