，，，，，

（1.南京林業(yè)大學(xué) a.南方現(xiàn)代林業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心；b.林學(xué)院，江蘇 南京 210037；2.江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所，江蘇 南京 210014）

黑莓Rubusspp.原產(chǎn)北美洲，為薔薇科懸鉤子屬灌木狀栽培果樹(shù)[1]，根據(jù)植株的生長(zhǎng)性狀可分為直立、半直立和蔓生3 種栽培類(lèi)型，其果實(shí)因具豐富的營(yíng)養(yǎng)以及獨(dú)特的風(fēng)味，廣受消費(fèi)者喜愛(ài)，是近年風(fēng)靡全球的第3 代水果的代表種類(lèi)。黑莓果實(shí)為聚合漿果，色澤艷麗，富含花色苷、黃酮醇、鞣花酸等酚類(lèi)物質(zhì)，具有較強(qiáng)的抗氧化作用[2]，被聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織認(rèn)定為新型健康食品。

1986年黑莓由江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所引入我國(guó)[3]，目前在全國(guó)各地均有栽培。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們生活水平的提高，黑莓市場(chǎng)前景廣闊，因此篩選一些優(yōu)良品種進(jìn)行種植推廣，對(duì)黑莓的大規(guī)模生產(chǎn)具有積極的作用。本研究以南京地區(qū)栽培的不同類(lèi)型黑莓品種為試驗(yàn)材料，進(jìn)行了生理生化特性的觀察測(cè)定和評(píng)價(jià)，以期為黑莓的栽培管理以及品種選用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究材料

研究材料為不同類(lèi)型的9 個(gè)黑莓品種，即直立類(lèi)型栽培品種‘納瓦荷’（‘Navaho’）、‘喬克多’（‘Choctaw’）、‘薩尼’（‘Shawnee’），半直立類(lèi)型栽培品種‘赫爾’（‘Hull’）、‘三冠王’（‘Triple Crown’）、‘卡伊娃’（‘Kiowa’）、‘寧植4號(hào)’（‘Ningzhi 4’），以及蔓生類(lèi)型栽培品種‘黑布特’（‘Black Butte’）、‘寶森’（‘Boysen’）。各品種均種植于南京市溧水區(qū)白馬科技園區(qū)江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所試驗(yàn)基地內(nèi)。黑莓種植園為丘陵坡地，土壤粘重，pH7.25。種植行株距為2.5 m×1.5 m，日常精細(xì)化管理，肥水充足。采用籬壁式支架，冬季適量修剪。2019年5月，分別選擇每個(gè)品種發(fā)育良好的3 株健康植株，隨機(jī)采集植株1年生營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)枝中部的成熟葉片和當(dāng)季完全成熟、外觀形態(tài)一致、無(wú)機(jī)械損傷的果實(shí)，存放于-80 ℃冰箱中保存待測(cè)。

1.2 生理生化指標(biāo)測(cè)定

1.2.1 葉片葉綠素含量的測(cè)定

葉綠素含量的測(cè)定，采用丙酮浸提法[4]。

1.2.2 果實(shí)主要糖含量相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定

蔗糖、果糖和蔗糖磷酸合成酶活力的測(cè)定，采用南京建成生物公司試劑盒。蔗糖磷酸合成酶活力，以每克組織酶每分鐘催化產(chǎn)生1 mg 蔗糖定義為1 個(gè)酶活性單位，測(cè)定3 次重復(fù)。葡萄糖含量的測(cè)定，采用上海榮盛生物藥業(yè)有限公司試劑盒?？偺呛繛檎崽呛?、果糖含量、葡萄糖含量之和。

1.2.3 果實(shí)主要品質(zhì)指標(biāo)的測(cè)定

固形物含量的測(cè)定，采用WYT-A 型手持糖度計(jì)。可滴定酸含量的測(cè)定，參照GB/T12456—2008《食品中總酸的測(cè)定》中的方法，以檸檬酸計(jì)測(cè)定?？偡雍康臏y(cè)定，采用Folin-Ciocalteu法[5]?？偦ㄉ蘸康臏y(cè)定，采用pH 示差法[6]，利用花色苷及黃酮的結(jié)構(gòu)特性，當(dāng)pH=1.0 時(shí)，510 nm 處二者均有最大吸收峰，而當(dāng)pH=4.5 時(shí)，花色苷轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)色查爾酮形式，在510 nm 處無(wú)吸收，用示差法計(jì)算溶液中總花色苷含量。

