華?，|,謝彥海,陳紅兵

(1.南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江西南昌 330047;2.南昌大學(xué)食品學(xué)院,江西南昌 330047;3.南昌大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)中心,江西南昌 330006;4.南昌大學(xué)中德聯(lián)合研究院,江西南昌 330047)

水產(chǎn)種類繁多,因其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高而在全球被廣泛食用,但其體內(nèi)的過敏原蛋白能夠引起嚴(yán)重的過敏反應(yīng)。水產(chǎn)品過敏中由甲殼類引起的過敏最為普遍[1]。而蝦類由于營(yíng)養(yǎng)豐富、口感極佳,深受喜愛,故在甲殼類過敏中也有顯著貢獻(xiàn)[2]。常見的蝦類過敏癥狀有蕁麻疹、血管性水腫,也會(huì)影響到胃腸道及呼吸系統(tǒng),嚴(yán)重者甚至發(fā)生過敏性休克[3]。源自甲殼類的過敏原有多種,有原肌球蛋白(Tropomyosin)、精氨酸激酶(Arginine kinase)、肌球蛋白輕鏈(Myosin light chain)和肌鈣蛋白(Troponin)等,其中原肌球蛋白是主要的過敏原,通常能引起甲殼類動(dòng)物之間以及甲殼類與其他無脊椎動(dòng)物之間的交叉反應(yīng)[4]。日本沼蝦(Macrobrachiumnipponense),又稱河蝦,廣泛分布于中國(guó)等亞洲國(guó)家淡水低鹽度河口地區(qū),它被認(rèn)為是中國(guó)重要的漁業(yè)資源[5]。然而,目前國(guó)內(nèi)外鮮有對(duì)日本沼蝦原肌球蛋白抗原表位的分析研究。

抗原表位是致敏蛋白中決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán),是過敏原與抗體結(jié)合的物質(zhì)基礎(chǔ)。表位可根據(jù)結(jié)構(gòu)分為線性表位和構(gòu)象表位;也可根據(jù)其結(jié)合受體細(xì)胞分為T細(xì)胞表位與B細(xì)胞表位[6]。B細(xì)胞表位可以是線性表位或構(gòu)象表位,而T細(xì)胞表位一般為線性表位。在加工過程中蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)變化,會(huì)導(dǎo)致抗原表位被破壞或者被掩蓋,從而致敏性降低。一些加工方法例如酶解、超高壓等會(huì)使部分食物致敏性降低甚至消失[7]。因此,針對(duì)過敏原表位的研究對(duì)于過敏原消減技術(shù)以及開發(fā)低致敏食品尤為重要。

研究表位的方法有多種,許多傳統(tǒng)的表位鑒定方法經(jīng)費(fèi)成本較高,時(shí)間也較長(zhǎng)。生物信息學(xué)的興起拓展了對(duì)食物過敏原的研究方法,通過計(jì)算機(jī)技術(shù)與生物學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)的結(jié)合,對(duì)過敏原蛋白的表位、同源性、過敏原之間的交叉反應(yīng)性以及過敏原刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的能力進(jìn)行預(yù)測(cè)[8]。

原肌球蛋白的空間結(jié)構(gòu)較簡(jiǎn)單,多數(shù)研究認(rèn)為在原肌球蛋白引起的免疫反應(yīng)中起主導(dǎo)作用的是線性表位[9],對(duì)其抗原表位的報(bào)道也多為線性表位。因此,本研究利用生物信息學(xué)技術(shù)對(duì)日本沼蝦原肌球蛋白進(jìn)行分析并預(yù)測(cè)其抗原表位,以期為基于過敏原表位靶點(diǎn)的檢測(cè)提供依據(jù),為針對(duì)抗原表位的過敏原性消減提供新靶標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 材料

