劉錦妮，王向茹，吳海港，姬萬民

[1.信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院 信陽(yáng)市獸藥新制劑研發(fā)與創(chuàng)制工程技術(shù)研究中心,河南 信陽(yáng) 464000；2.瑞普(天津)生物技術(shù)股份有限公司，天津 空港 300308]

淮南麻鴨因原產(chǎn)于信陽(yáng)市淮河以南、大別山以北的廣大地區(qū)而得名，屬麻鴨類，中等體型，蛋肉兼用，具有適應(yīng)性強(qiáng)、抗逆性強(qiáng)、耐粗飼、早熟、繁殖力強(qiáng)、生長(zhǎng)快等特點(diǎn)，1986年經(jīng)河南省地方優(yōu)良畜禽品種編委會(huì)正式命名為淮南麻鴨，列入《河南省地方優(yōu)良畜禽品種志》，是河南省重點(diǎn)保護(hù)的優(yōu)良地方品種之一[1]?；前粪奏もc是獸醫(yī)臨床中廣泛使用的一種磺胺類抗菌藥物[2]，其具有在血液中有效藥物濃度高，與血清蛋白結(jié)合率低，易通過血腦屏障等優(yōu)點(diǎn)，在獸醫(yī)臨床上主要用于治療由革蘭陽(yáng)性及陰性菌等敏感細(xì)菌引起的腦膜炎、肺炎、子宮內(nèi)膜炎以及禽巴氏桿菌病、雛雞白痢等[3]。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)磺胺嘧啶鈉在多種動(dòng)物體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)進(jìn)行了研究，主要包括磺胺嘧啶鈉在豬、羊、牛、家禽、兔子、鴕鳥、歐洲鰻鱺等動(dòng)物體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)、血漿蛋白結(jié)合率及生物利用度等內(nèi)容[4-10]。然而由于磺胺類藥物在不同種屬動(dòng)物體內(nèi)的代謝情況存在明顯差異性，即使同一種磺胺藥物在不同種類動(dòng)物體內(nèi)代謝過程也有顯著的差異，目前磺胺嘧啶鈉在淮南麻鴨體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)的研究還未見報(bào)道。因此本試驗(yàn)通過分析磺胺嘧啶鈉在淮南麻鴨體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)特征，為獸醫(yī)臨床中的磺胺嘧啶鈉科學(xué)合理使用提供理論參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 磺胺嘧啶鈉(含量≥90%，批號(hào):170814)，由河南自然康生物技術(shù)有限公司饋贈(zèng)；磺胺嘧啶鈉標(biāo)準(zhǔn)品(98%，批號(hào)：2089190),購(gòu)自上海晶抗生物工程有限公司；10%磺胺嘧啶鈉注射液(10%，批號(hào)：220381634),購(gòu)自四川恒通動(dòng)物藥業(yè)有限公司；三氯醋酸、亞硝酸鈉、氫氧化鈉(均為分析純)，均購(gòu)自上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；氨基磺酸銨(分析純)，購(gòu)自上海易恩化學(xué)技術(shù)有限公司；麝香草酚(分析純)，購(gòu)自成都市科龍化工試劑廠。

1.2 儀器 紫外可見分光光度計(jì)：北京普析分析儀器有限公司；JY2002型電子天平：上海精密科學(xué)儀器有限公司。

1.3 動(dòng)物分組、給藥與采樣

1.3.1 試驗(yàn)動(dòng)物 16只健康成年淮南麻鴨，100日齡左右，體重1.5～2.3 kg，雌雄各半，試驗(yàn)前按常規(guī)飼養(yǎng)1周，飼喂不含抗菌藥物的全價(jià)日糧，自由飲水。

1.3.2 給藥 16只健康成年淮南麻鴨，隨機(jī)分成2組，每組8只，雌雄各半，其中一組于翼下靜脈緩慢注射單劑量100 mg/(kg·bw)磺胺嘧啶鈉注射液，另一組按100 mg/(kg·bw)進(jìn)行口服給藥磺胺嘧啶鈉溶液。

1.3.3 血漿樣品采集 給藥后，剝離出翅下靜脈血管，分別于0.08、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、5、6、8、12 h和24 h采血1 mL左右，置于已加入肝素鈉的離心管中，以3 000 r/min離心5 min，取上清液于-20 ℃保存待測(cè)。

1.4 血漿樣品的處理 取待測(cè)血樣0.6 mL加入到含有20%三氯乙酸2 mL的離心管中，充分搖勻，3 000 r/min 離心5 min；取上清液加入0.5%亞硝酸鈉0.5 mL，充分搖勻；再加入0.5%麝香草酚1 mL搖勻。于530 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行檢測(cè)分析。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線 向6支10 mL具塞離心管中各加入0.6 mL空白血漿，添加適量磺胺嘧啶鈉標(biāo)準(zhǔn)工作液，使得的藥物濃度依次為5、10、20、50、100 μg/mL和200 μg/mL血漿樣品。按照血漿樣品處理方法處理后進(jìn)行分析。以磺胺嘧啶鈉吸光度(A)為橫坐標(biāo)，磺胺嘧啶鈉在樣品中的濃度(C)為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出回歸方程以及相關(guān)系數(shù)(r)。

1.6 方法學(xué)驗(yàn)證 取空白血漿，添加適量磺胺嘧啶鈉標(biāo)準(zhǔn)液，配制成含磺胺嘧啶鈉濃度分別為100、20 μg/mL和5 μg/mL 的血漿樣品，按照血漿的處理方法處理分析，每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)樣品以測(cè)定日內(nèi)變異系數(shù)，連續(xù)重復(fù)3 d以測(cè)定日間變異系數(shù)。