1.2.4 果實(shí)抗氧化系統(tǒng)相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)為 3 次重復(fù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，采用Excel 2016 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，用DPS 7.05軟件進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同類(lèi)型黑莓品種葉片的葉綠素含量

不同類(lèi)型黑莓品種葉片的葉綠素含量的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，直立類(lèi)型黑莓品種植株葉片中葉綠素a、葉綠素b 及總?cè)~綠素含量均高于半直立和蔓生類(lèi)型；3 個(gè)品種中，‘薩尼’葉綠素含量最高，其次為‘納瓦荷’‘喬克多’。半直立類(lèi)型中，‘卡伊娃’的總?cè)~綠素含量顯著較低，其他3 個(gè)品種均值在1.75 mg/g 左右。蔓生類(lèi)型的2 個(gè)品種間有顯著差異，‘黑布特’總?cè)~綠素含量顯著較高，僅次于直立類(lèi)型的3 個(gè)品種。除個(gè)別品種外，葉綠素a 在各類(lèi)型的品種之間的差異不顯著，葉綠素b 的含量差異顯著，即葉綠素總量的差異主要體現(xiàn)在葉綠素b 含量的差異上。

2.2 不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)的糖含量

不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)中各種糖分含量的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，各類(lèi)型品種之間，果實(shí)中總糖含量差異顯著。其中，‘喬克多’和‘寧植4號(hào)’的含量最高，口感較佳；其次是‘納瓦荷’‘三冠王’‘薩尼’和‘黑布特’。各品種間蔗糖、葡萄糖和果糖含量亦呈現(xiàn)顯著差異。在9 個(gè)品種中，‘納瓦荷’和‘三冠王’蔗糖含量均較高；‘寧植4號(hào)’‘喬克多’和‘納瓦荷’的葡萄糖含量均較高；‘喬克多’的果糖含量顯著高于其它品種，為116.75 mg/g；‘寧植4號(hào)’的果糖含量在半直立類(lèi)型中較高。可以看到，總糖含量的差異主要體現(xiàn)在果糖含量上。

2.3 不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)的蔗糖磷酸合成酶（SPS）活性

不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)中的蔗糖磷酸合成酶活性如圖1所示。從圖1中可以看到，各類(lèi)型內(nèi)品種間蔗糖磷酸合成酶（SPS）活性差異顯著，從類(lèi)型間總體來(lái)看，直立類(lèi)型的SPS 活性相對(duì)較低。在所有品種中，半直立類(lèi)型的‘三冠王’和蔓生類(lèi)型的‘寶森’的SPS 活力與其它品種相比差異顯著，處在較高的水平，分別為756.63 和731.79 μg/(min·g)。‘寧植4號(hào)’和‘喬克多’的SPS 活性最低，它們的糖含量較高，二者之間是否存在關(guān)聯(lián)，值得探討。

表1 不同類(lèi)型黑莓品種葉片的葉綠素含量Table1 Chlorophyll content in leaves of different cultivars of blackberry

表2 不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)的糖含量Table2 Sugar content in fruits of different cultivars of blackberry

2.4 不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)的可溶性固形物與總酸含量

可溶性糖為水果中可溶性固形物的主要成分，因此常用可溶性固形物近似地表述為可溶性糖含量。不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)中可溶性固形物與總酸含量的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。從表3中可以看出，除直立栽培類(lèi)型中的‘納瓦荷’和‘喬克多’的可溶性固形物含量顯著較高外，其他7 個(gè)品種大致相當(dāng)，其中‘寶森’可溶性固形物最低僅為10.27%。總酸含量表現(xiàn)為直立類(lèi)型品種普遍大于半直立類(lèi)型品種，蔓生類(lèi)型‘黑布特’及‘寶森’最高，平均達(dá)到半直立類(lèi)型的2 倍左右，高于直立栽培類(lèi)型的2.6 倍左右。固酸比是反映果實(shí)甜度的一個(gè)重要指標(biāo)，數(shù)值越大表示果實(shí)口感越甜。由表3可知，直立栽培類(lèi)型固酸比顯著高于其他兩種栽培類(lèi)型，其中‘喬克多’與‘納瓦荷’固酸比最高，口感最甜；半直立栽培類(lèi)型的四個(gè)品種的固酸比較高，均大于10，口感較好；蔓生栽培類(lèi)型中2 個(gè)品種，固酸比較低，口感偏酸。