通過NCBI蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www. ncbi. nlm. nih. gov/protein/)檢索日本沼蝦原肌球蛋白的氨基酸序列(登錄號(hào)為AHJ10946.1)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 日本沼蝦B細(xì)胞線性表位的預(yù)測(cè) 利用SOPMA[10](https://npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl?page=npsa_sopma.html)對(duì)日本沼蝦原肌球蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)。利用DNAStar軟件中Protean模塊,導(dǎo)入氨基酸序列,分別采用Chou-Fasman[11]法及Garnier-Robson法分析日本沼蝦原肌球蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu),Karplus-Schulz[12]法分析柔韌性(Flexibility),Kyte-Doolittle[13]法分析親水性(Hydrophilicity)、Emini[14]法分析表面可及性(Surface probability)、Jameson-Wolf[15]法分析抗原性指數(shù)(Antigenic index),從蛋白質(zhì)多方面性質(zhì)綜合分析預(yù)測(cè)表位。分別在BepiPred 1.0 Server[16](http://www. cbs. dtu. dk/services/BepiPred-1.0/)和ABCpred[17](http://crdd.osdd.net/raghava/abcpred/ABC_submission. html)兩個(gè)網(wǎng)站中輸入蛋白序列來預(yù)測(cè)B細(xì)胞表位。綜合分析不同方法的預(yù)測(cè)結(jié)果篩選出可能的B細(xì)胞線性表位。

1.2.2 日本沼蝦T細(xì)胞表位的預(yù)測(cè) 在SYFPEITHI[18](http://www.syfpeithi.de/)網(wǎng)站的表位預(yù)測(cè)界面選擇合適的MHC類型及肽段長(zhǎng)度,輸入氨基酸序列提交后根據(jù)得分預(yù)測(cè)T細(xì)胞表位。應(yīng)用NetMHCII 2.3 Server[19](http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHCII/)與NetMHCIIpan 3.2 Server[20](http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHCIIpan/)兩個(gè)服務(wù)器,輸入氨基酸序列并選擇相應(yīng)基因型及氨基酸長(zhǎng)度,預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)與MHC-Ⅱ類分子的結(jié)合能力,從而預(yù)測(cè)出T細(xì)胞表位。綜合分析幾個(gè)服務(wù)器的預(yù)測(cè)結(jié)果篩選出可能的T細(xì)胞表位。

1.2.3 日本沼蝦與其它種類原肌球蛋白序列比對(duì) 通過NCBI蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www. ncbi. nlm. nih.gov/protein/)檢索8種水產(chǎn)類原肌球蛋白的氨基酸序列,并利用ClustalX軟件對(duì)這些不同種間的序列進(jìn)行比對(duì)。褐美對(duì)蝦(Penaeusaztecus),登錄號(hào)為AAZ76743.1;中國(guó)對(duì)蝦(Penaeuschinensis),登錄號(hào)為ADA70137.1;斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeusmonodon),登錄號(hào)為AAX37288.1;南美白對(duì)蝦(Penaeusvannamei),登錄號(hào)為ACB38288.1;刀額新對(duì)蝦(Metapenaeusensis),登錄號(hào)為AAA60330.1;鋸緣青蟹(Scyllaserrata),登錄號(hào)為ABS12233.1;章魚(Octopusvulgaris),登錄號(hào)為BAE54433.1;太平洋牡蠣(Crassostreagigas),登錄號(hào)為BAH10152.1。

2 結(jié)果與分析

2.1 日本沼蝦原肌球蛋白B細(xì)胞線性表位預(yù)測(cè)

2.1.1 二級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)結(jié)果 從SOPMA對(duì)日本沼蝦原肌球蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)中發(fā)現(xiàn),該蛋白質(zhì)以α-螺旋(Alpha helix)結(jié)構(gòu)為主,伴隨少許無規(guī)則卷曲(Random coil)結(jié)構(gòu)(圖1A)。通過DNAStar軟件中Protean模塊中的兩種方法對(duì)蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)(圖1B),發(fā)現(xiàn)Garnier-Robson法得到的結(jié)果與前者幾乎一致,而Chou-Fasman法結(jié)果表明還存在一小部分β-轉(zhuǎn)角(Beta turn)結(jié)構(gòu)。有研究表明原肌球蛋白是兩個(gè)α-螺旋多肽鏈相互纏繞形成的超螺旋結(jié)構(gòu)[21]。由此可見,預(yù)測(cè)得到的二級(jí)結(jié)構(gòu)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。在蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)中,α-螺旋一般位于蛋白質(zhì)內(nèi)部,不易與抗體結(jié)合,β-轉(zhuǎn)角與無規(guī)則卷曲多位于蛋白質(zhì)表面,更容易與抗體結(jié)合,有較大可能成為表位[22]。因此,不能通過日本沼蝦原肌球蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)出表位,而需要結(jié)合親水性、抗原指數(shù)等其他性質(zhì)綜合分析。