1.7 統(tǒng)計(jì)分析 藥物動(dòng)力學(xué)模型采用3P97藥動(dòng)學(xué)軟件進(jìn)行擬合；藥時(shí)曲線圖和消除動(dòng)態(tài)圖采用Excel軟件繪制；方法學(xué)驗(yàn)證考察數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0軟件分析處理。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍 本試驗(yàn)所建立的血漿標(biāo)準(zhǔn)工作曲線相關(guān)性好，線性范圍5～200 μg/mL，回歸方程C=180.8A-15.97，相關(guān)系數(shù)為0.990以上。

圖1 磺胺嘧啶鈉在血漿中標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Calibration curve of SD-Na in plasma

2.2 方法學(xué)結(jié)果 參照1.5所描述的方法，在淮南麻鴨血漿中添加藥物，所測(cè)回收率及精密度數(shù)據(jù)見表1。采用本方法，磺胺嘧啶鈉血漿中的回收率為77.64%～90.03%，日內(nèi)變異系數(shù)均小于5%，日間變異系數(shù)均小于10%，方法具有較好的精密度。

表1 淮南麻鴨空白血漿中添加磺胺嘧啶鈉的方法學(xué)考察結(jié)果Table 1 The result of method validation of SD-Na in Huainan patridge duck plasma (n=3)

2.3 藥物動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)分析 分別給淮南麻鴨以100 mg/(kg·bw)的劑量單次口灌和靜脈注射磺胺嘧啶鈉以后，血藥濃度的數(shù)據(jù)見表2，藥物在血漿中的藥-時(shí)曲線見圖2。經(jīng)3P97藥動(dòng)學(xué)軟件房室模型的模擬，其中有吸收二室模型的赤池信息量準(zhǔn)則(AIC)和加權(quán)平方和(WSS)最小。所得的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表3，靜脈注射給藥后，其血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)均符合無吸收二室開放模型。其理論方程為C=52.91e-1.12t+72.86e-0.22t。該藥物經(jīng)靜脈注射后分布很快，分布半衰期(t1/2α)為(0.62±0.08)h；消除半衰期(t1/2β)為(3.21±0.98)h；藥時(shí)曲線下面積(AUC)為(385.14±13.52) (μg/mL)·h；口服磺胺嘧啶鈉后其血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)均符合吸收二室開放模型，其理論方程為C=80.66e-0.15t+34.70e-0.10t-115.36e-0.48t。該藥物經(jīng)口服后吸收迅速、分布快，分布半衰期(t1/2α)為(4.61±0.94)h；消除半衰期(t1/2β)為(6.66±0.74)h；藥時(shí)曲線下面積(AUC)為(395.06±24.03)(μg/mL)·h；達(dá)峰時(shí)間(Tp)為(3.71±0.84)h；峰濃度(Cmax)為(49.97±5.66)μg/mL。

表3 磺胺嘧啶鈉在淮南麻鴨體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)Table 3 Pharmacokinetic parameters of sulfadiazine sodium in Huainan patridge duck

表2 磺胺嘧啶鈉在淮南麻鴨體內(nèi)的血藥濃度Table 2 SD concentrations in plasma following oral administration and intravenous injection in Huainan patridge duck plasma (n=8)

3 討論

目前針對(duì)磺胺嘧啶等磺胺類藥物分析方法主要有微生物法、免疫分析方法、分光光度法、酶聯(lián)免疫分析法及色譜法等，其中色譜法應(yīng)用最為廣泛，而分光光度法則是一種較為成熟、快捷、高效的方法[11-13]。本試驗(yàn)利用磺胺嘧啶鈉在酸性條件下能夠發(fā)生重氮化反應(yīng)的特點(diǎn)，建立了分光光度法測(cè)定淮南麻鴨血漿中磺胺嘧啶鈉的含量，該方法測(cè)定方法簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)性好，相關(guān)系數(shù)達(dá)0.990以上，平均回收率在75%以上；日內(nèi)變異系數(shù)小于5%，日間變異系數(shù)小于10%，能夠滿足樣品檢測(cè)及分析的要求。

種屬不同等因素影響磺胺嘧啶的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)，文獻(xiàn)報(bào)道磺胺嘧啶鈉在不同動(dòng)物體內(nèi)的半衰期不同，其中在豬體內(nèi)半衰期為0.5～0.8 h、綿羊體內(nèi)的半衰期為4.03 h，狗為9.9 h，家禽類中的鵝為5.68 h、雞為4.5 h、鴨為5.88 h。而在歐洲鰻鱺體內(nèi)的半衰期為104.27 h[14]。本試驗(yàn)中靜脈注射和口服消除半衰期(t1/2β)分別為3.21 h和 6.66 h，和上述文獻(xiàn)報(bào)道存在一定差異，其原因可能是由物種間的差異、動(dòng)物年齡、性別或營(yíng)養(yǎng)狀況不同造成的。此外給藥途徑、制劑工藝等條件同樣會(huì)影響磺胺嘧啶鈉的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)，張曉曉等報(bào)道，單次口服復(fù)方磺胺嘧啶混懸液在肉雞體內(nèi)的半衰期為3.82 h，參比制劑的半衰期為3.09 h[15]。而本試驗(yàn)中不同給藥途徑，其藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)也不相同，這可能和血漿蛋白結(jié)合率及腎小管重吸收有關(guān)。此外文獻(xiàn)中報(bào)道磺胺類藥動(dòng)學(xué)研究多為一室開放模型[16]。本試驗(yàn)中磺胺嘧啶鈉在淮南麻鴨體內(nèi)血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)符合二室開放模型，其中靜脈給藥為無吸收二室開放模型，口服給藥為有吸收二室開放模型，這同樣表明磺胺嘧啶鈉的動(dòng)力學(xué)模型對(duì)動(dòng)物有種屬差異和分布差異。