圖1 不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)的蔗糖磷酸合成酶活性Fig.1 Activity of sucrose phosphate synthase in fruits of different blackberry cultivars

表3 不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)的可溶性固形物與總酸含量Table3 Soluble solids and total acid contents in fruits of different blackberry cultivars

2.5 不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)的多酚與花色苷含量

不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)中多酚與花色苷含量的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。從表4中可以看出，‘寧植4號(hào)’及‘寶森’的果實(shí)多酚含量顯著低于其他品種，其余品種無(wú)顯著差異。花色苷含量差異顯著，‘納瓦荷’含量高于其余品種，為12.91 mg/kg，直立類(lèi)型的3 個(gè)品種均高于半直立類(lèi)型，蔓生類(lèi)型的2 個(gè)品種的花色苷含量均顯著低于其他7 個(gè)品種，與多酚含量變化相一致。綜合來(lái)看，直立類(lèi)型品種果實(shí)中花色苷含量較高，蔓生類(lèi)型品種果實(shí)中的多酚和花色苷含量均較低。

2.6 不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)的自由基與丙二醛（MDA）含量

不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)中自由基與丙二醛含量的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5。由表5可知，各品種間的果實(shí)自由基與MDA 含量差異顯著，分析認(rèn)為可能與各品種生長(zhǎng)代謝水平的高低有關(guān)。直立類(lèi)型中，‘喬克多’的產(chǎn)生速率、H2O2含量和MDA 含量顯著高于其他2 個(gè)品種，在所有品種中也是處在較高的水平；半直立類(lèi)型中‘卡伊娃’和‘寧植4號(hào)’的自由基水平較高；蔓生類(lèi)型中‘黑布特’的產(chǎn)生速率、H2O2含量和MDA 含量在所有品種中最低，表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗氧化能力。

2.7 不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)的抗氧化酶活性和抗氧化物質(zhì)含量

不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)中抗氧化酶活性和抗氧化物質(zhì)含量的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表6。由表6可知，各品種間果實(shí)中SOD 酶活性差異顯著，其中最低的‘喬克多’僅為96.07 U/g，而‘寶森’最高，達(dá)到了177.22 U/g。CAT 活性除‘三冠王’‘黑布特’‘薩尼’差異顯著外，其它品種間差異不顯著，其中‘三冠王’CAT 活性?xún)H為20.81 U/g，顯著低于其他品種。各品種間的AsA 含量差異顯著，與CAT 呈現(xiàn)相反情況，其中‘薩尼’的含量最高，其次是‘三冠王’‘納瓦荷’。品種間的還原性谷胱甘肽（GSH）含量有顯著差異，其中蔓生類(lèi)型2 個(gè)品種的GSH 含量顯著低于其他栽培類(lèi)型的品種，‘薩尼’的GSH 含量最高，其余品種差異不顯著。總體來(lái)看，蔓生類(lèi)型中的‘黑布特’‘寶森’品種，各項(xiàng)指標(biāo)均處在較低的水平，生長(zhǎng)代謝水平較低。

表4 不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)的多酚與花色苷含量Table4 Contents of polyphenols and anthocyanins in fruits of different blackberry cultivars

表5 不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)的自由基與丙二醛（MDA）含量Table5 Contents of free radical and malondialdehyde in fruits of different blackberry cultivars

表6 不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)的抗氧化酶活性和抗氧化物質(zhì)含量Table6 Antioxidant enzyme activity and antioxidant content in fruits of different blackberry cultivar