圖1 通過SOPMA與Protean預(yù)測(cè)的日本沼蝦原肌球蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)

2.1.2 基于Protean的預(yù)測(cè)結(jié)果 應(yīng)用DNAStar的Protean預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)結(jié)果如圖2所示,圖2中顯示了蛋白質(zhì)的親水性、柔韌性、抗原指數(shù)和表面可及性。從圖2中可以發(fā)現(xiàn)該蛋白質(zhì)親水性非常高,幾乎整個(gè)蛋白質(zhì)的親水指數(shù)>0,蛋白質(zhì)的親水基團(tuán)多位于蛋白質(zhì)表面,更容易形成與抗體等結(jié)合的抗原表位;柔韌性分析結(jié)果顯示該蛋白質(zhì)柔韌性區(qū)域較多且范圍較大,由于具有柔韌性的區(qū)域發(fā)生改變的幾率較高,容易與抗體契合,形成表位的可能性較大;從抗原指數(shù)結(jié)果而言,該蛋白質(zhì)大部分區(qū)域抗原指數(shù)>0,抗原指數(shù)較高更容易形成表位;對(duì)表面可及性進(jìn)行分析,以表面可及性指數(shù)>1作為選擇標(biāo)準(zhǔn),這些區(qū)域呈現(xiàn)于蛋白質(zhì)表面,具有與抗體結(jié)合的可能性,更易形成表位[23]。綜合考慮,預(yù)測(cè)出的日本沼蝦原肌球蛋白B細(xì)胞線性表位如表1所示。

圖2 通過Protean預(yù)測(cè)的日本沼蝦原肌球蛋白的結(jié)果

表1 通過Protean預(yù)測(cè)的日本沼蝦原肌球蛋白表位

2.1.3 基于BepiPred的預(yù)測(cè)結(jié)果 BepiPred 1.0 server采用了隱馬爾可夫模型和傾向標(biāo)度法,結(jié)合氨基酸性質(zhì)進(jìn)行表位預(yù)測(cè),表位分配的分?jǐn)?shù)閾值設(shè)置為默認(rèn)值(0.35),得分高于0.35則被認(rèn)為是可能的B細(xì)胞線性表位[22,24]。BepiPred預(yù)測(cè)日本沼蝦原肌球蛋白中所有得分高于0.35的區(qū)域序列如表2,可以發(fā)現(xiàn)預(yù)測(cè)區(qū)域平均分布在整個(gè)蛋白序列上。

表2 通過BepiPred預(yù)測(cè)的日本沼蝦原肌球蛋白表位

2.1.4 基于ABCpred的預(yù)測(cè)結(jié)果 ABCpred基于標(biāo)準(zhǔn)前饋與遞歸神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)開發(fā)[24]。運(yùn)用700個(gè) B細(xì)胞表位和700個(gè)最大長(zhǎng)度為20的非B細(xì)胞表位的隨機(jī)肽的數(shù)據(jù)庫(kù),在不同的輸入窗口長(zhǎng)度和隱藏單元下對(duì)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行了訓(xùn)練和測(cè)試,經(jīng)交叉驗(yàn)證,結(jié)果顯示遞歸神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)及窗口長(zhǎng)度為16時(shí)準(zhǔn)確度達(dá)到65.93%[17]。選擇16個(gè)氨基酸的長(zhǎng)度以及閾值0.7作為標(biāo)準(zhǔn)來篩選表位。預(yù)測(cè)的B細(xì)胞表位根據(jù)訓(xùn)練后的遞歸神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)得到的分?jǐn)?shù)進(jìn)行排序,肽得分越高,作為表位的概率越高。所有得分高于閾值的肽排列如表3。

