王瑾

乙型流感作為一種傳播性極廣的病毒，有明顯可區(qū)分的季節(jié)性，一般在冬季11 月份到來(lái)年2 月份期間，發(fā)病率呈直線上升，而且在人口密集的地區(qū)，流感的發(fā)病率也明顯增高［1］。流感病毒是僅次于呼吸道合胞病毒的RNA 病毒，是一種常見(jiàn)的病毒病原體?，F(xiàn)在臨床上檢測(cè)乙型流感病毒常用的是熒光定量RT-PCR，該方法操作簡(jiǎn)單，診斷符合率高［2］，以往臨床上采用的是免疫學(xué)檢測(cè)，因?yàn)檫@種方法操作繁瑣，準(zhǔn)確度低逐漸被放棄，本次研究就是探討用熒光定量RT-PCR 快速檢測(cè)乙型流感病毒核酸的臨床價(jià)值，具體情況如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年11 月～2020 年1 月間本院乙型流感患者104 例作為此次研究的對(duì)象，所有病例均采集咽拭子，均符合乙型流感的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且此次研究獲得了倫理委員會(huì)的同意與支持。根據(jù)對(duì)乙型流感病毒檢測(cè)方式的不同分為對(duì)照組和觀察組，每組52 例。

1.2 方法 標(biāo)本的采集：操作者在患者同一側(cè)的鼻處采集，用無(wú)菌的棉棒進(jìn)行采集，操作要嚴(yán)格按照標(biāo)本采集的要求進(jìn)行，待標(biāo)本采集完成后再進(jìn)行檢測(cè)［3］。

1.2.1 對(duì)照組采用免疫學(xué)檢測(cè)。采用抗原有血凝素和神經(jīng)氨酸酶的檢測(cè)方法。

1.2.2 觀察組采用熒光定量RT-PCR 檢測(cè)。提取乙型流感病毒采用上海之江核酸自動(dòng)提取儀EX2400，①操作者將采集好的標(biāo)本放置到振蕩器內(nèi)，震蕩10 min；②然后拿出預(yù)裝板，把6 μl RNA 沉劑和300 μl 標(biāo)本放入相應(yīng)的板槽內(nèi)；③再把預(yù)裝板放入核酸自動(dòng)提取儀的卡槽內(nèi)，設(shè)置，開(kāi)始運(yùn)行；④待運(yùn)行結(jié)束后再取出預(yù)裝板，進(jìn)行檢測(cè)或者放置在-20℃的環(huán)境下保存；⑤配制熒光定量RT-PCR 檢測(cè)［4］。

1.3 觀察指標(biāo) ①對(duì)比兩組的檢測(cè)敏感性，敏感性=真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性+假陰性)×100%。②對(duì)比兩組的檢測(cè)時(shí)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組的檢測(cè)敏感性對(duì)比 觀察組的檢測(cè)敏感性為98.08%，高于對(duì)照組的82.69%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組的檢測(cè)敏感性對(duì)比［n(%)］

2.2 兩組的檢測(cè)時(shí)間對(duì)比 觀察組的檢測(cè)時(shí)間為(11.2±2.1)min，短于對(duì)照組的(17.5±2.4)min，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組的檢測(cè)時(shí)間對(duì)比(，min)

表2 兩組的檢測(cè)時(shí)間對(duì)比(，min)

注：與對(duì)照組對(duì)比，aP＜0.05

3 討論

乙型流感主要是由流感病毒引起，屬于呼吸系統(tǒng)疾病。當(dāng)患者患有乙型流感時(shí)，常會(huì)有全身乏力、腰酸背痛、高熱以及呼吸道癥狀，嚴(yán)重影響患者正常的工作與生活，而且該病還有極強(qiáng)的傳染性，傳染速率極快，身體素質(zhì)低下的人極有可能被傳染［5］。這種病毒在人體的潛伏期較短，致病因素強(qiáng)，近年來(lái)就有學(xué)者提出用熒光定量RT-PCR 檢測(cè)乙型感染病毒，熒光定量RT-PCR 檢測(cè)相比傳統(tǒng)RT-PCR 檢測(cè)來(lái)說(shuō)，有敏感性更高、準(zhǔn)確度更高、更干凈衛(wèi)生、更節(jié)省實(shí)驗(yàn)周期等優(yōu)點(diǎn)，而且操作簡(jiǎn)單［6］。該方法的檢測(cè)原理就是在PCR 的反應(yīng)中加入了熒光基因，然后利用熒光信號(hào)監(jiān)測(cè)產(chǎn)物的數(shù)量，最后定量分析根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的模板。所有的操作過(guò)程中都應(yīng)在密封的封閉管中進(jìn)行，由于操作環(huán)境有所限制，避免了很多的交叉感染，整個(gè)操作過(guò)程干凈整潔，不破壞原有的結(jié)果，提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度，對(duì)流感病毒核酸的檢測(cè)，可以知道不同的毒株有不同的基因，從而可以知道用核酸檢測(cè)具有更快更準(zhǔn)的優(yōu)點(diǎn)。而在以往臨床上采用的免疫學(xué)檢測(cè)方法也分為傳統(tǒng)免疫學(xué)檢測(cè)和快速免疫學(xué)檢測(cè)。傳統(tǒng)免疫學(xué)檢測(cè)最常用的方法就是紅細(xì)胞凝集和凝集抑制試驗(yàn)，該方法是醫(yī)學(xué)上最常用的用來(lái)診斷流感病毒感染的方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確度高，且操作簡(jiǎn)單，但是不能發(fā)現(xiàn)未知的病毒感染，而且要求有熟練的技能操作；快速免疫學(xué)檢測(cè)最常見(jiàn)的方法是膠體金免疫層析，這是一種新型的檢測(cè)方法，利用了抗原和抗體的反應(yīng)原理，把膠體金定為檢測(cè)的標(biāo)記物，檢測(cè)速度快，操作容易，但該方法局限性大，準(zhǔn)確度和特異度低［7］。本次研究結(jié)果顯示，觀察組的檢測(cè)敏感性高于對(duì)照組，檢測(cè)時(shí)間短于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

綜上所述，熒光定量RT-PCR 檢測(cè)乙型流感病毒核酸可以明顯提高對(duì)乙型流感病毒的檢測(cè)敏感性，且檢測(cè)時(shí)間短于免疫學(xué)檢測(cè)，值得在臨床上大力推廣。