2.8 不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)的可溶性蛋白含量

不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)中可溶性蛋白含量如圖2所示。從圖2中可以看出，直立栽培類(lèi)型3 個(gè)品種中，‘納瓦荷’的果實(shí)可溶性蛋白含量最高，為0.91 mg/g，其后依次為‘喬克多’‘薩尼’。半直立栽培類(lèi)型4 個(gè)品種中，‘卡伊娃’的可溶性蛋白含量顯著較低，其余3 個(gè)品種差異不顯著，均值為0.73 mg/g。所有品種中，‘納瓦荷’含量最高，除‘卡伊娃’‘黑布特’‘薩尼’蛋白含量均顯著低于其他品種外，其它品種間的差異均不顯著。

圖2 不同類(lèi)型黑莓品種果實(shí)的可溶性蛋白含量Fig.2 Soluble protein content in fruits of different blackberry cultivrs

3 討論與結(jié)論

近年來(lái)，隨著消費(fèi)者保健意識(shí)的增強(qiáng)，黑莓越來(lái)越受到人們的歡迎。但不同品種黑莓果實(shí)品質(zhì)差異較大，糖含量偏低，鮮食口感偏酸，這也是制約黑莓鮮食銷(xiāo)售的一個(gè)重要因素。因此有必要開(kāi)展黑莓果實(shí)的生理生化特性分析與評(píng)價(jià)，從而進(jìn)一步指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐。

黑莓果實(shí)內(nèi)在品質(zhì)主要由可溶性固形物、有機(jī)酸、多酚和花色苷含量等要素構(gòu)成[13]，同時(shí)糖等風(fēng)味物質(zhì)的變化也直接影響果實(shí)品質(zhì)。本研究顯示，直立栽培類(lèi)型的總蛋白含量高于其他兩個(gè)類(lèi)型，直立栽培和半直立栽培類(lèi)型黑莓果實(shí)中糖含量較高，對(duì)應(yīng)的花色苷含量也較高，果實(shí)品質(zhì)較好，顏色鮮艷，口感較甜。其中‘納瓦荷’果實(shí)可溶性固形物含量最高，含酸量較低，果實(shí)甜，風(fēng)味佳，且花色苷含量高?？寡趸允呛谳麑?shí)重要的評(píng)價(jià)指標(biāo)。GSH、AsA 等小分子物質(zhì)是植物體內(nèi)重要的抗氧化物質(zhì)，是ROS 清除系統(tǒng)中的重要保護(hù)劑，它們與CAT、SOD 等協(xié)同作用使得果實(shí)一直處于活性氧產(chǎn)生和清除的平衡狀態(tài)，從而保證了果實(shí)的正常發(fā)育直到完全成熟[14-15]?？梢钥吹?，‘薩尼’的ASA-GSH 總量為所有品種中最高，同時(shí)其SOD 活性及CAT 活性均處在較高的水平；此外，‘納瓦荷’‘喬克多’‘寧植4號(hào)’以及‘三冠王’的AsA-GSH 總量在所有調(diào)查的9 個(gè)品種中處在較高的水平，但是‘喬克多’的SOD 活性?xún)H為96.01 U/g，其MDA 含量在所有品種中最高，為3.37 ug/g，表明其氧化物質(zhì)生產(chǎn)較多。綜合來(lái)看，‘納瓦荷’‘薩尼’‘寧植4號(hào)’以及‘三冠王’表現(xiàn)出較好的抗氧化性。MDA 是膜脂過(guò)氧化的主要產(chǎn)物之一，其在植物體內(nèi)的含量與植物所受氧化壓力成正相關(guān)，可以間接反應(yīng)出細(xì)胞受損傷程度[16-17]。本研究顯示，‘黑布特’的MDA 含量處在最低的水平，其氧化產(chǎn)物含量也最少，同時(shí)其葉綠素a 含量也最高，但是其糖含量卻不高；這表明該品種光合同化產(chǎn)物可能參與合成酸的合成，增強(qiáng)了該品種抗逆性。除‘喬克多’外，其他不同類(lèi)型品種間的變化并不明顯，均處在較低的水平，這與果實(shí)中氧化物質(zhì)的清除保持動(dòng)態(tài)平衡是一致的。