表3 通過ABCpred預(yù)測(cè)的日本沼蝦原肌球蛋白表位

2.1.5 綜合分析B細(xì)胞線性表位 B細(xì)胞線性表位預(yù)測(cè)通常是依據(jù)氨基酸序列信息,分析二級(jí)結(jié)構(gòu)、親水性、柔韌性、表面可及性、序列保守性、殘基失序等,利用機(jī)器學(xué)習(xí)方法對(duì)Bcipep、AntiJen等數(shù)據(jù)集進(jìn)行訓(xùn)練,將蛋白質(zhì)的氨基酸序列輸入模型中進(jìn)行鑒定[24-25]。綜合Protean、BepiPred以及ABCpred的預(yù)測(cè)結(jié)果,將重復(fù)區(qū)域作為潛在抗原表位,得到了共有的10個(gè)潛在B細(xì)胞線性抗原表位,分別是21RADTLEQQNKEANN34、37EKTEEEIRTTQKKMQQ52、71LEEKEKA77、99LERSEERLN107、119AADESER125、134SLSDEER140、158ADRKYDE164、177ERAEERAETG186、210SEEKANQREEAYKE223、262NEKEKYK268。此前已有一些研究利用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)得到相應(yīng)的B細(xì)胞線性表位并進(jìn)行了驗(yàn)證。李雪嬌等[26]利用生物信息學(xué)軟件DNAStar中的Protean預(yù)測(cè)出4個(gè)CM16的B細(xì)胞線性表位,與來自CM16的3條抗消化肽段的序列進(jìn)行比對(duì)分析后,發(fā)現(xiàn)與其中2條肽段存在部分重合。Fu等[27]利用多種免疫信息學(xué)工具綜合預(yù)測(cè)得到中國(guó)對(duì)蝦原肌球蛋白與精氨酸激酶的線性表位后用Fmoc法固相合成多肽,經(jīng)間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA驗(yàn)證,準(zhǔn)確率分別高達(dá)83%與70%。由此可見,利用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)B細(xì)胞線性表位具有一定的可行性與可靠性。不過,這些方法也存在一定的局限性。表位預(yù)測(cè)工具使用的數(shù)據(jù)集不夠完善導(dǎo)致預(yù)測(cè)結(jié)果不夠精準(zhǔn),不同工具使用的算法與模型也不盡相同,致使預(yù)測(cè)結(jié)果存在一定差異,因此均不能得出標(biāo)準(zhǔn)的預(yù)測(cè)結(jié)果[24]。雖然綜合分析不同方法的預(yù)測(cè)結(jié)果可以提高預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確率,但還是需要實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。目前較為常見的方法是將預(yù)測(cè)的表位合成多肽后與過敏患者血清采用Dot-blot等方法進(jìn)行初步鑒定[27-28]。

2.2 日本沼蝦原肌球蛋白T細(xì)胞表位的預(yù)測(cè)

2.2.1 基于SYFPEITHI的預(yù)測(cè)結(jié)果 SYFPEITHI為定性分析,它采用結(jié)合基序的方法對(duì)多肽與MHC-Ⅱ類分子的結(jié)合能力進(jìn)行評(píng)分,用于篩選可能的T細(xì)胞表位[29]。在頁(yè)面選擇HLA-DRB1基因型以及15mers的氨基酸殘基長(zhǎng)度,輸入序列后可以得到預(yù)測(cè)結(jié)果。若肽段得分超過25分,則認(rèn)為其與MHC-Ⅱ類分子結(jié)合力較強(qiáng),是潛在T細(xì)胞表位[30]。預(yù)測(cè)結(jié)果如表4所示。該蛋白對(duì)表中幾種基因型都表現(xiàn)出較強(qiáng)的結(jié)合力,其中HLA-DRB1*0401基因型預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)較多的表位,因此該基因型人群對(duì)該蛋白序列表現(xiàn)出更高的敏感性。

表4 通過SYFPEITHI預(yù)測(cè)的日本沼蝦原肌球蛋白表位

2.2.2 基于NetMHCII與NetMHCIIpan的預(yù)測(cè)結(jié)果 NetMHCII和NetMHCIIpan已被證明是預(yù)測(cè)多肽與MHC-II類分子結(jié)合親和力的準(zhǔn)確率較高的方法[31]。這兩種方法都是基于來自IEDB的數(shù)據(jù)及人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò),使用NNAlign框架進(jìn)行訓(xùn)練的[32-33]。它們的主要區(qū)別之一是,NetMHCII是每個(gè)MHC分子的獨(dú)立網(wǎng)絡(luò)的集合,而NetMHCIIpan則包含一個(gè)單一的通用網(wǎng)絡(luò),可以預(yù)測(cè)已知蛋白質(zhì)序列的所有MHC分子的肽結(jié)合親和力[32]。研究者開發(fā)的NetMHCIIpan-3.2與NetMHCⅡ-2.3服務(wù)器,則將NetMHCII和NetMHCIIpan預(yù)測(cè)范圍擴(kuò)大并可以顯著地提高預(yù)測(cè)準(zhǔn)確性。MHC-Ⅱ類分子能結(jié)合長(zhǎng)度達(dá)10～28個(gè)氨基酸殘基的表位,最佳長(zhǎng)度為12～16個(gè)氨基酸殘基[34]。因此,應(yīng)用這兩個(gè)服務(wù)器,選擇中國(guó)人群中常見的HLA等位基因[35-36]以及15的肽段長(zhǎng)度進(jìn)行T細(xì)胞表位預(yù)測(cè)。Affinity(nM)<50即該肽段與MHC-II類分子結(jié)合呈強(qiáng)親和力,50

表5 通過NetMHCII與NetMHCIIpan預(yù)測(cè)的日本沼蝦原肌球蛋白表位

圖4 不同物種間原肌球蛋白序列比對(duì)及T細(xì)胞表位對(duì)比

2.2.3 綜合分析T細(xì)胞表位 外源性蛋白質(zhì)抗原一般經(jīng)抗原遞呈細(xì)胞處理后由MHC-Ⅱ類分子遞呈給T細(xì)胞[38]。因此,預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的T細(xì)胞表位可通過評(píng)估MHC-Ⅱ類分子與多肽的結(jié)合能力來實(shí)現(xiàn)。在人體中負(fù)責(zé)編碼相關(guān)分子的HLA-Ⅱ類基因主要包括DP、DQ、DR三個(gè)亞區(qū)[39]。因HLA基因組高度多態(tài)性,故選擇中國(guó)人群中常見的HLA等位基因型進(jìn)行預(yù)測(cè)。綜合SYFPEITHI、NetMHCII和NetMHCIIpan的預(yù)測(cè)結(jié)果,選取重復(fù)區(qū)域作為潛在表位,得到了共有的5個(gè)潛在T細(xì)胞抗原表位,分別是82EGEVAALNRRIQLL95、105RLNTATTKLAEAS117、165VARKLAMVEADLE177、195EELRVVGNNLKSLE208、222KEQIKTLTNKLKAA235。T細(xì)胞表位預(yù)測(cè)在基礎(chǔ)研究中可以減少工作量,降低成本,同時(shí),一些準(zhǔn)確性較高的預(yù)測(cè)工具的預(yù)測(cè)結(jié)果也能得到驗(yàn)證。伍慧妍等[30]利用NetMHCII預(yù)測(cè)得到牡蠣原肌球蛋白的T細(xì)胞表位,發(fā)現(xiàn)與前人經(jīng)實(shí)驗(yàn)鑒定的表位幾乎一致。在目前的T細(xì)胞表位預(yù)測(cè)工具中,預(yù)測(cè)多肽與MHC-Ⅱ類分子的結(jié)合位點(diǎn)和結(jié)合親和力是預(yù)測(cè)與MHC-Ⅱ類分子結(jié)合的表位的主要方法。然而大多數(shù)方法僅考慮表位的核心結(jié)合序列,而忽略了兩側(cè)氨基酸殘基及TCR對(duì)結(jié)合力的影響[29]。因此,表位預(yù)測(cè)結(jié)果可以通過合成多肽后進(jìn)行淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)等來進(jìn)一步驗(yàn)證[38]。