糖的種類(lèi)及其含量是水果中甜味最重要的組成部分，也是評(píng)價(jià)果實(shí)品質(zhì)的重要指標(biāo)，它們決定著果實(shí)的產(chǎn)量和質(zhì)量[18]，是影響果實(shí)品質(zhì)和商品價(jià)值的主要因素之一[19]。研究表明，蔗糖、果糖和葡萄糖是黑莓果實(shí)內(nèi)主要積累的糖類(lèi)物質(zhì)[20]，其中，蔗糖是碳運(yùn)輸?shù)闹饕问剑歉叩戎参锕夂献饔玫闹饕a(chǎn)物[21]。蔗糖是果實(shí)代謝的基礎(chǔ)原料，處于果實(shí)次生代謝的上游，在植物的生長(zhǎng)發(fā)育、風(fēng)味化合物合成以及其他重要代謝過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用[22]。本研究發(fā)現(xiàn)，‘納瓦荷’的蔗糖含量最高，其次是‘三冠王’和‘寧植4號(hào)’，同時(shí)這三個(gè)品種的固形物含量也較高，作為光合作用的主要產(chǎn)物，可能是由于這三個(gè)品種具有較強(qiáng)的光合能力。研究發(fā)現(xiàn)，這3 個(gè)品種的葉綠素含量較高，特別是葉綠素b 的含量顯著高于其他品種，其次是半直立類(lèi)型中的‘寧植4號(hào)’‘三冠王’和蔓生類(lèi)型品種中的‘黑布特’，這與可溶性固形物的變化基本一致，表明其蔗糖的合成和轉(zhuǎn)化能力較強(qiáng)。此外，已有研究表明，SPS 是蔗糖合成路徑中的關(guān)鍵限速酶，在蔗糖代謝過(guò)程中蔗糖磷酸合成酶與多種酶一起發(fā)揮了重要的作用[23]，對(duì)于調(diào)節(jié)“源”“庫(kù)”關(guān)系具有重要意義。在甘蔗中，蔗糖含量與SPS 活力呈顯著的正相關(guān)關(guān)系[24]。在小麥旗葉中SPS 活性高低代表了其光合產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為蔗糖的能力[25]，但也有相關(guān)研究顯示，在番茄果實(shí)中蔗糖的積累主要受蔗糖轉(zhuǎn)化酶（Ivr）及蔗糖合成酶（SS）調(diào)控，而SPS 似乎與蔗糖積累無(wú)明顯關(guān)系[26]。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)黑莓果實(shí)中的SPS活力對(duì)蔗糖含量的影響不顯著，推測(cè)可能是由于SPS 主要促進(jìn)蔗糖在葉片中的合成，然后再運(yùn)輸?shù)焦麑?shí)等“庫(kù)”器官，因此蔗糖含量可能主要受葉片中SPS 活性的調(diào)控，而果實(shí)中SPS 可能在其他代謝過(guò)程中發(fā)揮作用。相關(guān)機(jī)制，如SPS 在黑莓蔗糖運(yùn)輸與代謝的基因表達(dá)中處于何種地位、調(diào)控蔗糖代謝的3 種酶之間存在何種互作關(guān)系等還需要進(jìn)一步開(kāi)展深入研究，比如相關(guān)基因表達(dá)分析等。

本文通過(guò)對(duì)3 種不同類(lèi)型的9 個(gè)黑莓栽培品種的生理生化特性的調(diào)查分析表明：直立栽培類(lèi)型和半直立栽培類(lèi)型的品種在南京地區(qū)均表現(xiàn)生長(zhǎng)優(yōu)良，光合能力、抗氧化能力較強(qiáng)，糖含量較高，果實(shí)品質(zhì)較好。從品種層面來(lái)看，每個(gè)品種都各有特點(diǎn)，直立類(lèi)型的‘納瓦荷’‘喬克多’和半直立類(lèi)型的‘寧植4號(hào)’果實(shí)甜、風(fēng)味佳，各項(xiàng)指標(biāo)表現(xiàn)優(yōu)異，適應(yīng)性較強(qiáng)，適宜在南京地區(qū)推廣種植。