2.3 日本沼蝦與不同種間原肌球蛋白序列比對(duì)

2.3.1 日本沼蝦原肌球蛋白B細(xì)胞表位對(duì)比 日本沼蝦與不同物種序列比對(duì)結(jié)果如圖3。從圖3中可以發(fā)現(xiàn)這幾種原肌球蛋白序列相似度很高,蝦蟹類之間序列相似度均高于80%,而蝦蟹類與軟體動(dòng)物之間相似度為60%～80%,由此可見,原肌球蛋白具有較高的保守性。一些學(xué)者已經(jīng)鑒定出幾種水產(chǎn)原肌球蛋白的表位[27-28,40-45]。這些表位多位于保守區(qū)內(nèi),且不同種間表位有部分或完全重疊。此次預(yù)測(cè)的日本沼蝦原肌球蛋白B細(xì)胞表位也基本位于保守區(qū)內(nèi),且與已鑒定的表位均有重疊,其中預(yù)測(cè)的表位4與表位6重疊部分最多,因此該區(qū)域更有可能發(fā)生交叉反應(yīng)。

圖3 不同物種間原肌球蛋白序列比對(duì)及B細(xì)胞表位對(duì)比

2.3.2 日本沼蝦原肌球蛋白T細(xì)胞表位對(duì)比 原肌球蛋白相關(guān)的T細(xì)胞表位研究不多,然而T細(xì)胞在免疫過程中也起著重要作用。Wai等[46]合成18個(gè)重疊肽,利用肽段刺激致敏小鼠中分離出的脾細(xì)胞,通過其增殖與細(xì)胞因子的反應(yīng)鑒定T細(xì)胞表位。Ravkov等[47]綜合體外的MHC-肽結(jié)合實(shí)驗(yàn)及體內(nèi)的增殖及細(xì)胞因子釋放實(shí)驗(yàn)鑒定了17個(gè)T細(xì)胞表位。此次預(yù)測(cè)的日本沼蝦原肌球蛋白T細(xì)胞表位與已鑒定的表位均有重疊,其中表位5與鑒定表位完全一致,其他4個(gè)表位也均位于保守區(qū)。

3 結(jié)論

本研究在NCBI蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)中找到日本沼蝦原肌球蛋白的氨基酸序列,運(yùn)用DNAStar、BepiPred和ABCpred對(duì)日本沼蝦原肌球蛋白進(jìn)行B細(xì)胞線性表位預(yù)測(cè),最終定位出潛在的B細(xì)胞線性表位有10個(gè)肽段。同時(shí),應(yīng)用SYFPEITHI、NetMHCII和NetMHCIIpan分別對(duì)序列與MHC-Ⅱ類分子結(jié)合力評(píng)估,最終篩選出可能的T細(xì)胞表位有5個(gè)肽段。預(yù)測(cè)的表位與已經(jīng)鑒定的表位均有部分重疊,這可能一定程度上會(huì)導(dǎo)致交叉反應(yīng)?？傊?本研究利用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測(cè)出了日本沼蝦原肌球蛋白的B細(xì)胞線性表位及T細(xì)胞表位,將有助于對(duì)日本沼蝦過敏原的認(rèn)識(shí),為未來基于表位的相關(guān)研究提供了新的研究靶標(biāo)。另外,日本沼蝦原肌球蛋白的準(zhǔn)確的表位以及優(yōu)勢(shì)表位還有待實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確證。